顳葉癲癇大鼠海馬Rnd1 mRNA及蛋白表達的動態(tài)變化研究.pdf

1、本文動態(tài)觀察小分子GTP酶Rho家族的Rnd1 mRNA及其蛋白在氯化鋰一匹羅卡品致癇大鼠模型海馬齒狀回門區(qū)、CA1區(qū)及CA3區(qū)中的表達變化，探討其在顳葉癲癇發(fā)生發(fā)展中的作用。文中選用健康的雄性SD成年大鼠124只，隨機分為正常對照組及癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)后8h、24h、3d、7d、15d、30d、60d組。腹腔注射氯化鋰(LiCI)及匹羅卡品(PILO)制備顳葉癲癇模型。SE誘導成功后每天定時觀察動物的行為活動及自發(fā)發(fā)作情況，并于8h

2、(急性期)、7d(靜止期)、60d(慢性期)進行腦電圖(EEG-)記錄，進一步驗證模型制作情況。用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測SE后各時間點海馬內Rnd1 mRNA的表達變化，并用免疫組織化學染色法檢測齒狀回門區(qū)、CA1區(qū)及CA3區(qū)中該蛋白在各時間點的表達變化情況。 1．動物模型：模型組動物經藥物腹腔注射誘導發(fā)作達RaccineⅣ級以上，并持續(xù)1min后，即進入癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)，維持60min左右給予10﹪水合氯醛

3、終止發(fā)作，急性期持續(xù)時間為24～48h。存活的大鼠經過18～28天的靜止期后進入慢性期，表現(xiàn)出自發(fā)性反復發(fā)作。急性期及慢性期大鼠EEG檢查示癲癇樣異常放電。SE誘發(fā)成功率為88.4﹪，模型成功率達68.8﹪，總死亡率為19.6﹪。 2．RT-PCR比較對照組和各模型組Rnd1 mRNA/β-actin mRNA的光密度比值發(fā)現(xiàn)，氯化鋰-匹羅卡品致癇大鼠海馬于SE后8h內即出現(xiàn)Rnd1表達上調，SE后約1d達高峰，7d左右回復至對

4、照組水平，此后其mRNA表達水平與對照組相似。 3．免疫組化：免疫組化染色發(fā)現(xiàn)Rnd1的免疫反應產物呈棕褐色，在海馬內廣泛表達，以齒狀回門區(qū)及CA1區(qū)為著。其中，Rnd1蛋白表達從SE后8h內即開始上調，約3d達高峰，至7d雖略有回落，但仍高于對照組水平，且這種情況可一直持續(xù)至慢性期。而在慢性期時CA1區(qū)又再次出現(xiàn)Rnd1蛋白表達的上調。 文中通過研究得出結論：急性期海馬齒狀回門區(qū)Rnd1表達的上調，可能通過促進MFS的