PRRSV-SCQ株結(jié)構(gòu)基因生物信息學(xué)及人工感染仔豬病理變化與超微結(jié)構(gòu)研究.pdf

1、本研究以頻繁發(fā)生繁殖障礙癥候群的母豬、出現(xiàn)頑固性呼吸癥狀和較高死亡率的仔豬飼養(yǎng)場(chǎng)為研究對(duì)象，運(yùn)用血清流行病學(xué)調(diào)查方法(ELISA檢測(cè)方法)，對(duì)四川地區(qū)(包括重慶市的部分縣市)的大型規(guī)?；i場(chǎng)的種豬、部分商品豬群以及小型種豬場(chǎng)采取抽樣和有針對(duì)性地對(duì)引種種豬進(jìn)行PRRS的血清學(xué)調(diào)查。然后進(jìn)行病毒的分離和病毒的分子生物學(xué)研究。主要研究包括：　　1.運(yùn)用IDEXX公司生產(chǎn)的ELISA檢測(cè)試劑盒對(duì)所采集的血清樣品進(jìn)行檢測(cè)?！　?.以出現(xiàn)繁殖障

2、礙的母豬的血清并通過(guò)ELISA檢測(cè)為抗體陽(yáng)性者，接種Marc-145單層細(xì)胞，經(jīng)盲傳至第四代時(shí)出現(xiàn)典型的細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)；細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)其中有球形的病毒粒子，粒子大小為40-80nm，核心直徑為20-40nm；用抗PRRSV特異性抗體能特異地中和病毒，中和指數(shù)為100?！　?.成功地建立了分離株SCQ人工感染斷奶仔豬的病理模型。　　4.根據(jù)GenBank中ATCCVR-2332的的全基因序列，設(shè)計(jì)了6對(duì)能特異性擴(kuò)增

3、出SCQ株的結(jié)構(gòu)蛋白基因的引物，以PRRSV-SCQ病毒株為基礎(chǔ)材料，應(yīng)用一步法RT-PCR方法，通過(guò)反應(yīng)條件和反應(yīng)參數(shù)的優(yōu)化，擴(kuò)增出SCQ株基因組中的包括ORF2、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF76個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白基因的cDNA片段，其大小分別為800bp、819bp、592bp、628bp、594bp和510bp?！　?.通過(guò)DSgene1.11分析軟件對(duì)cDAN文庫(kù)中的重組質(zhì)粒pRSF2、pRSF3、pRSF4、pRS