miR-200c在膀胱癌上皮間質轉化作用機制的研究.pdf

1、目的：
　　本研究應用實時熒光定量PCR法檢測miR-200c在膀胱癌細胞株中的表達情況，并且通過上調或下調miR-200c在膀胱癌T24細胞中的表達來探索miR-200c對膀胱癌細胞株侵襲遷移能力的影響及miR-200c與Zebl構成的雙向負反饋調節(jié)通路對膀胱癌上皮間質轉化、侵襲遷移能力的調節(jié)作用。
　　方法：
　　1.選取膀胱上皮永生化細胞SV-HUC-1、膀胱癌細胞T24、5637，通過RT-PCR檢測各細胞系內

2、miR-200c的表達情況。
　　2.對膀胱癌細胞系T24進行RT-PCR及Western blot檢測ZEBl基因的表達，同時劃痕試驗、Transwell法檢測T24細胞的侵襲遷移能力，驗證ZEB1與腫瘤細胞侵襲及遷移能力的關系；
　　3.利用脂質體 Lipofectamin2000將人工合成的 miR-200c過表達質粒及miR-200c抑制劑轉染至膀胱癌T24細胞中，觀察ZEB1基因表達水平的變化及其對上皮間質轉化和腫

3、瘤細胞侵襲及遷移能力的調控。
　　4.構建穩(wěn)定過表達ZEB1的T24細胞株，觀察ZEB1過表達后miR-200c表達水平的變化及T24細胞侵襲遷移能力和上皮間質轉化的變化。
　　結果：
　　1.與膀胱上皮永生化細胞 SV-HUC-1相比，膀胱癌細胞 T24、5637中miR-200c呈低表達；與分化較好、級別較低的膀胱癌細胞5637相比，T24細胞內miR-200c的表達水平約為其1/4。
　　2. miR-20

4、0c過表達質粒轉然組與對照組相比，前者細胞表達ZEB1的水平明顯降低，且腫瘤細胞的侵襲遷移能力受到明顯抑制，E-cadherin表達上調， Vimentin表達下調，細胞發(fā)生間質上皮轉化；miR-200c抑制劑轉染組與對照組相比，前者 ZEB1的表達水平明顯增加，且腫瘤細胞的侵襲遷移能力增強， E-cadherin表達降低， Vimentin表達增加，細胞發(fā)生上皮間質轉化。
　　3.與對照組相比，過表達ZEB1的T24細胞miR-

5、200c的表達水平下降，細胞侵襲遷移能力增強，E-cadherin表達下調，Vimentin表達增加，細胞發(fā)生上皮間質轉化。
　　結論：
　　1. miR-200c在高級別、低分化的膀胱癌細胞中呈低表達，提示miR-200c可作為腫瘤抑制因子。
　　2. miR-200c可抑制膀胱癌細胞的侵襲轉移能力，miR-200c在膀胱癌細胞侵襲轉移過程中發(fā)揮重要作用。
　　3. miR-200c與ZEB1形成了的雙向抑制的