沖擊流場作用下人臍靜脈內皮細胞P120連環(huán)蛋白及轉錄因子Kaiso亞細胞定位的初步研究.pdf

1、目的：
　　顱內動脈瘤形成的具體機制仍在探索。目前認為血流動力學因素所致的血管內皮細胞損傷及相關炎癥反應是顱內動脈瘤形成的始動環(huán)節(jié)。我們前期研究顯示沖擊流作用下培養(yǎng)的血管內皮細胞P120連環(huán)蛋白（P120-catenin，p120ctn）及轉錄因子Kaiso的表達均減少。本研究擬通過體外實驗觀察沖擊流作用下人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）p120ctn及Kaiso的亞細胞定位的變化，探究p120ctn及Kaiso參與調控血流動力學所

2、致內皮細胞受損的相關機制。
　　方法：
　　體外實驗培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）及運用shRNA CTNND1重組慢病毒轉染的 HUVEC。分別將上述兩種細胞種植在涂有纖維連接蛋白（fibronectin，F(xiàn)N）的普通載玻片上，待細胞90％以上融合后，將載玻片置入沖擊流作用下內皮細胞體外培養(yǎng)裝置。對照組不加載沖擊流，實驗組加載流速為500ml/min的沖擊流作用于HUVEC3小時和6小時。運用蛋白免疫印跡和免疫細胞化學

3、檢測p120ctn和Kaiso在細胞胞漿及胞核的表達情況。
　　結果：
　?。?）在沖擊流作用下培養(yǎng)6小時后，可見沖擊點處細胞的形態(tài)及細胞間粘附維持正常；其臨近區(qū)域的細胞密度明顯降低，可見細胞變圓，且大部分被沖散；而下游區(qū)域的細胞密度增大，部分細胞生長排列與沖擊流方向大致相同。
　　（2）蛋白免疫印跡分析顯示：對照組HUVEC的胞質及胞核內均表達p120ctn和Kaiso。與對照組相比，隨著沖擊流作用時間延長，實驗組H

4、UVEC內p120ctn在胞質表達下降，在胞核表達增多，具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；Kaiso在胞質內表達無明顯變化（P＞0.05），而在胞核內表達增多（P＜0.05）。運用shRNA CTNND1重組慢病毒轉染HUVEC后，與正常HUVEC對比，其p120ctn蛋白表達顯著降低，具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　?。?）免疫細胞化學顯示：對照組HUVEC內p120ctn主要在胞質內表達；Kaiso主要在胞核周圍表達，在胞核

5、內少量表達。與對照組相比，隨著沖擊流作用時間延長，p120ctn在胞質內表達減少，在胞核內表達明顯增多；Kaiso在胞核周圍表達減弱，而在胞核中表達有增多的趨勢。運用shRNA CTNND1重組慢病毒轉染HUVEC后，p120ctn表達明顯減弱，且Kaiso在細胞核表達增多的趨勢減弱。
　　結論：
　　沖擊流作用下，隨著加載沖擊流時間的延長，HUVEC內p120ctn可能發(fā)生質核穿梭，由胞質進入胞核內。敲除p120ctn基因