海藻糖合酶的高效表達及固定化.pdf

1、大腸桿菌發(fā)酵得到海藻糖合酶，催化麥芽糖轉化為海藻糖是生產(chǎn)海藻糖的一條重要途徑。尋找轉化率高、副產(chǎn)物少的海藻糖合酶是實現(xiàn)工業(yè)化的基礎，可將海藻糖合酶進行固定化，通過循環(huán)利用而降低工業(yè)化成本。
　　現(xiàn)有實驗室自行改造的產(chǎn)海藻糖合酶菌株已實現(xiàn)工業(yè)化，為了創(chuàng)造更大的價值，一方面將工業(yè)化的海藻糖合酶進行固定化，另一方面篩選更優(yōu)的基因在大腸桿菌中進行表達。
　　因此本論文主要包括兩個方面的內容:
　　1.嘗試用三種方法將海藻糖合酶

2、進行固定化，分別為無載體固定化、納米花固定化及樹脂固定化。無載體固定化加快了反應速度，相同底物濃度，反應時間縮短約一半;納米花固定化方法較為新穎，形成了納米花結構，在適宜的條件下，酶活略高于游離酶;樹脂固定化是三種方法中效果最好的，載體價格低廉，固定化方法簡單，不需要添加交聯(lián)劑，能適應高濃度底物和50℃的高溫反應條件，循環(huán)批次較多。24h為一個反應周期，連續(xù)循環(huán)使用14批，轉化率為原來的80％，且副產(chǎn)物葡萄糖的量較游離酶減少約3-7g·

3、L-1左右。為了克服載體易被攪碎的缺點，進行過柱反應，結合該固定化酶模擬了新的工藝流程圖，將副產(chǎn)物除掉，在結晶后的母液中繼續(xù)添加固定化酶反應，可大大節(jié)省工業(yè)成本。
　　2.篩選了五種不同來源的基因在大腸桿菌中進行表達，最終篩選出一個來源為彎曲高溫單孢菌Thermomonospora curvata DSM43183的海藻糖合酶，該海藻糖合酶在20mL質量分數(shù)為20％的高濃度麥芽糖底物中轉化率能達到68.7％左右，比實驗室目前菌株的