CD147糖基化在小鼠肝癌細胞淋巴道轉移中的作用.pdf

1、本文的主要工作如下：1.CD147和Cav-1在小鼠肝癌細胞中的表達通過流式細胞術、RT-PCR、免疫印跡分析(Westernblotanalysis)Hca-F、Hca-P、Hepa1-6和IAR-20細胞中Cav-1、CD147及其糖型的表達情況。結果顯示，HG-CD147(分子量40～57kDa)在高轉移細胞株Hca-F中表達較多，在低轉移細胞株Hca-P中表達較少。而無轉移潛能的小鼠肝癌細胞株Hepa1-6中，LG-CD147(

2、分子量～33kDa)占主要部分，小鼠正常肝細胞株IAR-20中檢測不到CD147的表達。Cav-1在Hca-F、Hca-P和IAR-20細胞中均有表達，且IAR-20細胞的表達強度明顯低于Hca-F和Hca-P細胞，而Hepa1-6細胞無Cav-1表達。以上結果表明，CD147主要表達于具有淋巴道轉移潛能的細胞表面；Cav-1高表達可能與腫瘤的轉移有關，而Cav-1表達的缺如可能與原位癌有關。 2.CD147去糖基化在小鼠肝癌細

3、胞淋巴道轉移中的作用通過WestenBlot、體外黏附實驗分析去糖基化在小鼠肝癌細胞淋巴道轉移中的作用。結果顯示，用M糖基化抑制劑衣霉素處理Hca-F細胞后，HG-CD147表達量明顯減少，LG-CD147表達完全消失，但是出現一條27kDa的蛋白質條帶，為脫糖蛋白質條帶，是衣霉素抑制細胞表面糖蛋白糖基化的結果；Hca-G細胞與淋巴結切片間的黏附能力與對照組相比逐漸下降，且其抑制率在一定時間內呈現一定范圍的衣霉素濃度依賴性；與對照組相比

4、，MMP-11蛋白質表達隨著HG-CD147表達下調逐漸降低，而且其抑制程度在一定時間內呈現一定范圍的衣霉素濃度依賴性。以上結果表明CD147去糖基化不但影響MMP-11蛋白的表達，而且抑制Hca-F細胞的體外黏附能力，從而影響小鼠肝癌細胞淋巴道的轉移。 3.Cav-1調節(jié)CD147糖基化在小鼠肝癌細胞淋巴道轉移中的作用3.1Cav-1表達下調對CD147糖基化的影響通過RNA干擾技術特異性使小鼠肝癌細胞株Hca-F中Cav-1

5、表達下調時對CD147糖基化的影響。WestenBlot結果顯示，Hca-F/RNAi細胞中Cav-1的蛋白表達與未給予RNA干擾處理的對照組及RNA干擾對照組相比出現明顯下調；同時HG-CD147表達減少，LG-CD147表達增加；且MMP-11蛋白表達隨著HG-CD147表達下降而下調。體外遷移、侵襲實驗結果顯示，與未給予RNA干擾處理的對照組及RNA干擾對照組相比，Hca-F/RNAi細胞遷移及穿過基質膠的侵襲能力下降。以上結果表

6、明，下調Hca-F細胞中Cav-1表達，不但影響HG-CD147表達水平，而且下調MMP-11蛋白質表達；同時下調的Cav-1抑制Hca-F/RNAi細胞體外遷移、侵襲能力。 3.2Cav-1穩(wěn)定表達對CD147糖基化的影響通過轉染技術使Cav-1在小鼠肝癌細胞株Hepa1-6中穩(wěn)定表達時對CD147糖基化的影響。WestenBlot結果顯示，穩(wěn)定表達的Cav-1對HG-CD147和LG-CD147蛋白表達有直接的影響。與未轉染

7、細胞Hepa1-6及空質粒轉染的細胞Hepa1-6/Mock對照組相比，HG-CD147蛋白表達量明顯上調，而LG-CD147蛋白表達量顯著降低；同時MMP-11蛋白表達隨著HG-CD147表達增加而上調。體外遷移、侵襲實驗結果顯示，與未轉染細胞Hepa1-6及空質粒轉染的細胞Hepa1-6/Mock對照組相比，Hepa1-6/Cav-1細胞遷移及穿過基質膠的侵襲能力下降。以上結果表明，Hepa1-6細胞中Cav-1的穩(wěn)定表達不僅可以促

8、進LG-CD147向HG-CD147的轉化，還能誘導MMP-11蛋白表達；同時穩(wěn)定表達的Cav-1增強Hepa1-6/Cav-1細胞體外遷移、侵襲能力。 綜上所述，我們的研究表明，細胞表面的免疫球蛋白超家族CD147顯示獨特的分子特性；Cav-1在腫瘤中的生物學作用具有雙重性，既是抑癌基因而又能促進癌細胞增殖和轉移；CD147糖基化與Cav-1具有較高的相關性，并進一步闡明CD147的糖基化及其調節(jié)在腫瘤轉移中的重要作用，為抗腫