川西獐牙菜及龍膽苦苷對(duì)膽汁淤積大鼠肝臟MRP2、BSEP表達(dá)的影響.pdf

1、研究背景和目的:
　　膽汁淤積是由膽汁生成和流動(dòng)障礙所致肝臟疾病共同的臨床綜合征,也是直接導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷、肝功能衰竭的主要因素。膽汁淤積的治療目前除梗阻引起的可以進(jìn)行外科手術(shù)外,絕大多數(shù)膽汁淤積的臨床治療都缺乏行之有效的藥物。導(dǎo)致膽汁淤積的分子機(jī)制和保護(hù)機(jī)制十分復(fù)雜,現(xiàn)在主要認(rèn)為與肝細(xì)胞膜膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白功能的改變密切相關(guān),肝細(xì)胞膜膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白異常表達(dá)導(dǎo)致膽汁酸排泌障礙,肝細(xì)胞內(nèi)有毒物質(zhì)(如膽汁酸鹽)的積聚,造成肝臟損傷。膽鹽輸出

2、泵(BSEP)和多耐藥相關(guān)蛋白2(MRP2)是肝細(xì)胞毛細(xì)膽管膜面最重要的兩種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。BSEP的作用是通過(guò)消耗ATP將肝細(xì)胞內(nèi)各種結(jié)合型膽鹽轉(zhuǎn)運(yùn)到毛細(xì)膽管中,刺激膽鹽依賴性膽汁流的形成,是影響膽汁流最重要的因素;MRP2也消耗ATP跨膜主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)有機(jī)陰離子,包括結(jié)合型膽紅素、谷胱甘肽、電解質(zhì)、色素、毒素和植物甾醇等,使膽汁流成為排泄內(nèi)源性和外源性毒素的重要途徑。川西獐牙菜(Swertia mussotii Franch)自古被認(rèn)為具有利膽

3、護(hù)肝、清熱解毒、祛濕消炎的作用,民間多用做治療肝膽疾病。龍膽苦苷(Gentiopicroside)是其中主要的活性單體成分之一。本研究觀察川西獐牙菜及其單體成分龍膽苦苷對(duì)內(nèi)毒素所致大鼠膽汁淤積性肝損傷的保護(hù)作用,以及檢測(cè)肝細(xì)胞膽管膜面轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白BSEP和MRP2表達(dá)變化,進(jìn)一步評(píng)價(jià)川西獐牙菜及其單體成分龍膽苦苷對(duì)肝臟膽汁淤積的影響。
　　方法:
　　1、Sprague Dawley大鼠,清潔級(jí),雄性,體重200~230g,采用

4、隨分組的方式分為6組,每組5只:生理鹽水組、川西獐牙菜組、龍膽苦苷組、LPS+生理鹽水組、LPS+川西獐牙菜組,LPS+龍膽苦苷組,所有大鼠均于處理后16h取材。
　　2、測(cè)定各組實(shí)驗(yàn)大鼠膽汁流速,收取血清檢測(cè)血清生化指標(biāo)ALT,AST、TBIL, HE染色觀察肝臟組織病理;
　　3、采用Western blot及qRT-PCR檢測(cè)各組大鼠肝組織中BSEP和MRP2在轉(zhuǎn)錄以及蛋白水平的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、

5、LPS+生理鹽水組與生理鹽水組相比肝損傷指標(biāo)ALT、AST、TBIL明顯升高(P<0.05),膽汁流速明顯下降(P<0.05),病理?yè)p傷明顯;而與LPS+生理鹽水組相比,LPS+川西獐牙菜組和龍膽苦苷組ALT、AST、TBIL明顯下降(P<0.05),膽汁流速明顯升高(P<0.05),對(duì)大鼠肝損傷病理有顯著改善作用。
　　2、與生理鹽水組相比,川西獐牙菜組和龍膽苦苷組BSEP蛋白水平的表達(dá)明顯增高(P<0.05),mRNA水平無(wú)明

6、顯變化;LPS+生理鹽水組與生理鹽水組相比相比BSEP蛋白水平的表達(dá)明顯降低(P<0.05);與LPS+生理鹽水組相比,LPS+川西獐牙菜組和LPS+龍膽苦苷組BSEP蛋白水平的表達(dá)明顯增高(P<0.05);但各組之間BSEP mRNA變化均不明顯。
　　3、與生理鹽水組相比,川西獐牙菜組和龍膽苦苷組MRP2蛋白水平的表達(dá)明顯增高(P<0.05),mRNA水平無(wú)明顯變化;LPS+生理鹽水組與生理鹽水組相比相比MRP2 mRNA和蛋