商陸皂苷甲對CD4+T細胞分化為Th-17細胞及IL-17誘導的腎小球系膜細胞增殖的影響.pdf

1、目的：通過觀察商陸皂苷甲(EsA)對CD4+T細胞分化成Th-17細胞及其分泌的IL-17的影響，以及EsA對IL-17誘導的腎小球系膜細胞（rGMC）增殖的影響，探討EsA對增殖性腎炎的作用機制。
　　方法：①取雄性SD大鼠脾臟組織獲取淋巴細胞，將淋巴細胞分成對照組（僅含有淋巴細胞）、促分化組（加入 TGF-β、IL-6、IL-1β、TNF-α、CD3、CD28）及干預組（TGF-β、IL-6、IL-1β、TNF-α、CD3、C

2、D28及終濃度為5mg/L EsA進行干預）。培養(yǎng)72h后，收集細胞及培養(yǎng)基上清液，采用ELISA法檢測各組IL-17的水平；采用半定量 RT-PCR法檢測各組 IL-17mRNA的相對表達水平；流式細胞儀檢測IL-17-PE+標記的細胞百分比。②將 rGMC（細胞株 HBZY-1）分為對照組(僅加入rGMC)，IL-17(5ng/ml)組，IL-17(10ng/ml)組，IL-17(20ng/ml)組，IL-17(50ng/ml)組，

3、IL-17(100ng/ml)組，分別培養(yǎng)24h、48h、72h，MTT法檢測其對各組的rGMC增殖的影響，確定IL-17誘導rGMC增殖的作用濃度；將rGMC（細胞株HBZY-1）分為對照組（加入IL-17）、干預組（加入IL-17及終濃度為5mg/L EsA進行干預），分別培養(yǎng)24h、48h、72h，利用MTT法檢測各組的rGMC的增殖情況，ELISA法檢測各組細胞上清液中纖維連接蛋白（FN）的水平。
　　結果：①RT-PCR

4、檢測結果示：與對照組比較，促分化組及干預組IL-17mRNA相對表達水平升高；與促分化組比較，干預組的IL-17mRNA相對表達水平明顯降低。②流式細胞儀檢測結果示：與對照組比較，促分化組及干預組IL-17-PE+細胞所占百分比升高；與促分化組比較，干預組的IL-17-PE+細胞所占百分比降低。③ELISA法檢測IL-17結果示：與對照組比較，促分化組及干預組IL-17水平升高；與促分化組比較，干預組的IL-17水平明顯降低。④MTT法