黃芩苷的抗結核分枝桿菌作用機制的研究.pdf

1、目的：
　　自20世紀80年代結核病疫情重新上升，成為近年來最為重要的傳染病，耐藥菌株流行是結核疫情日趨嚴重的主要原因，與HIV感染及抗結核藥物使用不當、治療不合理、患者依從性差等有關，使抗結核化療藥物面臨嚴峻挑戰(zhàn)。近年來抗結核中藥領域研究較多，已開發(fā)出多種抗結核中藥，不易產生耐藥且毒副作用小。有實驗證實黃芩苷有廣泛的抗菌譜，但尚未有報道其對結核分枝桿菌是否有抑菌作用，故本實驗針對結核化療藥物毒副作用大且耐藥嚴重等問題，通過對黃芩

2、苷體外抑菌試驗及電子顯微鏡觀察黃芩苷作用前后結核分枝桿菌的細胞形態(tài)學變化，探討黃芩苷的抗結核分枝桿菌的作用及作用機制，為臨床開發(fā)新的抗結核藥提供理論基礎。
　　方法：
　　試驗通過制備改良羅氏培養(yǎng)基，配制濃度梯度為48mg/ml、12mg/ml、6mg/ml、3mg/ml、1.5mg/ml、0.75mg/ml、0.375mg/ml的含黃芩苷的培養(yǎng)基，并將臨床結核菌株接種于不同濃度的含藥培養(yǎng)基中，通過體外37℃溫箱孵育4周后，

3、觀察中藥黃芩苷在不同濃度梯度下對結核分枝桿菌的抑菌作用，利用絕對濃度梯度法判斷結果，以培養(yǎng)皿無菌落生長的最低藥物濃度為黃芩苷對該菌株的最低抑菌濃度(MIC)，并計算藥物對50％菌株的MIC(MIC50)及90％菌株的MIC(MIC90)。制備不含藥的空白培養(yǎng)基和含有不同MIC濃度黃芩苷的改良羅氏培養(yǎng)基，接種臨床菌株后，通過體外37℃溫箱孵育4周后，取正常結核分枝桿菌及不同抑菌濃度的黃芩苷作用后的結核分枝桿菌，經離心漂洗、固定、包埋、切片

4、、雙染色后通過投射電子顯微鏡觀察黃芩苷作用前后結核分枝桿菌的細胞形態(tài)學變化。
　　結果：
　　中藥黃芩苷體外抑菌試驗顯示：60株臨床結核菌株中，1株菌的MIC大于48mg/ml，故MIC為48mg/ml按0％計數；7株菌的MIC為12mg/ml，占11.67％；25株菌的MIC為6mg/ml，占41.67％；22株菌的MIC為3mg/ml，占36.67％；5株菌的MIC為1.5mg/ml，占8.33％。MIC在3-6mg/m

5、l范圍內的菌株數占78.34％，MIC在3-12mg/ml范圍內的菌株數占90.01％，其中3mg/ml的黃芩苷所占比例很接近6mg/ml的黃芩苷濃度所占比例，以6mg/ml的黃芩苷濃度所占比例最大。說明在體外抑菌試驗中，6mg/ml的黃芩苷濃度條件下絕大多數臨床結核分枝桿菌可被抑制。取不同抑菌濃度的黃芩苷作用后的結核分枝桿菌及空白培養(yǎng)基生長的正常結核分枝桿菌，經處理后通過電子顯微鏡觀察黃芩苷作用前后結核分枝桿菌的細胞形態(tài)學變化，發(fā)現：

6、通過投射電子顯微鏡可以清楚地觀察到結核分枝桿菌的正常形態(tài)和內部結構。隨著黃芩苷濃度的增加結核菌逐漸皺縮變形直至降解，菌壁及胞膜逐步部分或全部降解，部分胞質濃縮或疏散，電子密度降低，絲狀DNA消失。至3/4MIC時所有結核桿菌形態(tài)均不正常，整個桿菌結構模糊不清，菌壁消失，胞膜部分或全部降解，核糖體顆粒很少見，見不到絲狀DNA，部分核質濃聚，電子密度變低。
　　結論：
　　通過體外抑菌試驗發(fā)現黃芩苷對臨床60株結核分枝桿菌均有抑