牛卵母細胞玻璃化冷凍保存及胚胎移植的研究.pdf

1、　　本文就牛卵母細胞玻璃化冷凍保存以及冷凍胚胎移植黃牛進行了研究。 一、牛卵母細胞玻璃化冷凍研究　　以二甲基亞砜(DMSO)和乙二醇(EG)作為冷凍保護劑，分別用0.25mL細管和OPS冷凍體外成熟的牛卵母細胞。解凍后進行孤雌激活。試驗1：以DMSO+EG作為冷凍液，分別用0.25mL細管和OPS冷凍培養(yǎng)22h的卵母細胞，解凍后繼續(xù)培養(yǎng)2h，進行孤雌激活。解凍后其形態(tài)完整率分別為90.6﹪和83.2﹪，差異不顯著(P＞0.05

2、)，卵裂率分別為32.3﹪和25.2﹪，差異也不顯著(P＞0.05)；試驗2：將成熟培養(yǎng)22h的卵母細胞分別在4﹪EG中平衡15min，或在10﹪EG中平衡10min后，移入35﹪EG+5﹪PVP中30s，用OPS進行冷凍。解凍后繼續(xù)培養(yǎng)2h，進行孤雌激活。解凍后其形態(tài)完整率分別為79.4﹪和62.2﹪，差異顯著(P＜0.05)，卵裂率分別為26.5﹪和10.5﹪，差異顯著(P＜0.05)；試驗3：分別用DMSO+EG和35﹪EG作為冷

3、凍液，用OPS冷凍成熟培養(yǎng)22h的卵母細胞，解凍后繼續(xù)培養(yǎng)2h，進行孤雌激活。解凍后其形態(tài)完整率分別為83.2﹪和79.4﹪，差異不顯著(P＞0.05)，卵裂率分別為25.2﹪和26.55﹪，差異不顯著(P＞0.05)。以DMSO+EG或35﹪EG+5﹪PVP作為冷凍液，以0.25mL細管和OPS冷凍牛卵母細胞均能取得理想的效果。在4﹪EG中預平衡的卵母細胞比在10﹪EG中預處理的冷凍效果好。 二、進口冷凍奶牛胚胎移植黃牛試驗

4、　　本試驗以兩種不同的同期發(fā)情方法，利用黃牛作為胚胎移植受體，移植冷凍進口奶牛IVF胚胎。試驗1：一次PG法。受體牛注射一次氯前列醇鈉(0.6mg)；試驗2：GnRH-PG法。受體牛先注射0.6mg氯前列醇鈉，9天后第一次注射LHRH-A375μg，注射之日為笫0天，第7天注射0.6mg氯前列醇鈉，48h后第二次注射LHRH-A375μg。同期發(fā)情的黃牛經(jīng)直腸觸診黃體合格后，移植進口冷凍奶牛IVF胚胎。結(jié)果表明，GnRH-PG處理效果較