S-腺苷甲硫氨酸高產菌株篩選及發(fā)酵工藝優(yōu)化.pdf

1、S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine)是一種重要的生理活性物質,參與生物體內40多種生化反應。在病理狀態(tài)下,必須以活化了的S-腺苷甲硫氨酸取代L-甲硫氨酸(L-Met)作為營養(yǎng)物質支持正常代謝。本課題以高效液相色譜法作對照,建立了測定S-腺苷甲硫氨酸的紫外可見分光光度法,從45株酵母中篩選S-腺苷甲硫氨酸高產菌株并對發(fā)酵工藝進行了優(yōu)化。主要研究內容及結果如下:
　　 (1)發(fā)酵液中S-腺苷甲硫氨酸含量的紫外

2、可見分光光度法的建立。以高效液相色譜法(HPLC)為參照,研究了去核酸處理對測定結果的影響,建立了發(fā)酵液中S-腺苷甲硫氨酸紫外可見分光光度檢測方法。采用兩種檢測方法檢測得S-腺苷甲硫氨酸結果有高度相關性,回歸多項式方程為:y=-0.2676x4+1.3309x3-2.377x2+2.4362x+0.2094,R2=0.9125。在0.006g/L-0.30g/L濃度范圍內,采用紫外分光光度法檢測的吸光值與S-腺苷甲硫氨酸含量有很好的線性

3、關系,工作曲線為:y2=36.886x+0.0106,R2=0.9996,其回收率為92％-98％,相對誤差1.10％、相對標準偏差1.33％,紫外檢測法在30min內穩(wěn)定性好、精確度、準確度、靈敏度較高,可用于S-腺苷甲硫氨酸高產菌株的大批量篩選。
　　 (2)以11個屬的45株酵母菌作為出發(fā)菌株,對S-腺苷甲硫氨酸高產菌株進行篩選。不同種屬酵母發(fā)酵產S-腺苷甲硫氨酸的量存在明顯差異,45株酵母菌產S-腺苷甲硫氨酸的量分布在0

4、.01g/L-2.05g/L范圍內,其中Saccharomyces屬產S-腺苷甲硫氨酸的量顯著高于其他屬,篩選得到的兩株S-腺苷甲硫氨酸高產菌株均為Saccharomyces屬(A12A、A18A)酵母,其產量分別為1.90g/L和2.05g/L。
　　 (3)以篩選出的2株高產S-腺苷甲硫氨酸的釀酒酵母(A12A、A18A)為對象,研究了發(fā)酵條件對菌體干重和S-腺苷甲硫氨酸產量的影響,并優(yōu)化了發(fā)酵工藝條件。發(fā)酵溫度、發(fā)酵液初始