純鈦鈦片表面改性對MG-63細胞分泌和表達OPG-RANKL mRNA影響的實驗研究.pdf

1、目的：本課題主要研究純鈦鈦片表面改性后的表面微形貌對MG-63人成骨樣細胞分泌和表達OPG/RANKL mRNA的影響，從細胞和分子生物學角度探討生物材料表面微形貌與MG-63人成骨樣細胞生物學行為的相關性，為研究鈦種植體一骨組織界面的作用機理以及鈦種植體的表面改性和臨床應用提供理論依據。 材料和方法： 1．采用砂磨拋光，陽極氧化和噴砂-酸堿處理的方法構建三種不同的鈦片表面微形貌，分別記為PT組，AO組和SB-AB組。掃

2、描電子顯微鏡(SEM)觀測鈦片表面微形貌，AMBIOS XP-2臺階儀測量表面粗糙度。 2．MG-63人成骨樣細胞接種于改性后的鈦表面和對照玻片表面，收集第2，4，6，8天的細胞采用RT-PCR和real timePCR法檢測OPG mRNA的表達量。 3．MG-63人成骨樣細胞接種于改性后的鈦表面和對照玻片表面，收集第2，4，6，8天的細胞采用RT-PCR和real timePCR法檢測RANKL mRNA的表達量。

3、 結果： 1．處理后的鈦片經掃描電鏡觀察均具有各自典型的特征形貌，PT組表面為方向一致的機械劃痕；AO組表面形成孔隙均勻分布的蜂窩狀表面，微孔大小約0.5-1um；SB-AB組表面具有多孔網狀的凝膠層結構，孔隙直徑在5-10um之間。粗糙度測試結果為SB-AB組>PT組>AO組，其中SB-AB組的粗糙度平均值為3.4um。 2．MG-63人成骨樣細胞與不同表面改性的鈦片共同培養(yǎng)，所分泌的OPGmRNA具有表面依賴性

4、和時間依賴性。OPG對不同表面改性后的鈦片表面微形貌的調控具有敏感性，SB-AB組和AO組對OPGmRNA有明顯上調優(yōu)勢；OPGmRNA的表達和時間呈正相關。表面微形態(tài)和時間還存在交互作用，對MG-63細胞OPGmRNA的調控有協同效應。 3．MG-63人成骨樣細胞與不同表面改性的鈦片共同培養(yǎng)，粗糙度較大的SB．AB組和PT組表面表達的RANKL mRNA高于AO組和對照組。其時相性在第6天出現峰值，之后呈下降趨勢。 結

5、論： 1．不同的表面改性方法形成不同的鈦表面微形貌，PT組表面以方向一致的機械劃痕為特征；AO組具有均勻的蜂窩狀微：SB-AB組可獲得大孔勘套小孔的多孔隙結構，同時表面生成鈦凝膠層。 2．OPG mRNA在鈦片表面的表達呈表面依賴性和時間依賴性。一定表面粗糙度和微孔結構以及足夠的作用時間對OPG mRNA的表達有上調優(yōu)勢，表面微形態(tài)和時間對OPG mRNA的表達有協同作用。 3．RANKL mRNA的表達與材料表