簡(jiǎn)介：學(xué)校代號(hào)10532學(xué)號(hào)S09081019密級(jí)湖南大學(xué)碩士學(xué)位論文網(wǎng)站設(shè)計(jì)中認(rèn)知摩擦的研究和解決方法探索堂僮史適厶絲芻坷匿當(dāng)昱咂絲魚壁驅(qū)整塹雄勇塾援墻羞望僮遮刻苧苤堂院童些芻整；遮丑苧盔堂迨窒握童旦期；2Q12笙三月詮窒簦趲目翅12Q12生魚旦三日筌鱟委雖會(huì)圭虛；魚厶丑熬拯＼THECOGNITIVEFRICTIONRESEARCHINDESIGNINGWEBSITEANDMETHODSTOEXPLOREBYZHOUCHANGZHANBESHIJIAZHUANGRAILWAYUNIVERSITY2009ATHESISSUBMITTEDINCOGNITIVEFRICTIONFORTHEDEGREEOFMASTEROFLITERATUREDESIGNINTHEGRADUATESCHOOLOFHUNANUNIVERSITYSUPERVISORPROFESSORYANGXIONGYONGMAY，2012

簡(jiǎn)介：目的1、探討腫瘤壞死因子TNFA基因多態(tài)性與乙型肝炎病毒慢性感染結(jié)果之間的關(guān)系。2、探討乙型肝炎病毒慢性感染患者血清中TNFA水平在慢性乙肝發(fā)展中的臨床意義。方法L、運(yùn)用聚合酶鏈反應(yīng)一限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性分析PCRRFLP的方法檢測(cè)TNFA基因啟動(dòng)子區(qū)308位點(diǎn)和一238位點(diǎn)單個(gè)核苷酸多態(tài)性SNP在不同臨床類型的慢性HBV感染者及健康對(duì)照者中的分布頻率。2、ELISA方法檢測(cè)血清TNFA濃度水平。結(jié)果L、90例慢性乙型肝炎患者CHB，30例乙型肝炎肝硬化患者HC，42例慢性重型乙型肝炎患者CSHB中TNFA308GA基因型頻率及TNFAA等位基因頻率均顯著高于健康對(duì)照組40例，CSHB組更顯著。2、乙型肝炎肝硬化患者組和慢性重型乙型肝炎患者組TNFA308GA雜合子血清中TNFA水平明顯高于TNFA～308G／G純合子P肝硬化組慢性乙型肝炎組健康對(duì)照組。結(jié)論1、TNFA一308GA基因型個(gè)體乙型肝炎病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)率增高，且與臨床類型有關(guān)，TNFA一308位點(diǎn)A等位基因可能是乙型肝炎易感性的遺傳標(biāo)記之一。2、TNFA是肝細(xì)胞壞死的重要介質(zhì)之一，與乙型肝炎類型、肝損傷程度有密切關(guān)系。

簡(jiǎn)介：目的建立柯薩奇病毒感染人宮頸癌細(xì)胞（HELA細(xì)胞）的體外細(xì)胞模型，用重組Β防御素3多肽（RECOMBINANTMOUSEΒDEFENSIN3，RMBD3）在病毒增殖周期的不同階段進(jìn)行干預(yù)，探索RMBD3的體外抗柯薩奇病毒作用。方法1RMBD3的鑒定，運(yùn)用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳方法分析RMBD3的分子量和純度，并運(yùn)用鱟試驗(yàn)檢測(cè)RMBD3的內(nèi)毒素含量和BCA法測(cè)定RMBD3的含量；2測(cè)定柯薩奇病毒的增殖及半數(shù)組織細(xì)胞感染量50％TISSUECULTUREINFECTIONDOSETCID50，將柯薩奇病毒A16型（COXSACKIEVIRUSA16CVA16）和B3型（COXSACKIEVIRUSB3CVB3）接種于HELA細(xì)胞單層培養(yǎng)物使病毒活化增殖后收集培養(yǎng)液，并用REEDMUENCH方法測(cè)定增殖后的CVA16和CVB3對(duì)HELA細(xì)胞的TCID50確定病毒的滴度；3RMBD3的細(xì)胞毒性測(cè)定，將HELA細(xì)胞接種至96孔細(xì)胞板，同時(shí)加入終濃度為25200ΜGML的RMBD3，37℃、5CO2培養(yǎng)48小時(shí)，用MTT法測(cè)定細(xì)胞的增殖活性，確定RMBD3對(duì)細(xì)胞的無毒濃度范圍；4將各濃度RMBD3分別和CVA16、CVB3混合后在4℃孵育2小時(shí)，然后加入HELA細(xì)胞單層物，37℃孵育1小時(shí)使病毒吸附后棄上清，加入1640維持液，37℃、5CO2培養(yǎng)，觀察各孔的細(xì)胞病變效應(yīng)，并用MTT法測(cè)定各孔的光吸收度值，檢測(cè)RMBD3對(duì)柯薩奇病毒的直接作用；5將各濃度RMBD3和病毒分別混合后的混合液直接加入細(xì)胞單層物，37℃孵育1小時(shí)棄上清換成1640維持液，相同方法測(cè)定各孔的光吸收度值，檢測(cè)RMBD3在柯薩奇病毒吸附階段的抑制作用；6先將病毒液加入各孔細(xì)胞單層物，37℃孵育1小時(shí)棄多余病毒液，加入各濃度RMBD3和1640維持液的混合液，37℃孵育2小時(shí)棄上清換成維持液，相同方法測(cè)定各孔的光吸收度值，檢測(cè)RMBD3在柯薩奇病毒穿入階段的抑制作用；7先將病毒液加入各孔細(xì)胞單層物，37℃孵育1小時(shí)棄上清換成維持液，37℃孵育2小時(shí)棄上清，加入各濃度RMBD3和維持液的混合液，相同方法測(cè)定各孔光吸收度值，檢測(cè)RMBD3在柯薩奇病毒穿入細(xì)胞后對(duì)病毒的抑制作用。同時(shí)設(shè)計(jì)兩種抗病毒陽性藥物（干擾素和利巴韋林）、病毒對(duì)照及空白（正常細(xì)胞）對(duì)照。結(jié)果1在凝膠電泳圖上可見較單一的分子量約為45KDA的蛋白質(zhì)條帶純度大于90，內(nèi)毒素含量小于0001EUUG；2病毒感染細(xì)胞后4872小時(shí)可見細(xì)胞出現(xiàn)明顯變圓變大、脫落、出現(xiàn)聚合細(xì)胞等細(xì)胞病變現(xiàn)象。測(cè)得CVA16和CVB3對(duì)HELA細(xì)胞的TCID50分別為103501ML和105801ML；3確定RMBD3對(duì)HELA細(xì)胞的無毒濃度范圍為25100ΜGML，后續(xù)的抗病毒實(shí)驗(yàn)RMBD3用100、50、25、125、625ΜGML5個(gè)濃度；4MTT法測(cè)得的光吸收度值與活細(xì)胞數(shù)量呈正相關(guān)，各組數(shù)據(jù)之間的比較采用單因素方差分析，得出與病毒對(duì)照相比，經(jīng)過同RMBD3前孵育處理的病毒感染細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞的致死作用有所降低；5在病毒感染細(xì)胞的吸附階段，用RMBD3干預(yù)后病毒對(duì)細(xì)胞的致死作用有所降低；6在病毒感染細(xì)胞的穿入階段用RMBD3進(jìn)行干預(yù)，病毒對(duì)細(xì)胞的致病變作用也有所降低；7在病毒穿入細(xì)胞后加入RMBD3進(jìn)行干預(yù)，病毒對(duì)細(xì)胞的致死作用與病毒對(duì)照相比無明顯差異。結(jié)論實(shí)驗(yàn)證實(shí)了RMBD3具有體外抗柯薩奇病毒作用，該作用主要體現(xiàn)在RMBD3對(duì)柯薩奇病毒的直接作用，以及在吸附和穿入階段可抑制柯薩奇病毒對(duì)HELA細(xì)胞內(nèi)的感染。

簡(jiǎn)介：【目的】轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子ΒTRANSFMINGGROWTHFACTΒTGFΒ被認(rèn)為是關(guān)鍵的致纖維化生長(zhǎng)因子與肝纖維化的發(fā)生密切相關(guān)該研究選擇SMAD7作為外源目的基因利用ADEAS系統(tǒng)構(gòu)建表達(dá)SMAD7的重組復(fù)制缺陷型腺病毒ADSMAD7通過體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究SMAD7基因在肝星狀細(xì)胞HEPATICSTELLATECELLHSC信息分子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中的作用及對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性肝纖維化進(jìn)程的影響從而進(jìn)一步闡明HSC調(diào)控、肝纖維化發(fā)生的新機(jī)制為肝纖維化基因治療研究奠定新的理論基礎(chǔ)【結(jié)論】一、利用ADEASY系統(tǒng)可快速構(gòu)建插入外源SMAD7基因的重組復(fù)制缺陷型腺病毒并可在體內(nèi)外高效表達(dá)二、SMAD7基因?qū)氪笫驢SC阻斷TGFΒ信號(hào)傳導(dǎo)可抑制HSC活化降低HSC培養(yǎng)上清ECM水平但對(duì)HSC的增殖卻呈促進(jìn)作用三、外源SMAD7基因可間接促進(jìn)L02肝細(xì)胞株增殖抑制其凋亡四、ADSMAD7基因治療可改善纖維化大鼠肝功能降低血清PCⅢ水平下調(diào)ΑSMA表達(dá)減輕大鼠肝纖維化程度

簡(jiǎn)介：根據(jù)已發(fā)表的PERVGAG基因核苷酸序列設(shè)計(jì)并合成用于擴(kuò)增PERVGAG基因的引物并在引物5端分別引入SALI、NOTI酶切位點(diǎn)從中國(guó)實(shí)驗(yàn)小型豬外周血淋巴細(xì)胞RNA中擴(kuò)增GAG基因?qū)CR產(chǎn)物與PGEMT載體連接常規(guī)方法轉(zhuǎn)化ECOLIJM109感受態(tài)細(xì)胞挑白色菌落經(jīng)過夜培養(yǎng)后小量提取質(zhì)粒NOTI、SALI雙酶切鑒定、篩選陽性克隆組子對(duì)陽性克隆用ABI377自動(dòng)序列分析儀進(jìn)行全序列測(cè)定用DNASIS和NCBI的BLAST20程序進(jìn)行同源性比較序列分析結(jié)果表明所克隆的GAG基因全長(zhǎng)工1572BP編碼524個(gè)氨基酸與其它來源的同源序列相比較僅有三個(gè)核苷酸存在變異分別是位于N端第1054位的C→T位于N端第1180位的A→G及位于N端第1560位的A→C的變異為進(jìn)一步探討PERVGAG蛋白的特性與功能提取PERVGAG重組質(zhì)粒PGEMGAGNOTI、SALI雙酶切重組質(zhì)粒凝膠純化后插入經(jīng)同樣酶切處理的PGEX4T3融合表達(dá)載體中轉(zhuǎn)化DH5Α感受態(tài)細(xì)胞菌落PCR和NOTI、SALI雙酶切鑒定陽性克隆對(duì)陽性克隆用ABI377自動(dòng)序列分析儀進(jìn)行全序列測(cè)定測(cè)定顯示其具有正確的讀碼框?qū)⒃摫磉_(dá)載體轉(zhuǎn)化BL21感受態(tài)菌株并對(duì)表達(dá)的融合蛋白進(jìn)行鑒定結(jié)果表達(dá)的GSTGAG蛋白具有良好的抗原性和特異性為從分子水平上對(duì)PERVGAG蛋白的功能性研究和發(fā)展PERV基因工程監(jiān)測(cè)試劑奠定了基礎(chǔ)具有特異抗原性的GST融合蛋白的成功表達(dá)為豬內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒監(jiān)測(cè)試劑盒的研制奠定了基礎(chǔ)對(duì)保障豬源生物制品的安全具有意義

簡(jiǎn)介：第一軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文單純皰疹病毒Ⅱ型人源性抗GD蛋白噬菌體單鏈抗體庫的構(gòu)建姓名王穎申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)皮膚病學(xué)與性病學(xué)指導(dǎo)教師楊慧蘭20060609碩士學(xué)位論文條新途徑。包膜糖蛋白是HSV感染發(fā)病的關(guān)鍵所在，在HSV一2編碼的糖蛋白中GD蛋白是病毒囊膜的主要成分，在病毒復(fù)制和刺激中和抗體的產(chǎn)生中起重要作用，是HSV主要的免疫原，能誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫，產(chǎn)生高滴度中和抗體，激發(fā)DTH反應(yīng)及T細(xì)胞增殖反應(yīng)，GD免疫作用最強(qiáng)，因此，選擇HSV感染發(fā)病的關(guān)鍵分子GD蛋白作為目的抗原。本課題利用20名HSV一2病毒IGG、IGM檢測(cè)為抗體陽性的生殖器皰疹患者外周血，共80ML，分離淋巴細(xì)胞后提取完整的RNA，以01IGODTO為引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄RTPCR。參照美國(guó)SCRIPPS研究所人源抗體庫構(gòu)建的引物，設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物擴(kuò)增出全套V，和V。基因片斷，分別擴(kuò)增出約360BP的重鏈可變區(qū)V“及320BP的輕鏈可變區(qū)V。。經(jīng)純化回收的V。和V。片斷在接近等摩爾濃度下，由LINKER片斷用重疊延伸拼接法組裝成單鏈抗體基因SCFV，得到約為760BP的單鏈抗體片斷SCFV。SCFV經(jīng)SLYI和NOTI雙酶切之后與經(jīng)過同樣雙酶切的噬粒載體PFAB5C連接，將重組噬粒電轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)化大腸桿菌ECOLIXLL一BLUE。將轉(zhuǎn)化克隆用M13K07輔助噬菌體援助后收集噬菌體上清，即為特異性單鏈抗體噬菌體抗體庫，得到的抗體庫其庫容為186X106，滴度為17X106CFU／ML。本課題通過建立人源性噬菌體抗體庫，以期待從中可篩選人源性抗HSV單鏈抗體。近年來很多治療性抗體已應(yīng)用于皮膚科領(lǐng)域，抗體治療生殖器皰疹彌補(bǔ)了藥物及疫苗治療的不足。由于人源性抗體避免了鼠源性單克隆抗體的不良反應(yīng)且分子量小，是十分有希望的抗HSV感染的基因治療方案，在臨床應(yīng)用上有著廣泛的應(yīng)用前景。也為進(jìn)一步的研究基因工程抗體治療打下基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞單純皰疹病毒GD蛋白噬菌體抗體庫單鏈抗體

簡(jiǎn)介：研究背景和目的經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療PCI已成為目前治療冠心病的重要手段但無論是經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈腔內(nèi)成形術(shù)PTCA還是支架植入術(shù)都存在術(shù)后冠脈再狹窄RS的問題RS的發(fā)生機(jī)制尚未完全明確動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及臨床研究資料表明新生內(nèi)膜增生是各種PCI術(shù)后RS的共同特征內(nèi)皮損傷后在多種生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子的作用下中膜血管平滑肌細(xì)胞VSMC在短時(shí)間內(nèi)發(fā)生表型轉(zhuǎn)化和增殖損傷后1天并向內(nèi)膜遷移47天內(nèi)膜VSMC進(jìn)一步增殖導(dǎo)致新生內(nèi)膜形成及增生因此VSMC增殖是RS的主要病理機(jī)制的觀點(diǎn)目前已得到公認(rèn)基本轉(zhuǎn)錄元件結(jié)合蛋白2BTEB2是一種鋅指轉(zhuǎn)錄因子它與基因啟動(dòng)子中GC序列結(jié)合從而調(diào)節(jié)基因的表達(dá)BTEB2在胚胎期動(dòng)脈及內(nèi)皮損傷動(dòng)脈中去分化的VSMC中高效表達(dá)在成年動(dòng)脈及正常VSMC中無表達(dá)生長(zhǎng)剌激生長(zhǎng)因子、佛波酯、ANGII等可誘導(dǎo)其在VSMC中大量表達(dá)現(xiàn)有的文獻(xiàn)提示BTEB2可能在VSMC的增殖的過程中起重要作用它可激活增殖相關(guān)基因PDGF、CDK4、TGFΒ、CJUN并參與VSMC表型轉(zhuǎn)化的調(diào)控因此以BTEB2為目標(biāo)的干預(yù)性研究可能為再狹窄防治開辟新的途徑該研究擬通過腺病毒介導(dǎo)BTEB2反義RNA在培養(yǎng)VSMC中表達(dá)抑制BTEB2蛋白表達(dá)了解BTEB2反義RNA對(duì)體外培養(yǎng)VSMC增殖及其相關(guān)基因表達(dá)的影響用反義BTEB2腺病毒載體轉(zhuǎn)染球囊損傷后的大鼠頸動(dòng)脈于在體水平探討B(tài)TEB2反義RNA對(duì)VSMC增殖及新生內(nèi)膜增生的影響研究方法采用Ⅰ型膠原酶消化法進(jìn)行大鼠主動(dòng)脈VSMC原代培養(yǎng)從對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的VSMC原代大鼠VSMC提取總RNA用RTPCR技術(shù)擴(kuò)增得到BTEB2CDNA片段采用位置特異性重組方法構(gòu)建攜帶大鼠反義BTEB2基因的腺病毒載體ADASBTEB2通過293細(xì)胞擴(kuò)增純化制取高滴度重組腺病毒ADASBTEB2轉(zhuǎn)染培養(yǎng)VSMC后用RTPCR檢測(cè)BTEB2反義RNA的表達(dá)以蛋白質(zhì)免疫印跡、免疫細(xì)胞化學(xué)及RTPCR等技術(shù)檢測(cè)分析BTEB2反義RNA對(duì)BTEB2、VSMC增殖相關(guān)基因PCNA、AT1R、PDGFBB和表型標(biāo)志基因SMΑA和SMEMB的蛋白及其MRNA表達(dá)的影響用四唑鹽MTT比色試驗(yàn)及流式細(xì)胞儀等方法檢測(cè)BTEB2反義RNA對(duì)血清誘導(dǎo)的VSMV增殖的影響建立大鼠頸動(dòng)脈球囊損傷模型用ADASBTEB2轉(zhuǎn)染球囊損傷后的大鼠頸動(dòng)脈13周后進(jìn)行病理切片檢測(cè)BTEB2反義RNA對(duì)新生內(nèi)膜增生的影響采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)BTEB2在新生內(nèi)膜中的表達(dá)用伊文氏藍(lán)染色檢測(cè)BTEB2反義RNA對(duì)損傷動(dòng)脈內(nèi)皮修復(fù)的影響研究結(jié)果①用位置特異性重組技術(shù)成功構(gòu)建了攜帶攜帶大鼠反義BTEB2基因的腺病毒載體ADASBTEB2其滴度約51010PFUML②在VSMC轉(zhuǎn)染重組腺病毒ADASBTEB2后各時(shí)相點(diǎn)經(jīng)RTPCR均可檢測(cè)到BTEB2反義RNA的表達(dá)③與未轉(zhuǎn)染組和ADLACZ組比較ADASBTEB2組各時(shí)相點(diǎn)的MRNA和蛋白表達(dá)明顯減少P001④MTT試驗(yàn)顯示在不同MOI組ADASBTEB2組吸光度值均較未轉(zhuǎn)染組和ADLACZ組顯著降低P001而且吸光度值降低的趨勢(shì)隨著MOI的增加而更加明顯⑤通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)VSMC增殖周期發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染ADASBTEB2后可顯著增加G0G1期細(xì)胞P001及減少S期和G2M期細(xì)胞比例P001⑥免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染ADASBTEB2可顯著抑制ANGⅡ誘導(dǎo)的VSMC增殖相關(guān)基因PCNA、AT1R、PDGFBB的蛋白表達(dá)⑦免疫細(xì)胞化學(xué)及RTPCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)ADASBTEB2轉(zhuǎn)染顯著抑制VSMC去分化型標(biāo)志基因SMEMB蛋白及MRNA表達(dá)P001并逆轉(zhuǎn)血清誘導(dǎo)的分化型標(biāo)志基因SMΑA蛋白及MRNA的表達(dá)下調(diào)P001⑧球囊損傷頸動(dòng)脈內(nèi)膜被伊文氏藍(lán)染成明顯的深藍(lán)色表明內(nèi)皮損傷效果明顯損傷后1周新生內(nèi)膜開始形成2周以后新生內(nèi)膜明顯向管腔內(nèi)增生造成明顯的管腔狹窄⑨在正常動(dòng)脈VSMC中通過免疫組織化學(xué)檢測(cè)未見到BTEB2的表達(dá)未轉(zhuǎn)染組和ADLACZ組在球囊損傷后7和14天可檢測(cè)到明顯的BTEB2表達(dá)損傷后21天BTEB2表達(dá)明顯減少在各時(shí)相點(diǎn)ADASBTEB2組BTEB2表達(dá)均顯著低于未轉(zhuǎn)染組和ADLACZ組P001⑩重組腺病毒對(duì)損傷動(dòng)脈中層VSMC的轉(zhuǎn)染效率約12﹪30﹪損傷后3周與未轉(zhuǎn)染組和ADLACZ組相比ADASBTEB2組的IM明顯降低077±007VS163±036181±021P001損傷后3周ADASBTEB2組的伊文氏藍(lán)內(nèi)膜藍(lán)染百分比顯著低于未轉(zhuǎn)染組和ADLACZ組P001研究結(jié)論①該實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的腺病毒載體ADASBTEB2可介導(dǎo)BTEB2反義RNA在原代培養(yǎng)VSMC及球囊損傷的大鼠頸動(dòng)脈中的表達(dá)②ADASBTEB2轉(zhuǎn)染可抑制VSMC血清誘導(dǎo)的BTEB2過度表達(dá)及VSMC增殖③ADASBTEB2轉(zhuǎn)染可抑制內(nèi)皮損傷引起的大鼠頸動(dòng)脈新生內(nèi)膜增生促進(jìn)損傷內(nèi)皮的修復(fù)

簡(jiǎn)介：重慶醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文新型腺病毒載體制備及以其為趨化因子基因載體的腫瘤免疫治療和機(jī)制研究姓名邱峰申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)藥理學(xué)指導(dǎo)教師周遠(yuǎn)大20050501重慶醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文英文縮寫ADADVALPBPBBSACARCPECMVCTLDABDCDEPCDIEADMEMECFEMCSETBRFACSFCAFCSFKNFNFMADVFMOC英漢縮略名詞對(duì)照表英文全稱ADENOVIRUSADENOVIMSVECTORAGAROSEALKALINEPHOSPHATASEBROMOPHENOLBLUEBOVINESERUMALBUMINCOXSACKIEADENOVIRUSRECEPTORCOOMASSIEBRILLIANTBLUECYTOPATHICEFFECTCYTOMEGALOVIRUSCYTOTOXICTLYMPHOCYTE33’一DIAMINOBENZIDINEDENDRITICCELLDIETHYLPROCARBONATEDIISOPMPYLETHYLAMINEDULBECEO’SMODIFIEDEAGLE’SMEDIUMENHANCEDCHEMIFLUORESCENCENSUCCINIMIDYL6MALEIMIDOHEXANOATEENDOCYTOSISETHIDIUMBROMIDEFLUORESCENCEACTIVATEDCELLSORTINGFREUD’SCOMPLETEADJUVANTFETALCALFSERUMFRACTALKINECHEMOKINEFIBRONECTINFIBERMUTANTADENOVIRUSVECTOR9FLUORENYLMETHYLOXYCARBONYL中文全稱腺病毒腺病毒載體瓊脂糖堿性磷酸酶演酚蘭牛血清白蛋白柯薩奇腺病毒受體考馬斯亮蘭細(xì)胞病變效應(yīng)巨細(xì)胞病毒細(xì)胞毒性T細(xì)胞33’二氨基聯(lián)苯四鹽酸鹽樹突狀細(xì)胞焦碳酸二乙酯二異丙基乙胺DMEM培養(yǎng)基N琥珀酰亞胺6馬來酰亞胺己酸酯內(nèi)吞作用溴乙啶熒光活化細(xì)胞分選弗氏完全佐劑胎牛血清不規(guī)則趨化因子纖維連接蛋白纖毛突變型腺病毒載體9一芴甲氧羰基

簡(jiǎn)介：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文伴有中央顳區(qū)棘波的良性癲癇兒童認(rèn)知功能損害的神經(jīng)心理學(xué)及事件相關(guān)電位研究姓名邵曉秋申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別博士專業(yè)神經(jīng)病學(xué)指導(dǎo)教師張振馨吳立文20040501中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)博士研究生學(xué)位論文SWISPIKEWAVEINDEX棘波指數(shù)TMTTRAILMAKINGTEST連線測(cè)驗(yàn)TCITRANSITORYCOGNITIONIMPAIRMENT一過性認(rèn)知損害VIQVERBALINTELLIGENCEQUOTIENT語言智商WISCCR中國(guó)修訂韋氏兒童智力量表WMWORKINGMEMORY工作記憶

簡(jiǎn)介：北京中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文清毒栓治療宮頸人乳頭瘤病毒感染的實(shí)驗(yàn)研究姓名佟慶申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)中西醫(yī)結(jié)合婦科學(xué)指導(dǎo)教師金哲20050501ABSTRACTCERVICALHUMANPAPILLOMATOUSVIRUSINFECTIONHASATRENDOFGOINGUPTHESEYEARSANDMOREANDMOREYOUNGWOMENGETTHISDISEASEIT’SCLOSELYRELATEDTOCERVICALCARCINOMATHATMAKEMANYSCHOLARSFROMDOMESTICANDFOREIGNPAYMOREATTENTIONTOITTHEREISNOTAKINDOFEFFICIENTMEDICINEHASBEENFOUNDYET，ESPECIALLYFORTHECOVERTINFECTIONNOWADAYS，THEUSUALTTEATMENTFORTHEDISEASEISIATROPHYSICSINCLUDINGFREEZING，CO2LASERANDOPERATION，ANDSOMEMEDICINETREATMENTLIKEINTERFERONINFIATROPHYSICSMAY1ETTHEPATIENTSGETSOMETRAUMAS，WHICHISHARDLYRECEPTEDBYSOMEYOUNGWOMANWHOSTILLWANTTOBEPREGNANTA1THOUGHINFHASLITTLETOXICREACTIONONBODYITWOULDMAKEPEOPLEGETFEVER，MUSCLEAAHE，HEADACHE，HYPOTENSION，ANDSOON，IFINFISUSEDFORALONGTIMEALSOHALFOFTHESEPATIENTSWOUNDGETBONEMARROWDEPRESSIONFURTHERMORE，ITHASPROBABILITYTOEVOKETHEDEPRESSION，BLEEDING，ANDAUTOIMMTLNEDISEASE，ETCSOITISOFGREATIMPORTANCETODEVELOPEXTERNALAPPLICATIONWITHGOODEFFECT，LOWPRICE，ANDLITTLEILLEFFECTORTOXICACTIONTHANKSFORTHEHEIPFROMPROFJIZHE，THEAUTHORSTUDIEDTHETHERAPEUTICALMEEHANISMANDTHEI11EFFECTOFTHEOINGDUSUPPOSITORYAFTERREVIEWEDONTHEDOCUMENTSOF1ATESTDECEDETHETOTALEFFECTIVERATEOFSUBCLINICALTYPEWAS8611％AFTERUSEQINGDUSUPPOSITORYANDMANYEXPERIMENTSWEREDONEFORTHEPURPOSEOFFINDINGOUTTHETHERAPEUTICALMECHANISMANDTHEILLEFFECTOFTHEQINGDUSUPPOSITORY，INCLUDINGTHEEXPERIMENTOFACUTETOXICITYANDSTIMULATIONONRABBITS’SKINANDMUCOSATHEEXPERIMENTOFQINGDUSUPPOSITORYSTIMULATETHEMICE’SSPLEENCELLTOPRODUCEINF。ANDTHEEXPERIMENTOF10NGTERMTOXICITYONCAVIESTHEEXPERJMENTSSHOWTHATQINGDUSUPPOSITORYCANEFFECTIVELYSTIMULATETHEMIOE’SSPLEENCELLTOPRODUCEINFANDHAS1ITTLEILLEFFECTORTOXICITYONANIMALSTHATMADEASTEADYBASEFORTHEUSEOFQINGDUSUPPOSITORYONCLINICKEYWORDSCERVICALHUMANPAPILLOMATOUSVIRUSINFECTION，INTERFERONTOXICITYEXPERIMENTSTIMULETIONEXPERIMENT，QINGDUSUPPOSITORY

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多苯丙氨酸二肽類化合物抗乙肝病毒作用及其機(jī)理研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：目的觀察解毒化瘀顆粒治療輕微型肝性腦病患者的臨床療效及改善認(rèn)知功能障礙的情況。方法選擇廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院、瑞康醫(yī)院肝病中心門診就診或住院治療的肝硬化患者中60例配合治療的MHE患者隨機(jī)分為治療組、對(duì)照組、空白組，每組各20例。三組均采用常規(guī)西醫(yī)治療，治療組予口服解毒化瘀顆粒，對(duì)照組予口服乳果糖，空白組則密切觀察病情變化。療程為14天。觀察三組患者在治療前后數(shù)字連接試驗(yàn)NCTA、血氨、肝功能、生存質(zhì)量指標(biāo)檢測(cè)的變化情況。結(jié)果1數(shù)字連接試驗(yàn)NCTA三組治療后NCTA測(cè)試時(shí)間均縮短，與治療前比較有明顯差異P＜001，治療組療效優(yōu)于對(duì)照組和空白組差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜001）2血氨三組治療后血氨均降低，與治療前比較有明顯差異（P＜001），治療組療效優(yōu)于對(duì)照組和空白組差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜001）3肝功能三組治療后均降低ALT、AST、TBIL，提高ALB水平，與治療前比較有明顯差異（P＜001），治療組療效優(yōu)于對(duì)照組和空白組差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜001）4生存質(zhì)量評(píng)分三組治療后生存質(zhì)量評(píng)分提高與治療前比較有明顯差異（P＜001），治療組療效優(yōu)于對(duì)照組和空白組差異明顯，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜001）。結(jié)論運(yùn)用解毒化瘀顆粒治療輕微型肝性腦病患者，能明顯改善患者的認(rèn)知功能障礙癥狀，促進(jìn)肝功能恢復(fù)及提高生活質(zhì)量。

簡(jiǎn)介：戊型肝炎病毒HEV不穩(wěn)定易降解，難以從載毒標(biāo)本中分離，而迄今為止仍沒有有效的細(xì)胞培養(yǎng)模型，這很大程度上限制了HEV感染致病機(jī)制的研究。近年來，隨著對(duì)HEV研究的深入，較好模擬了HEV病毒農(nóng)殼表面結(jié)構(gòu)的重組蛋白為研究HEV與宿主細(xì)胞相互作用提供了一條新的途徑。HEV衣殼由單一蛋白PF2組成，大量研究表明PF2的重組表達(dá)片段P239AA368606很好地模擬了HEV的免疫優(yōu)勢(shì)中和表位。P239對(duì)HEV與原代肝細(xì)胞、HEPG2細(xì)胞的吸附阻斷，P239對(duì)多株細(xì)胞系具有與HEV相似的嗜性，以及多株HEV特異單抗對(duì)P239與HEPG2細(xì)胞結(jié)合的特異阻斷，強(qiáng)有力地提示P239同時(shí)也很好地模擬了HEV與細(xì)胞膜的結(jié)合所具備的表面結(jié)構(gòu)特征。因此，P239與HEPG2細(xì)胞的吸附模型是探討HEV與細(xì)胞膜相互作用的可靠工具。不同結(jié)合區(qū)域的HEV單抗及其FAB片段對(duì)P239吸附細(xì)胞的阻斷結(jié)果提示，P239表面至少存在兩個(gè)細(xì)胞受體結(jié)合區(qū)域其一為HEV的主要免疫優(yōu)勢(shì)中和表位F2AA459606，另一個(gè)區(qū)域?yàn)锳A423438。這兩個(gè)區(qū)域均對(duì)P239與細(xì)胞的特異性吸附有貢獻(xiàn)，均能單獨(dú)介導(dǎo)P239與嗜性細(xì)胞的吸附，但AA459606區(qū)域吸附細(xì)胞的能力要明顯強(qiáng)于后者，是介導(dǎo)P239吸附的主要部位。AA423438區(qū)域與細(xì)胞表面作用力弱，在HEV結(jié)合過程中很可能只是增加病毒與主要受體結(jié)合的機(jī)會(huì)。缺失了AA423438的P239突變體△239保留了免疫優(yōu)勢(shì)中和表位，與P239一樣均能阻斷天然HEV對(duì)HEPG2細(xì)胞的感染吸附。而喪失免疫優(yōu)勢(shì)表位的233N則不能有效阻斷。此結(jié)果表明HEV與嗜性細(xì)胞的結(jié)合很可能同P239與HEPG2細(xì)胞之間的結(jié)合一樣，也是通過這兩個(gè)區(qū)域，并且主要免疫優(yōu)勢(shì)區(qū)域F2AA459606在HEV與細(xì)胞結(jié)合過程中發(fā)揮主要作用。通過酵母雙雜交，從人肝細(xì)胞CDNA文庫中篩出四個(gè)可能與HEV衣殼蛋白相結(jié)合的蛋白肝細(xì)胞藥物代謝酶P450、轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白TRP13、P38相結(jié)合蛋白P38IP、DDAH2。并通過免疫共沉淀初步驗(yàn)證了P38IP與E2的結(jié)合，提示HEVF2激活MAPKP38通路的可能。通過親和層析篩選HEPG2、猴肝組織中與P239相結(jié)合的蛋白，并利用二維電泳2DE結(jié)合生物質(zhì)譜技術(shù)分離鑒定這些結(jié)合蛋白，得到6個(gè)可能與P239相互作用的蛋白HSP90、GRP78BIP、ALPHATUBULIN、P43、ATPASEBETASUBUNIT、某未命名蛋白。并通過免疫共沉淀、細(xì)胞共定位等多種實(shí)驗(yàn)手段進(jìn)一步驗(yàn)證了GRP78BIP、HSP90與P239的結(jié)合。結(jié)果表明，GRP78BIP與P239、HSP90與P239在HEPG2細(xì)胞內(nèi)共定位。并且P239與ECOLI表達(dá)經(jīng)純化的GRP78BIP可直接結(jié)合，提示它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的相互作用不是經(jīng)由第三者為中介的結(jié)合。同時(shí)，ATP的加入會(huì)導(dǎo)致P239與GRP78BIP結(jié)合的可逆解離，提示P239與GRP78BIP的結(jié)合是ATP依賴的特異性結(jié)合，GRP78BIP的ATPASE活性在這種結(jié)合中有重要的作用。本文建立了能較好模擬HEV與細(xì)胞的吸附過程的P239HEPG2吸附模型，進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)HEV上至少具有兩個(gè)細(xì)胞受體結(jié)合區(qū)域。其中一個(gè)結(jié)合力較強(qiáng)的區(qū)域與HEV主要中和表位區(qū)域重疊，而另一個(gè)區(qū)域結(jié)合力較弱。為闡明HEV吸附機(jī)制奠定了良好基礎(chǔ)，并提供了重要的研究工具。而對(duì)細(xì)胞內(nèi)的P239結(jié)合蛋白的分離鑒定則為闡明HEV的復(fù)制、致病機(jī)制提供了重要線索。

簡(jiǎn)介：青藏高原在世界范圍內(nèi)有著“屋脊”之稱，由于其地勢(shì)險(xiǎn)峻海拔較高導(dǎo)致其特殊的環(huán)境，例如氣壓過低、空氣干燥等，如此嚴(yán)苛的環(huán)境對(duì)該地區(qū)駐扎的官兵正常的生理及心理都會(huì)產(chǎn)生一定的作用。此外高原區(qū)域往往交通不暢，信息封閉，沒有豐富的文藝娛樂活動(dòng)，這種單調(diào)枯燥的生活往往會(huì)對(duì)駐扎在高原上的官兵帶來心理影響。即使過去已經(jīng)有一些關(guān)于這方面的研究，然而對(duì)那些長(zhǎng)期生活在高原上的官兵的大腦認(rèn)知能力的改變以及保護(hù)都沒有全面細(xì)致的探究。腦力勞動(dòng)在現(xiàn)如今科技導(dǎo)向的局部戰(zhàn)爭(zhēng)中體現(xiàn)了愈發(fā)重要的地位，官兵的腦力功能直接影響于軍事戰(zhàn)略部署。所以，對(duì)長(zhǎng)期駐扎生活在高原上的官兵的認(rèn)知能力的改變及其保護(hù)的探究是很重要的科學(xué)課題，同時(shí)也關(guān)系到我國(guó)的軍事戰(zhàn)略。目的為了了解軍人心理認(rèn)知能力在高原環(huán)境中的變化，本課題引入心理測(cè)評(píng)儀器測(cè)試，對(duì)高原官兵的朝向注意、抑制控制以及認(rèn)知能力結(jié)合ERPS技術(shù)進(jìn)行研究分析，對(duì)比了在朝向注意和抑制控制功能在平原和高原、以及認(rèn)知能力不同的個(gè)體上的差異。探討高原耐受性好的群體的認(rèn)知神經(jīng)特征。為下一步高原官兵認(rèn)知功能等級(jí)評(píng)定和心理健康防護(hù)提供理論和實(shí)證依據(jù)。方法以移居高原組為分析對(duì)象，同時(shí)設(shè)立平原地區(qū)的對(duì)照實(shí)驗(yàn)。平原對(duì)照組的官兵駐扎地為氣壓1028HPA、海拔500M的環(huán)境，移居高原組的官兵駐扎則位于氣壓358HPA、海拔3680M的藏區(qū)。對(duì)受試者的個(gè)人基本信息進(jìn)行采集匯總，特別是兵源地、高原居住時(shí)間等。實(shí)驗(yàn)一將952名官兵分成兩組并使用DXC6型無線多項(xiàng)群體心理測(cè)評(píng)儀對(duì)其記憶搜索、詞語理解與工作執(zhí)行、數(shù)字相加、心理旋轉(zhuǎn)、數(shù)字搜索等認(rèn)知功能開展評(píng)測(cè)。分析級(jí)別差異時(shí)，我們將使用T檢驗(yàn)法處理測(cè)試成績(jī)。實(shí)驗(yàn)二從上述高原組和平原組各隨機(jī)抽取28名官兵作為ERPS的實(shí)驗(yàn)對(duì)象，然后在移居高原組中選取認(rèn)知測(cè)評(píng)成績(jī)最高和最低的兩組官兵作為ERPS實(shí)驗(yàn)對(duì)象。ERPS記錄采用GO／NOGO任務(wù)。記錄額區(qū)FZ、中央?yún)^(qū)CZ和頂區(qū)PZ的N2、P3波的波幅和潛伏期。ERPS數(shù)據(jù)采用多因素重復(fù)測(cè)量方差分析的方法對(duì)高低分組進(jìn)行對(duì)比。實(shí)驗(yàn)三在移居高原組中選取認(rèn)知測(cè)評(píng)成績(jī)最高和最低的兩組官兵作為ERPS實(shí)驗(yàn)對(duì)象。ERPS記錄采用ODDBALL任務(wù)。記錄額區(qū)FZ、中央?yún)^(qū)CZ和頂區(qū)PZ的P3波的波幅和潛伏期。ERPS數(shù)據(jù)采用多因素重復(fù)測(cè)量方差分析的方法對(duì)高低分組進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果實(shí)驗(yàn)一移居高原組認(rèn)知功能特點(diǎn)1、與平原對(duì)照組比較，移居高原組官兵的數(shù)字搜索能力、心理旋轉(zhuǎn)能力、詞語理解與工作執(zhí)行能力、數(shù)字相加能力、記憶搜索能這五項(xiàng)測(cè)試的正確數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)分得分均顯著增高（P2、本研究發(fā)現(xiàn)，高原被試官兵的認(rèn)知能力要明顯高于平原被試官兵，包括空間知覺能力、判斷運(yùn)算能力、短時(shí)記憶能力、注意廣度及范圍以及語言理解能力等五項(xiàng)認(rèn)知功能。實(shí)驗(yàn)二高原環(huán)境對(duì)官兵抑制控制能力的影響1、行為學(xué)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果，高原組和平原組被試的GONOGO任務(wù)行為反應(yīng)無明顯差異。認(rèn)知功能高分組和低分組被試的GONOGO任務(wù)行為反應(yīng)無明顯差異。2、與平原組相比，高原組的P3D成分顯著降低，而N2D成分沒有顯著差異。3、相對(duì)于認(rèn)知功能高分組被試，低分組的反應(yīng)抑制能力降低。實(shí)驗(yàn)三不同認(rèn)知能力高原官兵對(duì)新異刺激的注意偏向事件相關(guān)電位研究1、與認(rèn)知功能低分組相比，認(rèn)知功能高分組的P3波幅顯著升高（P2、認(rèn)知功能低分組和高分組的P3潛伏期無顯著差異P005。3、P3波幅和認(rèn)知功能測(cè)驗(yàn)進(jìn)行偏相關(guān)分析，結(jié)果顯示，詞語理解、數(shù)字相加、數(shù)字搜索、心理旋轉(zhuǎn)的反應(yīng)時(shí)、標(biāo)準(zhǔn)分、正確率時(shí)的偏相關(guān)系數(shù)均有顯著相關(guān)P結(jié)論1、實(shí)驗(yàn)一結(jié)果提示經(jīng)過高原習(xí)服2年，本研究采樣的高原官兵認(rèn)知功能已恢復(fù)到正常水平，甚至略有增加，一定條件的低氧可以促進(jìn)官兵的某些認(rèn)知能力輕微增強(qiáng)。2、實(shí)驗(yàn)二結(jié)果提示高原環(huán)境下抑制控制功能受損。較高的認(rèn)知能力具有較好的抑制控制功能。3、實(shí)驗(yàn)三結(jié)果顯示認(rèn)知功能越高P3波幅越高在一定程度上反映了大腦功能狀態(tài)總體的水平，可能是一個(gè)比較全面反映認(rèn)知功能的綜合性指標(biāo)，可以用于高原官兵人員的選拔。4、本研究探索出來的這套測(cè)量方法，經(jīng)過實(shí)驗(yàn)證明是一套在高原行之有效的篩查優(yōu)秀認(rèn)知能力士兵的測(cè)量工具。可以為我軍在高原部署一支“能打仗，打勝仗”的生力軍提供有效的技術(shù)保障。

簡(jiǎn)介：戊型肝炎病毒HEPATITISEVIRUS，HEV是一種無包膜的RNA病毒，主要可引起急性戊型肝炎（HEPATITISE，HE），會(huì)造成消化道相關(guān)的食欲不振、惡心、嘔吐等癥狀，嚴(yán)重的患者甚至?xí)l(fā)生肝衰竭乃至死亡，尤其在育齡期婦女、慢性肝病患者、老年人和嬰幼兒中有著較高的病死率，是一種嚴(yán)重威脅人類健康的病原體，引起了眾多研究者的關(guān)注。由于缺乏有效的HEV細(xì)胞培養(yǎng)模型，對(duì)HEV的病毒顆粒組裝、感染機(jī)制研究和疫苗開發(fā)主要是通過各種外源表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行的。HEVF2AA112606編碼的蛋白P495可在昆蟲細(xì)胞中體內(nèi)組裝成等二十面體對(duì)稱的病毒樣顆粒（VIRUSLIKEPARTICLE，VLP），但體外重組裝和利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)獲得該蛋白片段的病毒樣顆粒等未見報(bào)道，體外組裝可控制核酸的包裹，從而制備具有感染和入胞能力的假病毒，可用于病毒細(xì)胞相互作用、病毒入胞機(jī)制、病毒受體研究和疫苗效力評(píng)價(jià)，本研究在課題組成功研制世界上第一個(gè)重組戊型肝炎疫苗P239的基礎(chǔ)上，利用原核表達(dá)系統(tǒng)開展P495蛋白的表達(dá)、體外組裝、免疫原性和假病毒包裝等研究，以期為戊型肝炎病毒的研究提供新的工具。首先，本研究利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)可溶性表達(dá)P495蛋白，并通過突變分析發(fā)現(xiàn)，LEU244為P495蛋白可溶性表達(dá)的關(guān)鍵位點(diǎn)。采用陰離子交換層析等方法獲得純度約90％的P495蛋白，通過摸索蛋白顆粒組裝的條件，包括組裝時(shí)溶液的PH、鹽離子濃度和溫度等，確定2050MMPB65、05MNACL、37℃是P495的顆粒體外組裝的較優(yōu)條件，并發(fā)現(xiàn)PRO284為P495蛋白組裝的關(guān)鍵位點(diǎn)之一。其次，透射電鏡觀察和動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定顯示，P495可形成為形態(tài)均一、半徑為15RIM左右的VLP免疫反應(yīng)性分析表明，P495與各種HEV特異單抗反應(yīng)性良好，與P239的反應(yīng)性相當(dāng)P495在小鼠體內(nèi)的半數(shù)有效劑量ED50為0068ΜG，05ΜG劑量可誘導(dǎo)的小鼠抗體水平為105，與已上市的P239疫苗HECOLIN免疫原性相當(dāng)。再次，細(xì)胞入胞實(shí)驗(yàn)表明，P495可吸附并進(jìn)入HEV易感細(xì)胞HEPG2，將能夠表達(dá)GFP的質(zhì)粒載體與其進(jìn)行共組裝，采用HPLC分子篩的雙波長(zhǎng)紫外檢測(cè)和組裝顆粒的細(xì)胞感染實(shí)驗(yàn)，提示P495可包裹質(zhì)粒DNA，并在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)GFP報(bào)告基因，顯示了用于制備HEV假病毒的可行性。綜上所述，本研究首次利用大腸桿菌可溶性表達(dá)了HEVP495蛋白，其中的LEU244和PRO284分別在可溶性表達(dá)和顆粒組裝中起重要的作用，組裝獲得形態(tài)均一的病毒樣顆粒，具有良好的免疫反應(yīng)性和免疫原性，這些顆粒可感染細(xì)胞或包裹質(zhì)粒DNA在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)報(bào)告基因。從而，為HEV的衣殼組裝機(jī)理、細(xì)胞感染機(jī)制、受體鑒定等研究奠定了良好的基礎(chǔ)，為基于大腸桿菌的戊肝病毒的疫苗設(shè)計(jì)提供新的參考，假病毒的應(yīng)用將推動(dòng)HEV細(xì)胞模型和動(dòng)物模型的發(fā)展。