基因CARD9在麻風病例及分枝桿菌感染的巨噬細胞中的表達研究.pdf

1、研究背景:
　　麻風病又稱漢森氏病，是由麻風分枝桿菌感染易感個體導致的慢性肉芽腫性傳染病，主要侵犯皮膚和外周神經，晚期可產生不可逆性畸殘發(fā)生。在機體識別和抵御麻風分枝桿菌的過程中，固有免疫和適應性免疫都發(fā)揮了重要的作用。由于機體對麻風分枝桿菌的免疫反應不同，使麻風臨床表現(xiàn)分為五型，且呈連續(xù)漸變的系譜狀分布。麻風分枝桿菌至今未被成功地體外培養(yǎng)，我們對于麻風分枝桿菌的認識還很有限，這也限制了我們對麻風發(fā)病機制的深入研究。
　　基

2、因CARD9位于9號染色體上，編碼胱天蛋白酶募集域蛋白9(caspase recruitmentdomain protein9，CARD9)。CARD9蛋白是CARD蛋白家族成員之一，是一種重要的銜接蛋白，能通過蛋白-蛋白相互作用調節(jié)細胞內信號傳導。CARD9是胞漿蛋白，在多種組織中都有表達，如:胸腺、脾、肺、骨髓等，尤其在骨髓來源巨噬細胞和樹突狀細胞中大量表達。它能調節(jié)炎癥反應，高效整合多種固有免疫受體傳導的信號，參與機體抵御真菌、細

3、菌、病毒等多種病原微生物的免疫應答。
　　研究目的:分析麻風患者與健康對照在皮膚組織和外周血中基因CARD9及其所在通路相關基因的表達差異，并利用小鼠巨噬細胞系進行感染實驗驗證，明確基因CARD9與麻風病之間的相關性，并對其作用機制進行初步的探討。
　　研究方法:
　　1.采用轉錄組測序(RNA-Seq)技術對27例（多菌型19例，少菌型8例）麻風患者的皮損組織及18例健康志愿者的正常皮膚組織進行轉錄組測序，分析CAR

4、D9的表達差異;采用qPCR技術檢測并比較11例患者皮損和5例健康對照正常皮膚組織中CARD9的mRNA表達水平;采用qPCR技術檢測并比較10例患者和11例健康對照全血中CARD9的mRNA的表達水平。
　　2.從27例麻風患者及18例健康志愿者皮膚組織轉錄組測序數(shù)據(jù)中選取與CARD9蛋白參與通路相關基因進行表達差異分析。
　　3.采用qPCR技術測定用不同感染濃度的海魚分枝桿菌刺激小鼠RAW264.7細胞后Card9的m

5、RNA的表達水平。
　　結果:
　　1.CARD9基因在麻風病例皮損中的表達明顯高于健康對照正常皮膚中，且此差異有統(tǒng)計學意義(RNA-Seq: p＜7.92E-5，qPCR: p＜0.007)，多菌型和少菌型患者之間的表達差異也存在統(tǒng)計學意義(p＜0.022)，在外周全血中CARD9基因表達未見明顯差異(p＜0.124)。
　　2.13個與CARD9通路相關的基因在麻風病例皮損與健康對照正常皮膚中表達存在顯著差異(p＜