沙利度胺和人間充質干細胞對單側輸尿管梗阻大鼠腎間質纖維化的作用.pdf

1、目的:通過體內試驗探討沙利度胺和人間充質干細胞對單側輸尿管梗阻大鼠腎間質纖維化的影響及機制。
　　 方法:(1)40只雌性SD大鼠隨機分為假手術組(Sham組),模型組(UUO組),沙利度胺治療組(Thalidomide,200mg/kg/d,Thd組)和洛丁新治療組(Lotensin,10mg/kg/d,Lot組)(每組n=10只)。治療組于手術日起分別予沙利度胺、洛丁新灌胃,每日1次,直至處死動物；模型組和假手術組給予等量溶

2、媒生理鹽水灌胃。術后第7天、第14天采血檢測腎功能后,取腎組織,分別行HE和Masson染色了解腎間質纖維化病變,免疫組織化學和實時熒光定量PCR(RT-PCR)檢測缺氧誘導因子1-α(HIF-1α)、Ⅰ型膠原(ColⅠ)及α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)在腎組織的表達。(2)從人骨髓中分離培養(yǎng)MSCs,經流式細胞分析(FCM)鑒定、檢測HMSCs純度并傳代培養(yǎng)。36只雌性SD大鼠隨機分為假手術組(Sham組),模型組(UUO組)和HM

3、SCs治療組,每組12只。建立UUO大鼠模型,HMSCs治療組于術后即刻及術后一周經尾靜脈注射細胞濃度為1×107/0.5ml的HMSCs1×107,Sham組及模型組于術后即刻及術后一周經尾靜脈注射等體積溶媒即不含血清的DMEM-LG培養(yǎng)液。于術后1月、2月每組取大鼠6只,檢測腎功能、血漿白蛋白,取腎組織行HE、Masson染色檢測腎間質纖維化病變,免疫組化及RT-PCR檢測HIF-1α、ColⅠ、α-SMA在腎組織的表達。
　

4、　 結果:(1)UUO組術后各時間點血尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平均高于Sham組(P<0.05)。Thd組、Lot組BUN和Scr水平較UUO組明顯下降,但仍高于Sham組(P<0.05),Thd組和Lot組組間無差異(P>0.05)。(2)Sham組腎臟病理無明顯改變；UUO組、Thd組和Lot組術后各時間點出現(xiàn)腎間質損害,UUO組比Thd組和Lot組嚴重(P<0.05),Thd組和Lot組組間無明顯差異(P>0.05)

5、。(3)免疫組化和RT-PCR均顯示Sham組術后各時間點HIF-1α、ColⅠ均為少量表達,α-SMA無表達；UUO組術后各時間點HIF-1α、ColⅠ、α-SMA表達水平均較Sham組明顯增加；Thd組和Lot組ColⅠ、α-SMA表達水平均低于UUO組(P<0.05),但仍高于Sham組(P<0.05)；Thd組HIF-1α水平低于UUO組(P<0.05),Lot組HIF-1α水平與UUO組比較無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。(4)

6、術后1月、2月HMSCs組BUN和Scr水平均明顯高于Sham組,顯著低于UUO組。(5)Sham組腎臟病理無明顯改變。UUO組、HMSCs組出現(xiàn)腎間質損害(P<0.05),但兩組間無明顯差異。(6)免疫組化和RT-PCR均顯示HMSCs組HIF-1α、α-SMA表達水平均低于UUO組(P<0.05),但仍高于Sham組(P<0.05)；ColⅠ表達水平低于UUO組,但差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　 結論:Thd可在一