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文檔簡介
1、目的:研究猿腎病毒40大T抗原基因永生化人前軟骨干細胞(IPSC)的生物學特性,探討其在骨軟骨瘤發(fā)生、增殖和轉移中的作用,從腫瘤干細胞的角度探討遺傳性多發(fā)性骨軟骨瘤的發(fā)生機制。
方法:取人流產胎兒前軟骨干細胞(PSC),利用脂質體介導的基因轉染技術將含有SV40Tag的質粒pCMVSV40T/PUR轉染原代培養(yǎng)的人前軟骨干細胞,經嘌呤霉素篩選,陽性克隆擴大培養(yǎng),觀察細胞的形態(tài)學,以及傳代復蘇的情況,繪制細胞生長曲線。用免疫
2、熒光細胞化學技術檢測IPSC中FGFR-3,用RT-PCR檢測IPSC中V40Tag和FGFR-3的表達。
結果:培養(yǎng)后的永生化人前軟骨干細胞(IPSC),形態(tài)與前軟骨干細胞(PSC)大體一致,傳代、凍存、復蘇對IPSC的存活率無影響,而第六代和第十代PSC的存活率降低(P<0.01)。與第六代和第十代PSC相比,IPSC增殖較旺盛,群體倍增時間短、增殖率較高(P<0.01)。免疫熒光結果顯示IPSC的FGFR-3表達陽性
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