毛細管電泳——質譜聯(lián)用和樣品富集新技術的研究及其在蛋白質組學研究中的應用.pdf

1、為了解決蛋白質組學研究中存在的分離與檢測困難,本文開展了一些研究并取得進展,研究主要集中在以下幾個方面.發(fā)展了適合電噴霧質譜(ESI-MS)檢測的毛細管電泳(CE)動態(tài)涂層方法,以提高蛋白酶解肽的分離與鑒定.利用羥丙基纖維素溶液動態(tài)涂層的技術,修飾毛細管管壁,改善CE分離效率.在不影響質譜檢測的條件下,動態(tài)涂層毛細管電泳與質譜檢測聯(lián)用有效地提高了對蛋白質的鑒定能力,應用該技術對復雜蛋白質樣品的酶解產物進行了分析鑒定,取得了較為滿意的結果

2、.胰蛋白酶固定石英毛細管酶解-CE或基質輔助激光解吸—飛行時間質譜(MALDI-TOF/MS)的研究:肽譜分析是進行蛋白質鑒定和獲得蛋白質結構信息的有力工具.本文制作了胰蛋白酶固定的石英毛細管用于快速的的蛋白酶解和肽譜分析.建立了一種基于溶膠—凝膠包埋聚氯化丙基銨(PDDA)和靜電吸附原理的石英毛細管表面固定化酶的方法,該固定化酶方法具有固定條件溫和、酶表觀活性高,可反復再生等優(yōu)點.低豐度蛋白的分析與鑒定是蛋白質組學研究的重點和難點,其

3、中低豐度樣品的富集提高檢測水平的關鍵步驟.為此,我們首次開發(fā)了以納米沸石為吸附載體的樣品富集-MALDI-TOF/MS分析方法.利用納米沸石比表面積大,表面硅羥基豐富,具有良好的離子交換性能和豐富可調的表面性質的特點,對極性化合物如多肽、蛋白質進行濃縮和測定.樣品被沸石吸附后無需洗脫,直接與有機基質混合進行MALDI/MS分析.我們仔細研究了納米沸石的吸附機制、不同沸石材料對吸附性能和對MALDI效率的影響,從中篩選了兩種富集效率高、對