殼聚糖-絲素共混凝膠及其作為骨髓間充質干細胞培養(yǎng)支架的初步研究.pdf

1、內部呈三維網絡結構的高分子水凝膠具備較大的孔隙率，保水性強，力學性能與脂肪組織相近，是最有可能用作脂肪組織工程支架的一類材料。本文用殼聚糖與絲素蛋白共混，通過β-甘油磷酸鈉的誘導，制備可在較短時間內形成的殼聚糖/絲素共混凝膠，利用絲素蛋白對細胞的親和性提高殼聚糖凝膠對細胞的黏附和引導生長能力。研究凝膠中殼聚糖/絲素比例的改變對凝膠孔結構、粘彈性、抗壓強度的影響。并從SD大鼠活體內分離得到骨髓間充質干細胞（BMSCs），經CD34、CD9

2、0鑒定和地塞米松誘導分化成脂肪細胞，確認其干細胞的生物學特性后，接種于殼聚糖/絲素共混凝膠內，經體外培養(yǎng)，初步研究用殼聚糖和絲素共混后，形成的凝膠對細胞黏附和生長的影響。
　　首先，本文制備了不同質量比的殼聚糖/絲素共混凝膠，研究殼聚糖/絲素共混比對凝膠化時間、凝膠內部孔結構、凝膠的粘彈性和抗壓強度的影響。結果表明，殼聚糖和絲素蛋白混合溶液在β-甘油磷酸鈉的誘導下，可在較短時間內轉變成共混凝膠。殼聚糖/絲素比例為75/25及50/

3、50時，凝膠化時間分別為15min和25min。殼聚糖/絲素共混比為75/25、50/50、25/75的凝膠內部的平均孔徑分別為96.58μm、118.26μm和132.67μm，絲素所占的比例較大的凝膠內部的孔徑較大。壓縮性能和粘彈性測試結果表明，殼聚糖/絲素共混凝膠具有彈性材料的力學性能，當殼聚糖/絲素共混比為75/25時，凝膠顯示出較大的抗壓強度。
　　其次，分離獲得大鼠的BMSCs，進行CD34、CD90鑒定，并向成脂肪細

4、胞的誘導分化。CD34、CD90鑒定結果證明，采用本文所述方法成功地分離獲得了大鼠的BMSCs。獲得的BMSCs成漩渦狀生長，形態(tài)均一，細胞排列緊密且細胞生長至第6-7天時，細胞融合度達到80-90％。BMSCs經地塞米松的誘導后，經油紅O染色鑒定證明，可分化為脂肪細胞。
　　再次，將大鼠的BMSCs接種于殼聚糖/絲素共混凝膠內，初步研究了用殼聚糖/絲素共混后形成的凝膠對細胞黏附和生長的影響。體外培養(yǎng)后經激光共聚焦顯微鏡和掃描電子