大鼠肝臟70％門靜脈分支高位結扎后功能、結構及自噬水平變化的研究.pdf

1、[目的]
　　通過高位結扎大鼠70％門靜脈分支建立肝纖維化模型，研究肝臟功能、結構及自噬相關蛋白表達的變化，發(fā)現大鼠肝纖維化模型建立的新方式，了解肝纖維化、肝組織代償性增生與細胞自噬的關系。
　　[方法]
　　1.把Wistar大鼠75只隨機分為3組:手術組30只、假手術組30只，正常對照組15只。手術組行70％門靜脈高位結扎術，假手術組行開腹、游離門靜脈、關腹術，對照組不做處理。手術組分別于術后3天、5天、7天、14

2、天、28天各取6只處死取肝臟及血液標本，假手術組分別于術后3天、5天、7天、14天、28天各取5只處死取肝臟及血液標本，空白對照組5只處死取肝臟及血液標本。
　　2.各組大鼠處死后，取血液標本檢測ALT、AST，取肝組織行Masson染色，進行肝臟組織肝纖維化程度半定量評分。
　　3.采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(Realtime R-T quantitative Polymerase ChainReaction，Real

3、time R-T qPCR)檢測各組肝星狀細胞(HSC)激活相關基因總α-SMA的表達及各組自噬相關基因總BECN1（表達Beclin1）的表達。
　　4.采用蛋白印跡法(Western-Blotting，WB)檢測各組肝臟組織肝星狀細胞激活相關蛋白α-SMA的總體表達及自噬相關蛋白Beclin1、LC3B等的總體表達情況。
　　5.統計學處理:用統計學軟件SPSS17.0統計分析，計量資料用均數±標準差(M±SD)，兩組間

4、比較采用t檢驗，組間差異比較用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統計學意義。
　　[結果]
　　1.各組大鼠一般狀態(tài)良好，手術組結扎側肝臟明顯萎縮，未結扎側肝臟代償性增大，隨著時間推移，更加明顯。肝臟與體重比相比結果:隨著結扎時間延長，結扎側逐漸減小(P＜0.05)，未結扎側逐漸增大(P＜0.05)，結扎側與未結扎側肝重比體重與假手術組和對照組無明顯差異(P＞0.05)，兩側肝臟總比重無變化。
　　2.大鼠70％門

5、靜脈分支高位結扎后，肝功能同對照組相比，轉氨酶有一過性升高(P＜0.01)，3天時血清中ALT、AST明顯升高，5天時逐漸恢復正常。假手術組轉氨酶有一過性升高(P＜0.05)，對照組無明顯異常(P＞0.05)。
　　3.肝臟組織行Masson染色，3天、5天各組無明顯變化，7天、14天、28天結扎側見纖維蛋白(P＜0.05)，28天最為明顯(P＜0.01);未結扎側呈代償性增生改變。假手術組、對照組無明顯變化(P＞0.05)。

6、r>　　4.Realtime RT-qPCR結果顯示，手術組結扎側α-SMA基因的表達量升高，隨著時間推移更加明顯(P＜0.05);未結扎側3天時一過性升高(P＜0.05)。手術組結扎側與未結扎側自噬相關基因Beclin1的表達量均有變化。3天時結扎側升高(P＜0.05)，未結扎側與對照組和假手術組相比較無差異(P＞0.05)，5天、7天、14天、28天未結扎側均高于結扎側，隨著時間推移更加明顯，結扎側該基因表達情況隨時間推移呈下降趨勢

7、，差異有統計學意義(P＜0.05)。假手術組與對照組無明顯差異(P＞0.05)。
　　5.WB(Western-Blotting)檢測各組肝臟組織總α-SMA蛋白結扎側含量升高，并隨結扎時間延長有增高趨勢(P＜0.01)。自噬相關蛋白Beclin1、LC3BⅡ/Ⅰ等總表達水平均有變化，3天時結扎側升高(P＜0.05)，未結扎側與對照組和假手術組相比較無差異(P＞0.05)，5天、7天、14天、28天未結扎側均高于結扎側，結扎側Be

8、clin1蛋白、LC3BⅡ/Ⅰ蛋白比值表達水平下調，隨著時間推移更加明顯，差異有統計學意義(P＜0.05)。假手術組與對照組無明顯差異(P＞0.05)。
　　[結論]
　　1.大鼠70％門靜脈分支高位結扎后，3天時轉氨酶升高，5天時轉氨酶恢復正常，可能與前期結扎側炎癥反應、肝萎縮有關，引起轉氨酶一過性升高、肝功能異常，5天時及以后肝臟功能代償，肝功能恢復正常。
　　2.相對于對照組及假手術組大鼠，手術組結扎側肝臟組織出

9、現萎縮，7天、14天、28天結扎側肝臟組織出現明顯的纖維化，未結扎側肝組織肝細胞明顯增殖，整個實驗過程中，肝臟占體重總比值不變。
　　3.手術組結扎側α-SMAmRNA及蛋白的表達量呈升高趨勢，提示肝星狀細胞的激活逐漸增多，肝纖維化逐漸加重，未結扎側α-SMA3天時稍升高可能與肝組織淤血及代償性增生的過程中HSC代償增殖有關，并呈下降趨勢。手術組結扎側與未結扎側均出現自噬相關蛋白Beclin1、LC3BⅡ/Ⅰ總表達量的變化，可能與