HDAC抑制劑苯丁酸鈉對離體和在體小膠質細胞活化的抑制作用.pdf

1、目的:隨著社會不斷發(fā)展，人口老齡化不斷加劇，阿爾茨海默病，帕金森病和多發(fā)性硬化等神經退行性疾病成為一個社會性的難題。目前尚沒有有效的手段預防或治療這些慢性疾病。腦內小膠質細胞的活化是幾乎所有神經退行性疾病的共同病理特征，其介導的神經炎性反應在疾病的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。因此，抑制小膠質細胞的炎性反應可能是攻克神經退行性疾病的重要突破口。
　　組蛋白去乙?；敢种苿?HDACI)能夠影響細胞組蛋白和其他染色質蛋白的乙酰化水平，是基

2、因表達的重要調節(jié)劑之一。大量研究表明，HDACI對中樞神經系統(tǒng)疾病有著潛在的治療意義。苯丁酸鈉(4-PBA)是一種短鏈脂肪酸類的HDACI，近些年的研究表明4-PBA在亨廷頓病和帕金森病模型中有神經保護作用，能減輕阿爾茨海默病轉基因小鼠的認知障礙，減少腦缺血模型中神經元的凋亡。4-PBA對離體培養(yǎng)小膠質細胞的作用結果表明其對缺氧誘導的炎性反應有抑制作用，但4-PBA對小膠質細胞是否有毒性，在整體情況下是否能抑制小膠質細胞活化還需要進一步

3、的研究。
　　方法:使用脂多糖LPS誘導體內外小膠質細胞活化，新生24h SD大鼠原代小膠質細胞純化培養(yǎng)和原代混合膠質細胞培養(yǎng)，Griess試劑法測定原代小膠質細胞培養(yǎng)液炎性介質一氧化氮(NO)的含量;MTT法檢測原代小膠質細胞的生存能力;免疫熒光檢測小膠質細胞形態(tài);Western Blot檢測原代混合膠質細胞中Iba-1蛋白表達水平。整體實驗中，免疫組化檢測小鼠腦內小膠質細胞的形態(tài)和數量，Western Blot檢測小鼠腦內Ib

4、a-1蛋白的表達水平。
　　結果:一、苯丁酸鈉抑制體外原代培養(yǎng)的小膠質細胞的炎性反應
　　1.4-PBA抑制LPS活化的原代小膠質細胞NO的產生:與LPS模型組相比，4-PBA預處理組NO釋放量明顯降低，其差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），并有劑量反應關系。
　　2.4-PBA對原代小膠質細胞有一定的毒性作用:MTT實驗結果表明:4-PBA單獨給藥組與正常對照組相比OD值顯著下降(P＜0.05)，而治療組與正常對照組

5、和神經炎癥模型組相比均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。光鏡下活細胞形態(tài)觀察表明單獨給藥組和治療組都表現(xiàn)出細胞毒性，但后者沒有前者損傷明顯。
　　3.4-PBA抑制LPS引起的小膠質細胞形態(tài)活化:免疫熒光結果顯示，與神經炎癥模型組相比，4-PBA治療組小膠質細胞的活化程度減弱，胞體變小，Iba-1熒光染色強度減弱，4-PBA單獨給藥組小膠質細胞數目較對照組減少。
　　4.4-PBA下調小膠質細胞Iba-1的表達:原代膠質混合培養(yǎng)

6、體系中，4-PBA治療組與LPS模型組相比較，Iba-1表達降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，4-PBA單獨給藥組Iba-1表達與對照組相比略低，差異沒有統(tǒng)計學意義。
　　二、苯丁酸鈉抑制LPS急性炎癥模型小鼠腦內小膠質細胞的活化
　　1.4-PBA抑制急性炎癥模型小膠質細胞形態(tài)活化:與神經炎癥模型組相比，4-PBA治療組小膠質細胞的活化程度減弱，Iba-1免疫染色呈陽性的細胞數量減少(P＜0.05)。4-PBA單獨

7、給藥組細胞形態(tài)和數目與對照組沒有明顯差異。
　　2.4-PBA下調急性炎癥模型小膠質細胞Iba-1的表達:4-PBA治療組與LPS模型組相比較，Iba-1表達降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　3.4-PBA下調急性炎癥模型小膠質細胞炎癥因子的表達:4-PBA治療組與LPS模型組相比較，炎癥因子表達降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　4.4-PBA對腦內活化caspase-3的表達沒有影響。

8、r>　　三、苯丁酸鈉抑制LPS慢性炎癥模型小鼠腦內小膠質細胞的活化
　　1.4-PBA抑制慢性炎癥模型小膠質細胞形態(tài)活化:與神經炎癥模型組相比，4-PBA治療組小膠質細胞的活化程度減輕，Iba-1免疫染色減弱。
　　2.4-PBA下調慢性炎癥模型小膠質細胞Iba-1的表達:與模型組相比，治療組中，4-PBA能下調ICR小鼠大腦內Iba-1表達水平，蛋白條帶光密度值比較具有顯著性差異(P＜0.05)。
　　3.4-PBA

9、下調慢性炎癥模型小膠質細胞炎癥因子的表達:4-PBA治療組與LPS模型組相比較，炎癥因子表達降低，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結論:1.苯丁酸鈉抑制LPS誘導的原代小膠質細胞形態(tài)和功能的改變，并有細胞毒性。
　　2.苯丁酸鈉抑制LPS急性和慢性炎癥模型小鼠腦內小膠質細胞的活化。
　　3.苯丁酸鈉對整體動物腦內的小膠質細胞沒有明顯的毒性作用。
　　4.HDACI在離體和整體條件下抑制小膠質細胞活化的機