簡(jiǎn)介：四川大學(xué)博士學(xué)位論文腺病毒轉(zhuǎn)染蛋白酪氨酸磷酸酶SHP1基因?qū)θ私Y(jié)外鼻型NK/T細(xì)胞淋巴瘤生長(zhǎng)與分化影響的實(shí)驗(yàn)研究姓名王曉凌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師劉衛(wèi)平20070501FBSFCMFISHFN℃FSCGFPHLAHRLETALBOVINESERUNLFLOWCYTOMETRYFLUORESCENCEINSITEHYBRIDIZATIONFLUORESCINISOTHIOCYANATEFO“VARDSCATTERGTEENFLUORESCENCEPROTEINHUMANLEUCOCYTEANTIGENHOUR胎牛血清流式細(xì)胞術(shù)熒光原位雜交異硫氰熒光素前向散射光綠色熒光蛋白人類自細(xì)胞分化抗原小時(shí)HTLV1HUMANTCELLLYMPHOTROPICVIRES1人類T淋巴細(xì)胞白血病病毒IIMIMMUUOGLOBULINHEAVYCHAIN免疫球蛋白重鏈IHCIMMUNOHISTOCHEMISTRY免疫組織化學(xué)IL2RINTERLEUKIN2RECEPTOR白細(xì)胞介素2受體ISHINSITEHYBRIDIZATION原位雜交1TAMLMMUNORECEPTORTYROSINEBASEDACTIVETEDMOTIF免疫受體酪氨酸激活基序ITIMIMMUNORECEPTORTYROSINEBASEDINHIBITIONMOTIF免疫受體酪氨酸抑制基序JAL湘ⅨRJM硒目蠼腳強(qiáng)刪日ANDA垃L氌虹硼婦嘞醚暖擻剿摯臻導(dǎo)嘖象吾{靖F}舌KAN硒KDAKIRLBLNRMCSMINMDIMRNAME／MEMEVME?NHLNKORFPAGEKANAMYCINKILOBASESKILODALTOILSKMCRCELLINHIBITORYRECEPTORLURIABRTANIBROTHLEFTINVERTEDTERMINALREPEATMULTIPLECLONINGSITEMINUTEMULTIPLICITYOFINFECTIONVIRUS／CEMMESSENGERRNAI110THEATEN／MOTHEATENVIABLEMOTHEATEN／VIABLEMOTHEATENNONHODGKINLYMPHOMANATURALKILLEROPENREADINGFRAMEPOLYACRYLAMIDEGELELECTROPHORESIS卡那霉素千堿基千道爾頓NK細(xì)胞的抑制性受體LB培養(yǎng)基左端反向末端重復(fù)多克隆位點(diǎn)分鐘感染多樣性信使RNAMOTHEATEN小鼠VIABLEMOTHEATEN小鼠非霍奇金淋巴瘤自然殺傷開放閱讀框聚丙烯酰胺凝膠【魚泳

簡(jiǎn)介：目前，對(duì)單親家庭大學(xué)生的心理調(diào)查主要在人際關(guān)系、情緒狀態(tài)、心境等方面，實(shí)際上都是一種外部的表現(xiàn)，沒有從根本上解決問題。本論文試圖利用FLANKER任務(wù)、注意網(wǎng)絡(luò)測(cè)試ATTENTIONWKTEST，ANT和問卷調(diào)查的方法，找出單親家庭大學(xué)生在認(rèn)知控制能力和心理健康水平上的不同和形成原因，力圖為引導(dǎo)他們心理人格的健康發(fā)展形成探索實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)和理論依據(jù)。同時(shí)，證實(shí)單親家庭的大學(xué)生認(rèn)知控制能力水平比完整家庭大學(xué)生低；認(rèn)知控制能力水平與心理健康水平存在正相關(guān)。探索單親家庭大學(xué)生認(rèn)知控制能力和心理健康水平，分析單親家庭出生大學(xué)生認(rèn)知控制能力和心理健康水平的主要特征，引起更廣泛的社會(huì)參與，提高高等學(xué)校對(duì)大學(xué)生心理健康教育的重視程度和教育的針對(duì)性，并為高等學(xué)校更加有效地開展大學(xué)生心理健康教育提供對(duì)策，形成有效的教育和管理模式、促進(jìn)大學(xué)生整體心理健康水平的提高。

簡(jiǎn)介：近年來，隨著互聯(lián)網(wǎng)的發(fā)展，對(duì)等網(wǎng)絡(luò)PEERTOPEERWK，簡(jiǎn)稱P2P網(wǎng)絡(luò)以一種與傳統(tǒng)客戶服務(wù)器網(wǎng)絡(luò)連接模式不同的方式出現(xiàn)在人們面前，P2P改變了傳統(tǒng)的CS模式，網(wǎng)絡(luò)中雖然節(jié)點(diǎn)能力不同，節(jié)點(diǎn)所提供的資源多樣，但是各節(jié)點(diǎn)地位平等，且為用戶提供了非中心化的、自組織的、所有的或大部分聯(lián)系是對(duì)稱的分布式環(huán)境，在廣域的范圍內(nèi)實(shí)現(xiàn)了對(duì)數(shù)據(jù)信息、存儲(chǔ)空間、計(jì)算能力、功能組件、通信資源的充分利用。同時(shí)PEER活動(dòng)的隨機(jī)性與網(wǎng)絡(luò)的不穩(wěn)定性是因?yàn)閷?duì)等節(jié)點(diǎn)的行為受到其所有者的支配，所有者可以決定對(duì)等節(jié)點(diǎn)加入和退出對(duì)等網(wǎng)絡(luò)的時(shí)機(jī)，以及所擁有的資源使用的時(shí)機(jī)、種類、數(shù)量和方式等，這使得P2P網(wǎng)絡(luò)與網(wǎng)格環(huán)境相比極不穩(wěn)定，并且難以得到有效控制。在P2P網(wǎng)絡(luò)中，每個(gè)節(jié)點(diǎn)防御病毒的能力不同，只要有一個(gè)節(jié)點(diǎn)感染病毒，就可以通過內(nèi)部共享和通信機(jī)制將病毒擴(kuò)散到附近的鄰居節(jié)點(diǎn)。在短時(shí)間內(nèi)可以造成網(wǎng)絡(luò)擁塞甚至癱瘓，共享信息丟失，機(jī)密信息失竊，甚至通過網(wǎng)絡(luò)病毒可以完全控制整個(gè)網(wǎng)絡(luò)。因此為了改變目前P2P環(huán)境中各個(gè)節(jié)點(diǎn)各自為政、獨(dú)立防御各類層出不窮的新病毒的被動(dòng)局面，本文首先對(duì)當(dāng)前P2P網(wǎng)絡(luò)及節(jié)點(diǎn)特征作了深入的研究，在分析P2P網(wǎng)絡(luò)安全需求的基礎(chǔ)上，提出了符合P2P網(wǎng)絡(luò)一般安全需求的構(gòu)架，病毒防御是安全構(gòu)架中的重要部分；其次根據(jù)P2P網(wǎng)絡(luò)病毒的傳播方式及傳播特點(diǎn)的分析，提出了針對(duì)P2P網(wǎng)絡(luò)中常見的惡意代碼和蠕蟲病毒的檢測(cè)技術(shù)，然后結(jié)合人工免疫原理，將AGENT技術(shù)應(yīng)用于P2P網(wǎng)絡(luò)環(huán)境下，建立完善且適用于各種P2P網(wǎng)絡(luò)的病毒防御系統(tǒng)構(gòu)架，對(duì)系統(tǒng)中AGENT的功能進(jìn)行設(shè)定，并提出了AGENT之間的應(yīng)答機(jī)制以及基于層次分析法的ACP選擇機(jī)制；最后在P2P網(wǎng)絡(luò)安全平臺(tái)以及移動(dòng)代理平臺(tái)下實(shí)現(xiàn)一種P2P網(wǎng)絡(luò)環(huán)境下病毒防御系統(tǒng)，將各個(gè)節(jié)點(diǎn)組織成一個(gè)聯(lián)合防御病毒的整體。

簡(jiǎn)介：目的了解成人乙肝病毒表面抗原攜帶者生活質(zhì)量的現(xiàn)狀和影響因素并評(píng)價(jià)健康教育干預(yù)的效果方法以攀枝花鋼鐵集團(tuán)公司現(xiàn)有在崗5年以上的職工中的乙肝病毒表面抗原攜帶者104人為研究對(duì)象并隨機(jī)抽取與其具有可比性的正常人群105人作為對(duì)照進(jìn)行研究采用李凌江等編制的生活質(zhì)量綜合評(píng)定問卷GQOL74和方積乾等研制的健康狀況調(diào)查問卷SF36中文版進(jìn)行生活質(zhì)量的調(diào)查并評(píng)分通過成組T檢驗(yàn)評(píng)價(jià)乙肝病毒表面抗原攜帶者生活質(zhì)量的現(xiàn)狀采用雙變量相關(guān)分析和逐步回歸分析的方法分析乙肝病毒表面抗原攜帶者生活質(zhì)量的影響因素對(duì)研究對(duì)象進(jìn)行病毒性乙型肝炎乙肝相關(guān)知識(shí)的測(cè)試并采用以健康教育為主的干預(yù)措施對(duì)乙肝病毒表面抗原攜帶者進(jìn)行干預(yù)三個(gè)月后應(yīng)用GQOL74量表進(jìn)行第二次生活質(zhì)量的測(cè)量和乙肝知識(shí)的測(cè)試通過健康教育干預(yù)前后乙肝病毒表面抗原攜帶者生活質(zhì)量和乙肝知識(shí)得分的配對(duì)T檢驗(yàn)評(píng)價(jià)健康教育干預(yù)的效果結(jié)論1乙肝病毒表面抗原攜帶者的生活質(zhì)量的SF36和GQOL74得分均低于正常人說明其生活質(zhì)量因乙肝病毒的感染而受到了影響2影響乙肝病毒表面抗原攜帶者生活質(zhì)量的主要因素有工作后的感覺和工作滿意度、對(duì)乙肝病毒表面抗原攜帶的認(rèn)識(shí)、是否經(jīng)常生病、與領(lǐng)導(dǎo)的關(guān)系和對(duì)乙肝病毒表面抗原攜帶后所采取的措施3該次研究對(duì)乙肝病毒表面抗原攜帶者所采取的健康教育能提高其對(duì)病毒性乙型肝炎的認(rèn)知水平

簡(jiǎn)介：近年來，肝移植LIVERTRANSPLANTATION，LT在國(guó)內(nèi)蓬勃發(fā)展，成為治療各種終末期肝病的首要選擇。隨著外科技術(shù)的發(fā)展和新型有效免疫抑制劑的應(yīng)用，術(shù)后并發(fā)癥的診斷和處理逐漸成為決定患者遠(yuǎn)期預(yù)后的關(guān)鍵。急性細(xì)胞性排斥反應(yīng)ACUTECELLULARREJECTION，ACR是LT術(shù)后發(fā)病率最高的并發(fā)癥，其病理診斷和與其他并發(fā)癥的鑒別診斷是移植肝病理學(xué)的重點(diǎn)和難點(diǎn)。巨細(xì)胞病毒CYTOMEGALOVIRUS，CMV感染是LT術(shù)后最常見機(jī)會(huì)性感染，發(fā)病隱匿，臨床表現(xiàn)不特異，缺乏有效的病毒檢測(cè)方法，且它與ACR的治療方法截然相反，因此兩者的鑒別診斷亦非常重要。本課題通過對(duì)234例LT患者臨床病理分析，以探討ACR的病理形態(tài)特點(diǎn)以及術(shù)中零時(shí)相活檢組織學(xué)改變與術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生的關(guān)系，并對(duì)晚期活檢病例進(jìn)行HBSAG及HBCAG檢測(cè)，提出晚期急性排斥反應(yīng)LAR與乙肝復(fù)發(fā)或再感染的鑒別要點(diǎn)。應(yīng)用CD8、CD4、CD3、CD20、CD45RO、CD45RA、PERFIN、GRANZYMEB及TIA1單抗對(duì)108例次移植肝活檢組織進(jìn)行免疫組化染色，分析不同區(qū)域浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的免疫表型及細(xì)胞毒性蛋白的表達(dá)情況，探討ACR的發(fā)生機(jī)制，提出ACR的輔助診斷指標(biāo)。同時(shí)對(duì)25例CMV感染和25例無CMV感染肝活檢進(jìn)行雙盲形態(tài)學(xué)觀察，分析總結(jié)CMV肝炎的病理特征，并用免疫組織化學(xué)和PCR檢測(cè)活檢組織中CMV表達(dá)，分析其敏感性和特異性，尋找有價(jià)值的檢測(cè)手段。獲得如下主要結(jié)果和結(jié)論191例進(jìn)行術(shù)中零時(shí)相活檢，其中440％4091的供肝術(shù)中活檢呈現(xiàn)缺血再灌注損傷IRI；具有IRI的供肝術(shù)后ACR和膽道并發(fā)癥BC的同時(shí)發(fā)生率及晚期或持續(xù)性保存損傷PI出現(xiàn)率顯著高于無IRI表現(xiàn)的供肝；中央型壞死和細(xì)胞凋亡嚴(yán)重程度與ACR和BC的發(fā)生率均顯著相關(guān)；匯管區(qū)炎癥程度與晚期或持續(xù)性PI的發(fā)生率相關(guān)?？梢姽└涡g(shù)中零時(shí)相活檢組織學(xué)特征與術(shù)后ACR、BC和PI的發(fā)生相關(guān)。2肝移植術(shù)后早期6個(gè)月內(nèi)ACR發(fā)生率為380％89234，原發(fā)疾病為重型肝炎和原發(fā)性肝癌的患者ACR發(fā)生率顯著高于其他患者。21例非技術(shù)性BC中16例762％例發(fā)生過一次或多次ACR，兩者發(fā)生顯著相關(guān)。早期活檢ACR組中，匯管區(qū)的混合性炎細(xì)胞浸潤(rùn)、嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)、匯管區(qū)膽管炎損、匯管區(qū)靜脈內(nèi)皮炎和中央靜脈內(nèi)皮炎的檢出率分別為874％、658％、730％、694％和387％，與非排斥組比較具有顯著性差異，是診斷ACR較敏感且特異的組織形態(tài)學(xué)指標(biāo)。3ACR組匯管區(qū)CD3細(xì)胞、CD20細(xì)胞、CD8細(xì)胞均顯著增加，而小葉內(nèi)增加不明顯，同時(shí)CD8細(xì)胞和CD45RO細(xì)胞膽管或血管浸潤(rùn)率顯著增高。在ACR病例中，CD3細(xì)胞和CD8細(xì)胞浸潤(rùn)程度分別高于CD20細(xì)胞和CD4細(xì)胞，匯管區(qū)CD8細(xì)胞和CD45RO細(xì)胞浸潤(rùn)程度與排斥反應(yīng)組織學(xué)分級(jí)顯著相關(guān)。ACR組穿孔素、顆粒酶B在匯管區(qū)及小葉內(nèi)的表達(dá)均顯著增加且與ACR組織學(xué)分級(jí)及肝功生化指標(biāo)AST和GGT升高成正相關(guān)，而TIA1表達(dá)量在匯管區(qū)顯著增加，小葉內(nèi)無增加。膽管或血管壁毒性蛋白的陽(yáng)性率也顯著增高。4在CMV感染組和無CMV感染組間，組織中微小膿腫，單核細(xì)胞聚集及肝細(xì)胞體積增大的出現(xiàn)率具有顯著差異，是CMV感染所致肝臟損傷的出現(xiàn)率高且特異的組織學(xué)改變。感染組抗CMV抗體檢測(cè)陽(yáng)性率20％；PCR檢測(cè)陽(yáng)性率72％。PCR和免疫組化檢測(cè)CMV感染的敏感性和特異性分別為72％和84％，20％和100％，可見，活檢石蠟組織中CMV的PCR檢測(cè)是較敏感且特異的手段。

簡(jiǎn)介：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士學(xué)位論文SV，REO3，MHV，MAD，RCV病毒免疫血清制備及ELISA等檢測(cè)方法的研究姓名侯麗波申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)動(dòng)物學(xué)指導(dǎo)教師魏強(qiáng)秦川20090501中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院碩士研究生學(xué)位論文方法確定為陽(yáng)性的SV送檢血清樣本進(jìn)行的檢測(cè)中，未獲得特異性擴(kuò)增。本實(shí)驗(yàn)制備的病毒抗血清特異性強(qiáng)，滴度高，批量穩(wěn)定，可作為長(zhǎng)期穩(wěn)定的檢測(cè)對(duì)照，并為大小鼠病毒檢測(cè)體系的標(biāo)準(zhǔn)化打下基礎(chǔ)。而針對(duì)SV和REO3病毒建立的間接ELISA檢測(cè)試劑盒，其特異性強(qiáng)、靈敏度高、穩(wěn)定性好。針對(duì)檢測(cè)病原的RTPCR方法在實(shí)際應(yīng)用中，不適宜常規(guī)檢測(cè)，但可用于病原跟蹤調(diào)查和探討病原抗原抗體檢出關(guān)系的研究。本研究批量制備了免疫血清并通過質(zhì)量控制作為陽(yáng)性對(duì)照血清，避免了常規(guī)使用感染動(dòng)物來源血清作為對(duì)照血清的缺陷，為標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)試劑的建立提供了質(zhì)量保證。同時(shí)，在實(shí)驗(yàn)室已有檢測(cè)條件姒，LEA檢測(cè)體系成熟上，建立標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范的ELISA檢測(cè)體系，并探索病原學(xué)PCR檢測(cè)方法，為實(shí)現(xiàn)一種病原，多種檢測(cè)方法以及不同方法比較邁出重要一步?！娟P(guān)鍵詞】標(biāo)準(zhǔn)化血清ELISAL式劑盒；SV；REX3；MHV；MAD；RCV4

簡(jiǎn)介：嚴(yán)重急性呼吸綜合征SEVEREACUTERESPIRATYSYNDROME，SARS是一種以發(fā)熱和嚴(yán)重肺部感染為主要特征的新發(fā)急性傳染病。2003年4月16日，WHO正式宣布SARS的病原體是一種新型冠狀病毒，并命名為SARS冠狀病毒SARSCOV。研究表明，SARSCOV與人類普遍易感的冠狀病毒OC43株和229E株無抗體交叉反應(yīng)，是一種新的從未在人類或動(dòng)物中發(fā)現(xiàn)過的冠狀病毒。盡管目前SARS的流行已經(jīng)得到控制，但迄今為止，SARS的起源、動(dòng)物宿主、傳播途徑及致病機(jī)理等仍不完全清楚，SARS對(duì)人類的威脅依然存在。由于從臨床癥狀及其發(fā)病體征很難與其它病原體引起的發(fā)熱性呼吸系統(tǒng)疾病區(qū)分，所以早期特異實(shí)驗(yàn)診斷顯得更加重要。本實(shí)驗(yàn)利用基因工程表達(dá)的重組SARS冠狀病毒N蛋白免疫2月齡的BALBC小鼠，取免疫后的小鼠脾淋巴細(xì)胞與SP20小鼠骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行融合，建立了10株能穩(wěn)定分泌SARS冠狀病毒N蛋白單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，通過制備腹水，對(duì)這些單克隆抗體進(jìn)行純化、分析和鑒定。對(duì)這些單克隆抗體進(jìn)行了如下的免疫學(xué)鑒定①效價(jià)測(cè)定10株單克隆抗體中，除7＃腹水效價(jià)稍低一些為1∶104外，其他腹水效價(jià)均在1∶107～1∶108之間，顯示出這些單抗都有較高的抗SARS冠狀病毒N蛋白活性。②免疫球蛋白類型及其亞類特異性鑒定采用雙向瓊脂擴(kuò)散和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)鑒定10株單克隆抗體，結(jié)果表明該10株抗N蛋白抗原的單克隆抗體都為IGG類型，IGG1亞類。③親和力分析利用抗體稀釋法，對(duì)10株單克隆抗體的親和力進(jìn)行分析，結(jié)果表明A＃、B＃、C＃號(hào)單抗與N蛋白的親和力最高，其親和常數(shù)分別為150109LMOL、750108LMOL、105109LMOL；D＃、1＃、2＃、4＃、5＃次之，其親和常數(shù)分別為375108LMOL、300108LMOL、300108LMOL、180108LMOL、180108LMOL；3＃、7＃與N蛋白的親和力最低，其親和常數(shù)分別為439106LMOL、600106LMOL。④配對(duì)組合利用制備的單克隆抗體，通過對(duì)各株單克隆抗體特性和捕捉SARS冠狀病毒N蛋白能力的比較以及單抗初步配對(duì)測(cè)定，發(fā)現(xiàn)有三組組合可以配對(duì)A＃和A＃HRP、1＃和D＃HRP、A＃和4＃HRP，其中以A＃單抗作為包被抗體，4＃單抗標(biāo)記辣根過氧化物酶HRP作為標(biāo)記抗體為最佳配對(duì)組合，由此建立了單克隆抗體夾心法ELISA特異檢測(cè)SARS冠狀病毒抗原的方法。初步試驗(yàn)結(jié)果證明，所建立的單克隆抗體夾心ELISA檢測(cè)方法具有較好的特異性和靈敏度，靈敏度達(dá)到5NGML，通過進(jìn)一步的改進(jìn)和完善，有望更好地用于SARS病毒感染的特異診斷。通過系統(tǒng)鑒定，證明這些單克隆抗體針對(duì)冠狀病毒N蛋白的不同抗原決定簇，具有較高的特異性，不僅為開發(fā)SARS病毒早期診斷抗原診斷試劑的研究提供了單抗支持，而且解決了抗體檢測(cè)陽(yáng)性對(duì)照無害化的問題，同時(shí)對(duì)于SARSCOV保護(hù)性抗原研究、SARS免疫學(xué)和發(fā)病機(jī)制的研究提供了有力的手段。

簡(jiǎn)介：乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，HBV為一種嗜肝DNA病毒，其感染具有種屬特異性和組織特異性，人類HBV僅感染人和高等靈長(zhǎng)類動(dòng)物，具有肝組織特異性，這在一定程度上限制了人們對(duì)HBV在致病機(jī)制和防治等HBV相關(guān)的醫(yī)藥生物學(xué)問題的研究。近年來，國(guó)內(nèi)外采用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，建立了多種HBV單基因或全基因組的轉(zhuǎn)基因小鼠模型，這部分解決了HBV小鼠模型缺乏的局面，但是由于全基因組轉(zhuǎn)基因小鼠血清和組織尤其是肝組織中有HBV病毒蛋白的表達(dá)和病毒的復(fù)制，因此，在普通實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行全基因組轉(zhuǎn)基因小鼠的培育和其他研究具有一定的危險(xiǎn)性，且常規(guī)分子生物學(xué)方法和免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)有代價(jià)較高、費(fèi)時(shí)費(fèi)力的限制。因此，建立一種便于檢測(cè)和培育的全基因組小鼠具有一定的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。建立一種全身組織可表達(dá)綠色熒光蛋白GFP的全基因組轉(zhuǎn)基因小鼠，可以簡(jiǎn)化轉(zhuǎn)基因小鼠的檢測(cè)和培育。通過本課題的研究，得到GFP標(biāo)記的HBV真核表達(dá)載體，并利用其制備轉(zhuǎn)基因小鼠。本研究采用基因重組技術(shù)，將PBR322HBVADR20質(zhì)粒含有雙拷貝的HBV全基因組DNA和PCXEGFP質(zhì)粒含CMVIEENHANCER和CHICKENΒACTIONPROMOTER調(diào)控的EGFP基因分別用限制性內(nèi)切酶PVUⅡ和BAMHⅠ酶切，T4DNA多聚酶將粘性末端平端化后，再用限制性內(nèi)切酶SALⅠ酶切，膠回收得到EGFP和HBVADR20片段，連接后構(gòu)建成PCXEGFPHBVADR20真核表達(dá)質(zhì)粒。經(jīng)限制性內(nèi)切酶酶切和DNA序列測(cè)定，證實(shí)該載體構(gòu)建成功。為了研究PCXEGFPHBVADR20載體的體外表達(dá)特征，將該載體線性化后，采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將其轉(zhuǎn)染人胎肝細(xì)胞系L02，無限稀釋法獲得穩(wěn)定遺傳PCXEGFPHBVADR20的L02陽(yáng)性細(xì)胞，熒光顯微鏡觀察表明PCXEGFPHBVADR20可在L02細(xì)胞中表達(dá)綠色熒光蛋白，進(jìn)一步采用RTPCR和免疫細(xì)胞化學(xué)的方法從轉(zhuǎn)錄水平和蛋白水平檢測(cè)HBS基因和HBC基因的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)情況，結(jié)果顯示，HBS基因和HBC基因可在穩(wěn)定遺傳PCXEGFPHBVADR20的L02陽(yáng)性細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。為了證實(shí)PCXEGFPHBVADR20在小鼠體內(nèi)的表達(dá)情況，該研究采用尾靜脈液壓注射方法，通過尾靜脈將PCXEGFPHBVADR20直接注射入正常小鼠體內(nèi)，分別在質(zhì)粒注射后24，48，72小時(shí)取小鼠肝組織塊制成冰凍切片，采用熒光顯微術(shù)和免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)PCXEGFPHBVADR20表達(dá)的情況。熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，注射小鼠肝臟組織中表達(dá)GFP，其表達(dá)量熒光亮度在細(xì)胞間有差別。免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示，HBSAG，HBCAG在注射小鼠肝臟組織中均有表達(dá)，陽(yáng)性細(xì)胞散在分布。以上研究結(jié)果證實(shí)，本研究已成功構(gòu)建了PCXEGFPHBVADR20真核表達(dá)載體，該載體可在體外和體內(nèi)表達(dá)相應(yīng)的蛋白質(zhì)，這為體外研究HBV和制備轉(zhuǎn)基因小鼠奠定了基礎(chǔ)。為了制備可表達(dá)綠色熒光蛋白的HBV全基因組轉(zhuǎn)基因小鼠，本研究將構(gòu)建成功的PCXEGFPHBVADR20真核表達(dá)載體用PSTⅠ、NHEⅠ限制性內(nèi)切酶線性化，純化后采用經(jīng)典的顯微注射法，將10KB大小的DNA片段注射入供體小鼠受精卵雄原核，共注射72枚受精卵，選取狀態(tài)較好的64枚，分別植入5只假孕小鼠，其中2只已經(jīng)懷孕，待產(chǎn)仔后做轉(zhuǎn)基因鑒定?？傊?，本課題成功構(gòu)建了含有雙拷貝HBV全基因組DNA和EGFP基因的真核表達(dá)載體PCXEGFPHBVADR20，體內(nèi)體外研究證實(shí)GFP和HBV基因均能表達(dá)，表明PCXEGFPHBVADR20可用于轉(zhuǎn)基因小鼠的制備，且GFP可以作為HBVDNA存在與否的報(bào)告基因。進(jìn)一步用該載體進(jìn)行轉(zhuǎn)基因小鼠的制備，目前正在等待新生小鼠的產(chǎn)生。

簡(jiǎn)介：目的從教育學(xué)、心理測(cè)量學(xué)等角度出發(fā)，以規(guī)則空間模型和DINA模型為診斷工具，在整合已有的34年級(jí)閱讀障礙認(rèn)知診斷測(cè)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，更全面地對(duì)閱讀障礙進(jìn)行認(rèn)知診斷，并以此為依據(jù)探討閱讀障礙的認(rèn)知結(jié)構(gòu)和典型掌握模式，為閱讀障礙的診斷和干預(yù)提供理論與實(shí)踐的依據(jù)同時(shí)多方面比較DINA與規(guī)則空間模型，促進(jìn)研究者對(duì)DINA的認(rèn)識(shí)和該模型在國(guó)內(nèi)的應(yīng)用和發(fā)展。方法在查閱國(guó)內(nèi)外閱讀障礙文獻(xiàn)專家訪談的基礎(chǔ)上確定研究的理論架構(gòu)。采取分層抽樣的方法，選取益陽(yáng)地區(qū)6所小學(xué)，其中城市學(xué)校、城鄉(xiāng)結(jié)合和農(nóng)村學(xué)校各2所，獲有效樣本1178人，經(jīng)閱讀障礙兒童入組標(biāo)準(zhǔn)篩查，最終獲得48名閱讀障礙兒童測(cè)驗(yàn)數(shù)據(jù)。結(jié)果1掌握模式RSM分析的掌握模式為13種，DINA分析的掌握模式為12種其中掌握模式1111001100100的人數(shù)最多，為7至8人，占總?cè)藬?shù)的15％17％其次為1111001110100、1111111100100、1111111100110、1111111110110、1111111011100等五種掌握模式，各有5人左右，占總?cè)藬?shù)的10％左右，六種模式的人數(shù)共為65％左右。2掌握概率34年級(jí)閱讀障礙兒童對(duì)S1（音韻）、S2（音調(diào)）、S3（音節(jié)）、S4（形近異音字字音）、S7（命名速度）、S11（同音同形）等屬性的掌握程度較好對(duì)S5（形近異音字字義）、S6（鏡像字）、S8（記憶廣度）、S9（詞語理解）等認(rèn)知屬性的掌握程度一般，有50％至67％的閱讀障礙兒童掌握了這些屬性S10（句子理解）和S12（語素理解）兩屬性的掌握響度較低，掌握率不到25％S13（語素組合）屬性的掌握程度為0。3兩種模型的比較多方面比較DINA和規(guī)則空間模型，證明了DINA模型在判準(zhǔn)確率上與RSM無差異，但在學(xué)習(xí)與使用難度上明顯低于RSM，因此在學(xué)術(shù)研究中使用DINA模型是可行性的。4DINA計(jì)算程序能明顯簡(jiǎn)化DINA模型的學(xué)習(xí)和使用過程，基本滿足認(rèn)知診斷的研究要求。結(jié)論1兩種模型的分析結(jié)果基本相同，均能提供較充分的診斷信息。2DINA模型的學(xué)習(xí)和應(yīng)用上更簡(jiǎn)單和更容易。

簡(jiǎn)介：碩士學(xué)位論文論文題目自我認(rèn)知與員工創(chuàng)造力的關(guān)系基于基本心理需要理論研究生姓名郁巧玲指導(dǎo)教師姓名李宏利專業(yè)名稱心理學(xué)研究方向工業(yè)與組織管理心理學(xué)論文提交日期2015年5月

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多蒼果噴霧劑預(yù)防呼吸道病毒感染的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多擴(kuò)散峰度成像在輕度認(rèn)知障礙及阿爾茨海默病中的應(yīng)用價(jià)值.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：目錄獨(dú)創(chuàng)性聲明獨(dú)創(chuàng)性聲明I摘要IIABSTRACTIV1引言引言12文獻(xiàn)綜述文獻(xiàn)綜述221心理距離的相關(guān)研究2211解釋水平理論概述2212心理距離的界定3213心理距離各維度間的關(guān)系6214心理距離與創(chuàng)造性的關(guān)系922頓悟的研究綜述10221頓悟現(xiàn)象的心理機(jī)制11222頓悟問題的腦機(jī)制研究12223頓悟問題的類型1423認(rèn)知風(fēng)格與創(chuàng)造性的關(guān)系163問題提出與研究意義問題提出與研究意義1731問題提出1732研究的意義204實(shí)證研究實(shí)證研究2041研究一時(shí)間距離和認(rèn)知風(fēng)格對(duì)頓悟問題解決的影響20411研究目的20412實(shí)驗(yàn)方法20413結(jié)果與分析23414討論2642研究二空間距離和認(rèn)知風(fēng)格對(duì)頓悟問題解決的影響27421研究目的27422實(shí)驗(yàn)方法27423結(jié)果與分析29424討論3243研究三社會(huì)距離和認(rèn)知風(fēng)格對(duì)頓悟問題解決的影響33431研究目的33432實(shí)驗(yàn)方法33433結(jié)果與分析34434討論3744研究四概率和認(rèn)知風(fēng)格對(duì)頓悟問題解決的影響38

簡(jiǎn)介：本研究采用天然HBV感染HEPG2細(xì)胞建立病毒細(xì)胞模型，通過四甲基偶氮唑鹽比色法MTT測(cè)定天然乳鐵蛋白、缺鐵乳鐵蛋白以及鋅、鐵、錳飽和乳鐵蛋白對(duì)細(xì)胞的毒性并確定最大無毒作用劑量，并以此劑量作梯度稀釋進(jìn)行抗病毒研究；試驗(yàn)采用ELISA法應(yīng)用乙型肝炎表面抗原試劑盒檢測(cè)乙型肝炎表面抗原的被抑制情況，同時(shí)采用熒光定量PCR法對(duì)HBVDNA的被抑制情況進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果如下1應(yīng)用MTT法測(cè)定缺鐵乳鐵蛋白、鋅飽和乳鐵蛋白、鐵飽和乳鐵蛋白、錳飽和乳鐵蛋白的細(xì)胞毒性，鋅、鐵和錳對(duì)細(xì)胞的最大無毒劑量TD0分別為15L1、30L1和15L1，缺鐵乳鐵蛋白對(duì)細(xì)胞的半數(shù)中毒劑量TD50為8312GL1，最大無毒劑量TD0為15GL1。試驗(yàn)均采用其無細(xì)胞毒性劑量進(jìn)行抗病毒研究。2當(dāng)HBV感染細(xì)胞以后，缺鐵乳鐵蛋白對(duì)HBSAG分泌無抑制作用最高抑制率為1478％，對(duì)HBVDNA沒有顯著抑制作用P＞005，缺鐵乳鐵蛋白不能抑制乙型肝炎病毒。3當(dāng)HBV感染細(xì)胞以后，鋅飽和乳鐵蛋白、鐵飽和乳鐵蛋白、錳飽和乳鐵蛋白對(duì)HBVDNA有顯著抑制作用P＜005，并呈現(xiàn)出劑量效應(yīng)關(guān)系，抑制效果為鋅飽和乳鐵蛋白＞錳飽和乳鐵蛋白＞鐵飽和乳鐵蛋白，乳鐵蛋白的鐵飽和度以及結(jié)合的離子類型影響其抑制HBVDNA效果。4單純的鋅、鐵、錳離子不能抑制HBVDNA，乳鐵蛋白的抗HBVDNA作用是蛋白與金屬的整體作用。本研究結(jié)果表明，在體外鋅、鐵、錳飽和乳鐵蛋白對(duì)HBVDNA有顯著的抑制作用，缺鐵乳鐵蛋白和單純的鋅、鐵、錳離子對(duì)HBVDNA無顯著抑制作用，這說明其抑制作用與乳鐵蛋白結(jié)合金屬離子后的整體結(jié)構(gòu)有關(guān)，但其作用機(jī)制應(yīng)是多方面的，且有待于進(jìn)一步探討。

簡(jiǎn)介：目的探討高齡高血壓患者的認(rèn)知功能COGNITIVEFUNCTION，CF和生活自理能力ACTIVITYOFDAILYLIVING，ADL現(xiàn)狀及血壓水平對(duì)認(rèn)知功能和生活自理能力的影響，為臨床干預(yù)措施提供依據(jù)。方法選取2011年10月2012年5月期間中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院老年心血管病區(qū)住院高齡高血壓患者120例，其中男72例，女48例，年齡81100歲，平均年齡852±38歲，平均收縮壓SBP1426±196MMHG，平均舒張壓DBP765±110MMHG。研究對(duì)象按入院血壓水平分成A組SBP＞150MMHG，B組130＜SBP≤150MMHG和C組SBP≤130MMHG，采用日常生活能力量表ADL和簡(jiǎn)易精神狀態(tài)量表MINIMENTALSTATEEXAMINATION，MMSE來評(píng)估研究對(duì)象的日常生活能力和認(rèn)知功能。采用踝臂指數(shù)ANKLEBRACHIALINDEX，ABI、頸股脈搏波傳導(dǎo)速度CAROTIDFEMALPULSEWAVEVELOCITY，CFPWV和經(jīng)顱多普勒TRANSCRANIALDOPPLER，TCD評(píng)價(jià)患者動(dòng)脈硬化嚴(yán)重程度。同時(shí)收集患者性別、年齡、體重指數(shù)BMI體重身高2、文化程度，婚姻狀況，高血壓病程、吸煙史、飲酒史、降壓藥物使用、SBP、DBP、脈壓PULSEPRESSU，PP，射血分?jǐn)?shù)EJECTIONFRACTION，EF，血常規(guī)、總膽固醇TC、低密度脂蛋白LDLC、高密度脂蛋白HDLC、空腹血糖FBS、B型腦鈉肽前體NTPROBNP，肝腎功能，24小時(shí)尿蛋白、尿電解質(zhì)等資料。探討高齡高血壓患者的認(rèn)知功能和生活自理能力現(xiàn)狀及血壓水平對(duì)認(rèn)知功能和生活自理能力的影響。采用SPSS190軟件包進(jìn)行分析。結(jié)果1、基本特征的比較三組患者基本特征除收縮壓、舒張壓、脈壓外，其余均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＞005。2、降壓藥物使用情況所有入選對(duì)象中，CCB降壓治療人數(shù)最多，30人，其次是CCBACEIARB24人，單用ACEIARB23人，ACEIARB利尿劑CCB11人，ACEIARB利尿劑7人，CCB利尿劑3人，CCBΒ阻滯劑3人，未規(guī)律服用降壓藥者16人。3、生化指標(biāo)及ABI、CFPWV、TCD比較三組TC相比有顯著性差異，A組、B組TC顯著高于C組P＜005，A組和B組之間TC無顯著性差異P＞005。A組UACR顯著高于B組和C組P＜005，B組和C組之間UACR無顯著性差異P＞005。A組ABI、TCD、CFPWV較B組、C組有顯著性差異P＜005，B組和C組兩兩之間比較無顯著性差異P＞005。三組血紅蛋白HB、平均紅細(xì)胞壓積HCT、FBS、血K、CR、ALT、AST、NTPROBNP、EF值、24小時(shí)尿電解質(zhì)等指標(biāo)相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。4、MMSE、ADL評(píng)分比較120例高齡高血壓患者中，有認(rèn)知功能減退者既MMSE評(píng)分異常者56人，占總?cè)藬?shù)的467％。生活自理能力有不同程度下降者88人，占總?cè)藬?shù)的733％。三組ADL評(píng)分無顯著性差異，B組MMSE評(píng)分顯著高于A、C組，A、C組之間MMSE評(píng)分無顯著性差異P＞005。5、在MMSE評(píng)分正常者與異常者之間進(jìn)行單因素分析，結(jié)果兩組在年齡、婚姻狀況、吸煙史、腦血管病史、高血壓病程、合并糖尿病、SBP、PP、ABI、CFPWV、TCD方面有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＜005。6、將單因素分析中P＜01的因素作為自變量引入LOGISTIC回歸模型進(jìn)行非條件LOGISTIC回歸分析，結(jié)果僅年齡、PP、腦血管病史、TCD、UACR是影響認(rèn)知功能的獨(dú)立危險(xiǎn)因素P＜005。7、在ADL評(píng)分正常者與異常者之間進(jìn)行單因素分析，結(jié)果兩組在年齡、婚姻狀況、合并糖尿病、ABI、CFPWV、MMSE評(píng)分方面有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異P＜005。8、將單因素分析中P＜01的因素作為自變量引入LOGISTIC回歸模型進(jìn)行非條件LOGISTIC回歸分析，結(jié)果僅年齡、糖尿病病史、ABI是影響認(rèn)知功能的獨(dú)立危險(xiǎn)因素P＜005。結(jié)論1、高齡高血壓患者血壓水平與認(rèn)知功能有關(guān)。年齡、脈壓、腦血管病史、腦血流狀態(tài)、24小時(shí)尿微量白蛋白是影響其認(rèn)知功能的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。應(yīng)加強(qiáng)血壓水平的調(diào)節(jié)與控制，以維持和提高高齡高血壓患者的認(rèn)知功能。2、高齡高血壓患者血壓水平不影響生活自理能力。年齡、糖尿病、ABI是影響其生活自理能力的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。