基于新型分子信標信號放大技術檢測腫瘤相關基因的研究.pdf

1、癌癥是嚴重危害人類健康和生命的重要疾病。其生長迅速、耗能大、易轉移，難以徹底治愈。治療癌癥的關鍵因素是在其早期階段對其進行精確的診斷并及時采取有效干預措施。癌癥是基因變異疾病，在早期階段準確捕獲這些變異信息對癌癥的早期診斷具有重要的臨床價值，伴隨分子生物學技術的發(fā)展，使利用分子生物學方法早期檢測腫瘤變異基因成為可能。傳統(tǒng)的腫瘤核酸標志物檢測方法存在靈敏性差、成本高、操作復雜、對病人造成創(chuàng)傷等缺陷，因此亟待開發(fā)出易于操作、成本低、高靈敏、

2、無創(chuàng)的早期腫瘤診斷技術。因核酸探針具有易于合成、易于修飾、生物兼容性好、具有高效的信號傳導機制等優(yōu)點，在腫瘤檢測及藥物靶向運輸領域引起了廣泛關注?；谝陨险撌?，本研究構建了基于核酸探針的信號放大傳感系統(tǒng)用于檢測p53基因和miR-21等腫瘤相關基因。
　　第一章構建了基于回文的多功能分子信標信號放大系統(tǒng)用于檢測p53基因。由于傳統(tǒng)的基于酶的等溫擴增技術中，除了識別元件和目標分子外，引物、模板、熒光報告基團也是必不可少，這樣既使檢測

3、繁瑣也增加了檢測成本。為了解決這個問題，并受到回文結構啟發(fā)，我們首次將回文序列引入分子信標3’端構建了一種基于回文的熒光修飾的多功能分子信標（簡稱 P-MB），使得一個核酸探針同時具有識別元件、引物、模板、報告基團等多種功能。我們的檢測體系在即使只有微量目標存在時只需要一個核酸探針就可以實現(xiàn)熒光信號累積放大，從而檢測出低濃度的目標分子。實驗結果證明我們的檢測系統(tǒng)具有較高的靈敏性和特異性，并能檢測實際樣本中 p53基因；此外，研究證明我們

4、的檢測系統(tǒng)可以同時、較好地檢測多個目標分子。因此，該技術在核酸或其他分子檢測方面具有很好的應用前景。
　　第二章構建了基于環(huán)輔助的的新型分子信標檢測miR-21的傳感系統(tǒng)。本研究中，我們設計的新型分子信標在人工合成的環(huán)狀DNA探針輔助下具備識別目標、引物、模板及熒光報告多種功能。該系統(tǒng)中每個環(huán)（簡稱Cir）可以與三個分子信標（MB）結合形成Cir/3MB。無目標存在時，分子信標發(fā)夾牢牢鎖住，一方面使熒光基團Cy3熒光猝滅，另一方面