microRNA在PC12細胞CoCl-,2-誘導分化過程中的表達差異分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、MicroRNAs是一類長約22個核苷酸、進化上高度保守的內源性非編碼RNA，通過轉錄后水平調節(jié)靶基因發(fā)揮作用。許多miRNAs(如miR-124，miR-9a)在神經細胞分化與增殖中起到了非常重要的作用。大鼠嗜鉻細胞瘤細胞(PC12細胞)具有神經嵴源性，使用COCl2誘導48小時后，可以產生神經突觸樣突起，因此PC12細胞常用作神經細胞分化的模型。本論文探討了microRNA在PCl2細胞COCl2誘導分化過程中的作用。 首先

2、，我們使用CoCl2誘導PC12細胞分化，建立了缺氧.神經分化的細胞模型。用150uM COCl2處理PC12細胞24h及48h后，缺氧誘導因子HIF-1α及HIF-1α下游基因VEGF表達升高，說明缺氧處理有效，并且在光鏡下可見PC12細胞出現類神經元的分化。 然后，我們應用microarray芯片技術，檢測PC12細胞COCl2誘導分化過程中348種大鼠miRNA的表達差異，結果提示COCl2誘導24h后，22個miRNA表

3、達上升，21個miRNA表達下調；COCl2誘導48h后，45個miRNA表達上升，30個miRNA表達下調。我們選定2個代表性的microRNA：miR27b(表達顯著下調)和miR325-3p(表達顯著上調)作為研究對象。并應用RT，Real Time PCR試驗來驗證miRNA27b和miR325-3p在PC12細胞COCl2誘導分化過程中的表達差異，結果發(fā)現miR27b表達水平持續(xù)下降，miR325-3p表達水平持續(xù)上升，與芯片

4、結果一致。 在此基礎上，應用脂質體向PC12細胞中轉染合成的成熟miR27b，在轉染后48小時， Real Time PCR實驗結果提示轉染后PC12細胞中miR27b含量明顯高于未轉染PC12細胞中miR27b的水平(15:1)，但轉染miR27b對PC12細胞CoCl2誘導分化過程并無明顯影響。同時，通過脂質體轉染方法向CoCl2誘導的PC12細胞內導入外源性miR325-3p反義序列，我們發(fā)現細胞內miR325-3p反義序

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