以腫瘤新生微血管內皮細胞為靶點的腫瘤基因治療及微循環(huán)學實驗研究.pdf

1、中國協(xié)和醫(yī)科大學博士學位論文以腫瘤新生微血管內皮細胞為靶點的腫瘤基因治療及微循環(huán)學實驗研究姓名：賈士東申請學位級別：博士專業(yè)：生物醫(yī)學工程指導教師：修瑞娟賀福初2000.7.1中國協(xié)和醫(yī)科大學博士學位論文2中文摘要腫瘤的生長要求持續(xù)的血管新生束提供養(yǎng)分，抑制腫瘤血管新生療法可以控制腫瘤生長和轉移，伯前受到廣泛矚目。相對抗腫瘤血管新生的蛋白療法需重復給藥和費用高昂的缺點基因治療可以長期、穩(wěn)定、廉價地表達外源抗血管新生蛋白達到異曲同工的效果

2、。但是目前抗腫瘤血管新生的研究基本都局限于腫瘤細胞本身，缺乏對腫瘤微血管和微循環(huán)的觀察。因此j本研究通過小鼠內皮抑制素(Endostatin，Es)基因治療柬研究抗腫瘤血管新生療法對腫瘤生長、轉移的抑制作用，以及對腫瘤微循環(huán)功能的影響。映驗包括下列內容：L1以昆明小鼠肝臟總RNA為模板，經RTPCR克隆獲得了EscDNA并測序實證，構建pSecTa92Es(Es)、pSecTa92一ES—TT(ESTT，TT源自t啪orneovaScu

3、laturetal苫etingpeptide)真核表達重組質粒，轉染Cos7細胞均獲融合蛋白表達，該轉染細胞上清可以誘導內皮細胞凋亡、抑制內皮細胞增殖：其中，Es組抑制內皮細胞增殖的作用強于EsTT組(p005)。2在9同齡雞胚尿囊膜血管新生實驗中，psecTa92一Es與甲基纖維素聯(lián)合作用于雞胚尿囊膜新生血管網(wǎng)72小時，可以抑制微血管網(wǎng)絡的形成。3將荷Lewis癌的C57小鼠肌肉注射質粒DNA或DNA伊VP40偶聯(lián)物，ELlSA檢測到

4、ES／PvP40組C57小鼠血清中融合蛋白的表達，在ES／PVP40組和Es1vI伊VP40組腫瘤組織中融合蛋白濃度無統(tǒng)計學差異。腫瘤組織切片電鏡檢查和組織學檢查可見ES／PVP40組和ES—T1什VP40組中腫瘤細胞的凋亡和壞死，紅染新生血管減少，但各組腫瘤細胞增殖未見差異。肺組織HE染色僅在空白對照組和空載體對照組中可見肺轉移。質粒DNA與PVP40偶聯(lián)后，對腫瘤生長的抑制效率均明顯提高。ES與ES—TT融合蛋白的表達可抑制腫瘤生長