冬凌草組織培養(yǎng)、毛狀根誘導和離子束處理冬凌草種子當代效應初探.pdf

1、冬凌草Rabdosia Rubescens(Hcnsi)Hara又名冰凌草,屬唇形科香茶菜屬,多年生草本或亞灌木植物,主要分部在我國河南、四川、安徽等中西部地區(qū)。以地上部分入藥,據分析,其主要內含物為冰凌草甲素、乙素、丙素和丁素,其中冰凌草甲素和乙素有明顯的殺菌作用,為其有效抗腫瘤成分,對多種癌病均有一定療效,被譽為“中藥里的盤尼西林”。此外,冬凌草還具有水土保持和園林觀賞作用[1-2]。近年來由于亂砍濫伐造成了野生冬凌草資源的匱乏。<

2、br>　　本課題運用植物組織培養(yǎng)技術,毛狀根誘導技術和離子束處理技術,結合正交實驗、薄層層析法和高效液相色譜法等,考察了不同激素配比對冬凌草組培苗生長和愈傷組織誘導的影響;利用發(fā)根農桿菌A4感染冬凌草葉片誘導其產生毛狀根;并對冬凌草種子進行離子束輻照,研究不同劑量的離子束照射對冬凌草組培苗生長和冬凌草甲素含量的影響。通過研究得出如下結果:
　　1.以MS為基本培養(yǎng)基,運用正交設計方法,利用植物組織、細胞培養(yǎng)技術,成功地建立了冬凌草

3、的組織培養(yǎng)快繁技術體系。研究出:不定芽誘導的最適培養(yǎng)基為MS+0.2 mg·L-1 IBA+0.1 mg·L-16-BA+0.2 mg·L-1 NAA;生根培養(yǎng)基為1/2 MS+1 mg·L-1 IBA+1 g·L-1活性炭;以冬凌草莖段為外植體誘導愈傷最佳培養(yǎng)基為MS+1.5 mg·L-16-BA+2 mg·L-12,4-D。
　　2.利用發(fā)根農桿菌A4感染冬凌草葉片,采用L9(34)正交設計法優(yōu)化冬凌草的毛狀根誘導條件。結果表

4、明:葉片最佳預培養(yǎng)時間為4天,發(fā)根農桿菌浸染葉片的最佳時間為20min,最佳共培養(yǎng)時間1d。
　　3.利用4種不同劑量離子束對冬凌草種子進行輻照,對其發(fā)芽率、發(fā)芽勢和由其長成的組培苗苗高,葉片數和葉片面積進行統(tǒng)計分析,得出:經過處理的種子發(fā)芽勢比沒有經過處理的種子發(fā)芽勢低,而處理過的種子發(fā)芽率比未經處理的都要高。另外,處理劑量為1×1016 N+/cm2時種子的發(fā)芽勢和發(fā)芽率都較其他劑量高,其發(fā)芽勢和發(fā)芽率隨注入劑量的增加先降低,

5、隨后又有升高,呈“馬鞍型”;不同劑量N+注入的冬凌草種子在無菌條件下生長成的組培苗,株高、葉片數和葉面積隨著處理劑量的增加呈現先升后降的變化。同時,運用超聲提取法,將冬凌草組培苗中的冬凌草甲素提取后分析,得出,不同劑量離子束處理的冬凌草種子無菌條件下生長成的組培苗,其所含的冬凌草甲素含量也隨劑量的增加而出現升-降-升的特點,當處理劑量為4×1015 N+/cm2時冬凌草組培苗中的冬凌草甲素含量達到最高值。但是總體上看經過離子束處理種子長