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文檔簡介
1、 本研究根據GeneBank(NCBI)中的FS基因編碼區(qū)序列，設計并合成了一對特異性引物。上游引物：5'-ATGGTCCGTCCCAAGC-3'，對應于FS基因編碼區(qū)第1-16位核苷酸；下游引物:5'-TTACCACTCTAGAATAGAAGATATAGG-3'，對應于FS基因編碼區(qū)第1008-1035位核苷酸。以巴馬小型豬的卵巢組織總RNA為模板，利用M-MLV反轉錄酶，通過反向聚合酶鏈式反應從豬卵巢的mRNA中擴增出相應的c
2、DNA片段。該擴增片段經純化后，連接到pMD18-T載體上擴增測序。 使用添加酶切位點的引物，經PCR擴增獲得FS基因，用BamH I和Sal I雙酶切后，定向插入到原核表達載體pET 32a+多克隆位點中，構建pET-Fo原核表達質粒，轉化大腸桿菌BL21。重組質粒pET-Fo經過鑒定后，用I PTG誘導表達，經SDS-PAGE和Western Blotting分析，證明已成功地表達了FS的融合蛋白(約58KD)，此融合蛋白以包
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