利用caco-2和thp-1共培養(yǎng)模式分析卡拉膠的致炎作用【開題報告+文獻(xiàn)綜述+畢業(yè)設(shè)計】

1、本科畢業(yè)論文系列本科畢業(yè)論文系列開題報告開題報告生物技術(shù)生物技術(shù)利用利用Caco2Caco2和THP1THP1共培養(yǎng)模式分析卡拉膠的致炎作用共培養(yǎng)模式分析卡拉膠的致炎作用一、選題的背景與意義：一、選題的背景與意義：卡拉膠（也稱鹿角藻膠或鹿角菜膠，英文名Carrageen）是存在于海洋紅藻綱的麒麟菜屬、角叉菜屬、杉藻屬和沙菜屬等細(xì)胞壁中硫酸多糖，因硫酸基團(tuán)和內(nèi)醚鍵位置不同，現(xiàn)已分為七種類型卡拉膠：κ、λ、ι、、θ、ξ和ν型，其中κ、λ和ι

2、卡拉膠的應(yīng)用最為廣泛。它具有獨特的生物學(xué)性質(zhì)，可以制成親水膠體、凝膠、增稠、乳化、成膜、穩(wěn)定分散劑等，因此受到食品、日用化工和醫(yī)藥等行業(yè)的青睞。近年來，我國已將卡拉膠列入食品添加劑目錄，且它也已列入聯(lián)合國糧農(nóng)組織和世界衛(wèi)生組織食用標(biāo)準(zhǔn)用量說明書，其應(yīng)用前景非常廣闊。但是，有研究表明卡拉膠可以引起動物的致炎致癌反應(yīng)，并能促進(jìn)結(jié)腸上皮細(xì)胞產(chǎn)生炎癥因子。但由于卡拉膠的致炎機(jī)制尚不確定，導(dǎo)致它的使用安全性在國際上存在很大爭議。本試驗利用Caco

3、2和THP1細(xì)胞體外共培養(yǎng)模式，作為腸道炎癥研究的細(xì)胞模型的基礎(chǔ)上，通過ELISA試驗檢測免疫因子的分泌變化，初步判斷能引起免疫反應(yīng)的卡拉膠的在體內(nèi)發(fā)揮免疫反應(yīng)的過程。闡明這類物質(zhì)的使用限度及非安全性來源。研究領(lǐng)域?qū)⒊蔀槟壳皣H上關(guān)于卡拉膠的致炎模型使用、食品安全評價和海洋藻類多糖應(yīng)用前景的焦點。本實驗的研究結(jié)果對推動卡拉膠在食品添加劑行業(yè)的重新定位提供幫助，對確定卡拉膠在食品添加劑中的使用種類、使用劑量具有參考價值；而炎癥機(jī)理的初步探

4、索將為今后進(jìn)一步研究卡拉膠致炎機(jī)理提供新的依據(jù)；同時，也給海藻寡糖或多糖在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用提供了可開拓的空間和安全性的指導(dǎo)。二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問題：二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問題：1、建立Caco2和THP1細(xì)胞共培養(yǎng)模型在體內(nèi)腸系統(tǒng)中，分布著結(jié)腸上皮細(xì)胞和人巨噬細(xì)胞，當(dāng)腸道受到致炎物質(zhì)刺激時，首先表現(xiàn)為腸上皮單層細(xì)胞完整性的破壞并導(dǎo)致細(xì)胞因子IL8的分泌增加，IL8是一種強(qiáng)而有力的中性粒細(xì)胞趨化和活化因子，是介導(dǎo)由T

5、NFα引發(fā)炎癥的主要因子。在炎癥因子空白對照組：上層millicell上培養(yǎng)Caco2細(xì)胞，下層細(xì)胞培養(yǎng)板上飼養(yǎng)THP1細(xì)胞，不用卡拉膠樣品處理，用ELISA檢測上層細(xì)胞分泌IL8的情況和下層細(xì)胞分泌TNFα的情況；實驗組：上層millicell上培養(yǎng)Caco2細(xì)胞，下層細(xì)胞培養(yǎng)板上飼養(yǎng)THP1細(xì)胞。用卡拉膠樣品處理上層Caco2，用ELISA檢測上層細(xì)胞分泌IL8的情況和下層細(xì)胞分泌TNFα的情況；陰性對照組：上層millicell上

6、培養(yǎng)Caco2細(xì)胞，下層細(xì)胞培養(yǎng)板上沒有細(xì)胞，用卡拉膠樣品處理上層Caco2，用ELISA檢測上層細(xì)胞分泌IL8的情況。2.用共培養(yǎng)模型分析卡拉膠致炎作用：以各炎癥相關(guān)因子的產(chǎn)生和變化為指標(biāo)，細(xì)胞經(jīng)不同卡拉膠處理后：1）以酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測培養(yǎng)液中腫瘤壞死因子(TNFα)和白細(xì)胞介素8(IL8)來檢測THP1和Caco2細(xì)胞分泌因子的能力；2）綜合分析不同結(jié)構(gòu)的卡拉膠處理后，各因子的變化，評判其致炎情況；3）確定易引起炎