玻璃化冷凍牛卵母細胞受精能力研究.pdf

1、本試驗從屠宰場廢棄的牛卵巢表面抽取直徑在2～6mm的卵泡的卵泡液，并從卵泡液中分揀出外被多層卵丘細胞的卵丘卵母細胞復合體(COCs)，直接對COCs或者體外成熟培養(yǎng)后的卵母細胞采用不同的玻璃化冷凍方法進行冷凍保存，然后利用體外受精(IVF)和胞漿內(nèi)單精子注射(ICSI)兩種方法對玻璃化冷凍卵母細胞的受精能力進行了比較研究，旨在建立能夠進一步提高牛冷凍卵母細胞受精能力的改進方案，使卵母細胞冷凍技術(shù)上升到與胚胎冷凍同樣成熟的水平。

2、1 減輕損傷方案對冷凍卵母細胞IVF的影響 使用選擇合適時期的卵母細胞進行冷凍；采用最小樣本量玻璃化冷凍方法進行冷凍；在解凍后先孵育再進行體外受精等三種方案能夠部分維持或恢復冷凍牛卵母細胞IVF受精能力。選擇成熟培養(yǎng)的卵母細胞進行冷凍，其卵裂率顯著高于直接冷凍的卵泡卵母細胞(GMP組P<0.01(19.5％vs 11.6％)，straw組P<0.05(17.6％vs 10.3％))。選擇GMP法作為冷凍方法，其與straw法相比

3、，前者冷凍的卵泡卵母細胞(11.6％vs10.3％)和成熟卵母細胞(19.5％vs 17.6％)的卵裂率均優(yōu)于后者，但無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。選擇解凍后孵育lh和3h組，其受精率顯著高于對照組(P<0.05)，孵育1h、2h、3h組之間受精率無顯著差異(P>0.05)，同樣，它們之間的卵裂率也無統(tǒng)計學上的差異(P>0.05)，但在數(shù)值上呈現(xiàn)遞減趨勢，并且都比對照組要高，但也無顯著差異(P>0.05)。 2 直接穿透透明帶的

4、ICSI技術(shù)探討 在ICSI方面的研究結(jié)果表明，選擇DTT進行受精前精子處理得到的受精率和卵裂效果優(yōu)于其它各組，與對照組差異顯著(P<0.05)，與其它兩個添加組差異不顯著(P>0.05)，而對應的冷凍卵母細胞IVF前精子處理結(jié)果表明，肝素組的受精率和卵裂率顯著高于咖啡因組(P<0.05)和對照組(P<0.01)，但與DTT組無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。由于本試驗是針對受精能力的研究，因此要盡量排除孤雌胚的影響，通過對受精卵母

5、細胞進行篩選，在一定程度上減少了由于激活處理而導致的大量孤雌胚對卵裂率的干擾，但也因此使ICSI的卵裂率均低于IVF中的對應處理組。另外，不同注射方法的研究表明，電壓和氣壓法的卵裂率顯著高于油壓法(P<0.05)，電壓法效果最好，但與氣壓法無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。 3 冷凍卵母細胞ICSI和IVF受精效果比較研究 IVF和ICSI的對比研究表明，無論是新鮮的還是冷凍的卵母細胞，IVF的受精率和卵裂率均顯著高于對應的

6、ICSI組(均為P<0.1)。在IVF組中，新鮮卵母細胞的受精率和卵裂率均顯著高于冷凍組(P<0.01)。但在ICSI組中，新鮮和冷凍卵母細胞組的受精率和卵裂率均無顯著差異(P>0.05)。換個角度比較，把新鮮卵母細胞IVF和ICSI得到的卵裂率均設(shè)為1，冷凍卵母細胞IVF和ICSI得到的卵裂率則對應的比值分別為0.529和0.928?？梢奍CSI與IVF相比，由于前者能夠直接穿透透明帶，因此能夠有效地克服因冷凍而造成的透明帶硬化，從而