簡介：目的觀察柔木丹顆粒聯(lián)合替比夫定治療慢性乙型肝炎，在改善臨床癥狀體征、提高療效ALT復常、HBEAG陰轉抗HBE血清轉換、HBVDNA轉陰等方面的優(yōu)勢，以及長期治療的安全性，并初步探討其作用機理。方法臨床選擇符合納入標準的證屬氣血阻滯瘀毒型慢性乙型肝炎患者75例，隨機分為兩組，治療組38例，對照組37例。最后收集完整病例共68例，治療組34例給予柔木丹顆粒聯(lián)合替比夫定口服；對照組（34例）單純給予替比夫定口服，療程均為52周。治療結束后，觀察兩組的臨床療效及血清生化學、HBEAG陰轉抗HBE血清轉換、HBVDNA轉陰等指標的情況。結果臨床研究顯示，治療組總有效率為6471％，HBEAG轉陰率及抗HBE血清轉換率分別為3529％、2941％，HBVDNA轉陰率為6471％；對照組總有效率為5882％，HBEAG轉陰率及抗HBE血清轉換率分別為3235％、2647％，HBVDNA轉陰率為5882％。治療組在治療總有效率、乙肝病毒血清標志物陰轉率、HBVDNA載量轉陰率等方面，均優(yōu)于對照組，但差異無統(tǒng)計學意義（P﹥005）。治療組在臨床癥狀體征改善情況、癥狀體征總積分、生化指標改善情況等方面，均優(yōu)于對照組，并且差異有顯著統(tǒng)計學意義（P﹤005）。結論柔木丹顆粒聯(lián)合替比夫定治療氣血阻滯瘀毒型慢性乙型病毒性肝炎，具有較好的療效，能夠明顯改善臨床癥狀，提高患者生活質量；并且優(yōu)于單純應用替比夫定。

簡介：目的對中醫(yī)藥于小兒輪狀病毒腸炎的治療進展作出綜述，并提出存在于其現(xiàn)代臨床研究中的相關問題。利用宏基因組學方法，通過動物實驗，探索代表方劑七味白術散治療小兒輪狀病毒腸炎的腸道微生物機制。方法本研究包括文獻綜述及動物實驗兩部分。文獻研究部分綜述了古今與治療輪狀病毒腸炎相關的中醫(yī)藥療法及其療效動物實驗部分，將9窩昆明乳鼠隨機分為對照組與治療組2組，均以輪狀病毒懸液灌胃致其感染后，治療組予七味白術散，對照組予等量生理鹽水。經(jīng)3日灌胃，分別取各組乳鼠結腸內容物，利用宏基因組學研究方法，分析腸道微生物功能基因的差異。結果大量臨床研究文獻表明，中醫(yī)藥在治療輪狀病毒腸炎上，不僅方法多樣，且療效顯著，但迄今很多臨床研究的設計及實施仍存在不足之處，諸如樣本量不足、欠缺多中心研究、治療方案無法標準化、對照組的設置問題、診斷及療效的判定標準未作說明等。動物實驗結果發(fā)現(xiàn)，七味白術散治療輪狀病毒腸炎感染乳鼠后，其腸道微生物代謝的多個功能基因，特別是與碳水化合物代謝相關的功能基因出現(xiàn)顯著改變。例如，在糖酵解通路中，編碼6磷酸果糖激酶、果糖二磷酸醛縮酶、3磷酸甘油醛脫氫酶等的基因上調，而編碼乳酸脫氫酶等的基因下調在丙酮酸代謝通路中，編碼丙酮酸甲酸裂解酶、丙酮酸脫氫酶、二氫硫辛酸脫氫酶、磷酸乙酰轉移酶等的基因上調在丙酸和丁酸相關代謝通路中，編碼琥珀酸輔酶A連接酶、羥?；o酶A脫氫酶等的基因上調。結論中醫(yī)藥治療小兒輪狀病毒腸炎有獨特優(yōu)勢，但其療效機制仍有待進一步深入研究。七味白術散的治療，改變了模型乳鼠腸道微生物代謝的相關功能基因，這可能是其減輕腹瀉癥狀的重要機制。

簡介：南方醫(yī)科大學2007級碩士學位論文大鼠FOX03A基因的克隆及其重組腺病毒載體的構建CONSTRUCTIONANDIDENTIFICATIONOFRECOMBINANTADENOVLRUSCARRYINGRAT量I。OX03AGENEA一●●1N一課題來源廣東省醫(yī)學科研基金B(yǎng)2008116專業(yè)名稱婦產(chǎn)科學學位申請人代婷婷指導教師何援利教授答辯委員會主席王沂峰教授張曉薇教授謝梅青教授李潔教授李志剛副教授劉木彪副教授年4月7日廣州碩士學位論文㈣幽㈣舢ⅢY17EL|17HIJJJOJJMTL；1LLLLL2IIIIFI2LLILLL大鼠FOX03A基因的克隆及其重組腺病毒載體的構建研究背景碩士研究生代婷婷指導教師何援利摘要卵巢功能早衰PREMATUREOVARIANFAILURE，POF是多種病因所致的卵巢功能衰竭，發(fā)生于青春發(fā)育后至40歲以前的婦女，以閉經(jīng)為主要臨床表現(xiàn)，并伴有血清雌二醇水平下降和促性腺激素水平上升。卵巢早衰在臨床上可出現(xiàn)岡雌激素低落而發(fā)生的潮熱、出汗、情緒不穩(wěn)定、疲乏、記憶力下降等神經(jīng)精神癥狀以及閉經(jīng)、外陰干燥、疼痛、尿頻、尿急等生殖泌尿道萎縮刺激癥狀和其他相應的臨床癥狀。因缺少雌激素的保護，有患者可能會出現(xiàn)心腦血管疾病和骨質疏松等伴發(fā)疾病。且大多數(shù)POF患者要受到不孕癥的困擾。特別是對有生育要求的POF患者，這將給她們帶來精神和身體上的極大痛苦。實驗室檢查可以發(fā)現(xiàn)POF患者血中FSH和LH持續(xù)在40IU／L以上，F(xiàn)SH升高更明顯，雌二醇E2常低于50“70PMOL／L。經(jīng)陰道超聲檢查可見POF患者子宮、卵巢小于生育期婦女，卵巢內無卵泡存在或雖有卵泡存在、但數(shù)目很少，卵泡直徑很少在LOMM以上，連續(xù)監(jiān)測無卵泡發(fā)育及成熟。POF的病因復雜，目前認為POF的發(fā)病與自身免疫功能異常、染色體異常、遺傳因素、代謝異常、醫(yī)源性及感染性因素等有關。近年來，惡性腫瘤的發(fā)病率呈持續(xù)升高，因化療而導致卵巢功能低下和不孕的患者日漸增多，成為POF發(fā)病的一個重要原因，化療藥物具有明確的卵巢毒性，主要通過誘導卵母細胞

簡介：NO20031013河必蓮鈄六蠆I學校代碼11919I中幽分類LJ博士研究生畢業(yè)論文逆轉錄病毒介導的小鼠白細胞介素23抗腫瘤效應及其機理研究研究生導師專業(yè)級學院郝京生單保恩教授免疫學第四臨床醫(yī)學院2003年3月一2004年12月2005年4月中文摘要問題有待于進‘步研究。本研究主要目的是深入探討IL一23的抗腫瘤效應、作用機理及其抗肝轉移的作用，以便為臨床應用提供實驗和理論依據(jù)。第一部分逆轉錄病毒介導的小鼠IL23基因在小鼠結腸癌細胞中的表達目的利用逆轉錄病毒作為載體將小鼠IL23MIL23基因轉染小鼠結腸癌細胞COLON26，建立分泌IL23的腫瘤細胞株COLON26／IL一23，并對其生長特點進行研究，為深入研究IL23的抗腫瘤作用奠定基礎。方法將攜帶MIL一23基因的逆轉錄病毒載體LXSN／IL23，經(jīng)過V2和PA317包裝細胞兩次包裝，利用該逆轉錄病毒將MIL一23基因導入COLON26細胞，經(jīng)G418篩選后獲得表達MIL23的陽性細胞克隆COLON26／IL23。用PCR和RT_PCR檢測目的基因的表達，’鸚町ELISA法檢測MIL23的產(chǎn)生及MIL23誘導的小鼠脾細胞IFN叫的產(chǎn)生，用MTT比色法檢測腫瘤細胞的體外增殖。用流式細胞儀分析COLON26／IL一23細胞表面H2KBMHCI類分子、IABMHCII類分子、CD80和CD86的表達。結果1分泌攜帶IL一23基因逆轉錄病毒病毒滴度為35103CFU佃1的PA317／IL23細胞株有MIL23MRNA的表達，培養(yǎng)上清中能檢測到MIL一233002OP∥LNL，其分泌的逆轉錄病毒可用于轉染腫瘤細胞。2建立了能表達MIL一23P19MRNA并分泌MIL一2395133P∥M1的COLON26／IL23細胞株。經(jīng)PCR證實，外源MIL23基因已整合到COLON26／IL23細胞的基因組中。在CONA存在下，COLON26／IL一23細胞的培養(yǎng)上清誘導小鼠脾細胞分泌的IFNY為35026P∥ML，明顯高于COLON26／LXSN細胞和COLON26細胞的培養(yǎng)上清所誘導的IFNV含量分別為41O3P∥1NI和4506PL；／M1P001。COLON26／IL23細胞在體外的細胞形態(tài)和生長速度與COLON26／LXSN和COLON26細胞無明顯差別。與C010N26細胞相比較，COLON26／IL23細胞表面H2KB和IAB的表達水平明顯下降P001；CD80和CD86的表達水平明顯提高F，001。結論COLON26／IL23細胞能夠分泌IL23IL23基因導入C010N26細胞后，對細胞的形態(tài)和增殖無影響；COLON26／IL23細胞表面H2KB和IAB的表達下降，而CD80和CD86的表達上升。

簡介：Y939935分類號；密級單位代碼10019學號TB030386飛嚼砉遺夭普博士學位論文SARS冠狀病毒傳代后遺傳穩(wěn)定性及重組S蛋白的表達與分析GENETICSTABILITYOFTWOSARSCOVISOLATESAITERPASSAGESANDEXPRESSIONANALYSISOFRECOMBINANTSPROTEINS研究生金浯武指導教師奎寶熬援一合作指導教師申請學位門類級別堡堂監(jiān)專業(yè)名稱生物化堂皇盆王生物堂研究方向動物盆王藍佳所在學院生物堂院二零零六年六月中國農(nóng)業(yè)大學博L學位論文ABSTRACTABSTRACTSEVEREACUTERESPIRATORYSYNDROMESARS，WHICHWASFIRSTLYOCCURREDINNOVEMBER2002，INGUANGDONGPROVINCEOFCHINA，ISALIFETHREATENINGRESPIRATORYDISEASEGLOBALLYBYAUGUST7，2003，8442PEOPLEWEREINFECTEDAND916PEOPLEDIED。WITHAMORTALITYRATEL1％，ACCORDINGTOTHEWHOSARSCORONAVIRUSISARNAVIRUSWHOSEREPLICATIONISERRORPRONEWHICHIEADSTOEVOLUTIONOFNEWVIRALSTRAINSDURINGTHEPASSAGEORTRANSMISSIONANDISAMECHANISMBYWHICHVIRUSESESCAPEHOSTDEFENSESLOTSOFVARIATIONS，WHICHAREVERYUSEFULFORDEVELOPMENTOFEFFICIENTVACCINE，WEREDETECTEDAMONGSEPARATESARSCOVSTRAINSANDGENETICSTABILITYOFSARSCOVISIMPORTANTINTHERESEARCHOFINACTIVATEDVACCINETHEWHOLEGENUINESEQUENCESOFTWOSARSCORONAVIUSAFTERPASSAGESINVEROCELLCULTUREWEREDETERMINEDANDWERECOMPAREDWITHTHOSEOFEARLYPASSAGES，RESPECTIVELYRESULTSSHOWEDTHATBOTHSARSCORONAVIRUSHAVEHIGHGENETICSTABILITYALTHOUGHNEARLYTENGENERATIONSWEREPASSEDFOURNUCLEOTIDEVARIATIONSWEREOBSERVEDBETWEENTHE2“PASSAGEANDTHE1I“PASSAGEOFSINOLSTRAINFORIDENTIFICATIONOFSARSINACTIVATEDVACCINEMOREOVERONLYONENUCLEOTIDEWASDIFFERENTBETWEENTHE3“PASSAGEANDTHE1礦PASSAGEOFSIN03STRAINFORSARSINACTIVATEDVACCINETHISSTUDYALSOSUGGESTEDPOSSIBLYFORDEVELOPMENTOFINACTIVATEDVACCINEWITHANAPPROACHSARSCOVPROPAGATEDINCELLCULTURE，KILLEDANDPURIFIEDSPIKESPROTEINISAMAJORDETERMINANTANTIGEN，WHICHINDUCESNEUTRALIZINGANTIBODY，EVENTHES1DOMAINORTHERBDFRAGMENTCANINDUCENEUTRALIZINGANTIBODYINTHISSTUDYTWOSYNTHETICGENESS303ANDS318ENCODINGRBDFRAGMENTWHICHWERECODONOPTIMIZEDFORPICHIAYEAST，WEREOBTAINEDUSINGPERTHES3IGANDANOTHERGENEECONDINGTRUNCATEDS1PROTEINWERECLONGINGINTOPET30AVECTORANDEXPRESSEDINESCHERICHIACOILRESPECTIVELYAFTERTHEISOPMPYL一6一OTHIOGALACTOSIDEINDUCTION，BOTHRECOMBINANTPROTEINSWEREEXPRESSEDINTHEINCLUSIONBODIESFORMANDPURIFIEDBYNICKELAFFINITYCHROMATOGRAPHYTHEAMOUNTOFS318PROTEINEXPRESSEDINECULLWAS100MG／LANDTHEAMOUNTOFSLPROTEINWAS20MG／LTHETWOPURIFIEDRECOMBINANTPROTEINSWERERECOGNIZEDBYBOTHSERAFROMSARSCONVALECENTPATIENTSANDFROMSARSINACTIVEDVACCINEIMMUNIZEDMOUSEBYWESTERNBLOT，WHICHINDICATEDTHATBOTHRECOMBINANTPROTEINSRETAINEDANTIGENICITIESTHETWORECOMBINANTPROTEINSWEREALSOINOCULATEDTOMOUSEAFTERPUDFICATIONANDDIALYSISREFOLDINGANDBOTHOFTHEMINDUCEDSPECIFICANTIBODIESITSHOWSTHATBOTHRECOMBINANTPROTEINSCOULDBEGOODCANDIDATESFORFURTHERDEVELOPINGSARSVACCINEANDSARSDIAGNOSESMEANWHILE，THEPURIFIEDANDREFOLDEDPROTEINSWEREIDENFIFIEDTHROUGHMADITOFMSPEPTIDEMASSFINGERPRINTPMFANALYSISALSOSHOWEDTHATTHEEXPRESSEDRECOMBINANTPROTEINSWERETHEEXACTPROTEINSTHATWEWANTED，ANDTHEPURITYOFTHEMWASHIGHWEALSOCONSTRUCTEDVECTORSSIPPLC9K，303PPIC9KANDS318PPIC9KANDEXPRESSEDTHEMINPIEHIAPASTORIS，RESPECTIVELYUNFORTUNATELYNONEOFRECOMBINANTPROTEINSWASDETECTEDALTHOULGHTHEGANE303ANDGENES318WERECODONLL

簡介：Y783998中圖分類號R3742；Q26瀘糾壓爹陀研究生碩士學位論文丙型肝炎病毒NS4B對肝細胞相關致癌機制的研究研究生姓名匿霞學科、專業(yè)凼型堂導師姓名至昌王熬援二OO五年五月經(jīng)多聚賴氨酸處理的蓋玻片上，置于37℃、5％C02孵箱中培養(yǎng)24小時。PBS洗細胞三次。10％中性甲醛固定細胞30分鐘，PBS洗5MILL3次。O3％TFITOLL100通透細胞30分鐘，PBS洗5MIILX3次。過氧化物酶阻斷劑孵育10分鐘，PBS洗5MIN3次。非免疫性動物血清中孵育10分鐘。分別加CMYC及RAS蛋白一抗4℃冰箱過夜，以PBS代替一抗作陰性對照。PBS洗5MIN3次。生物素標記的二抗中孵育10分鐘，PBS洗3RNIN3次。加SP復合物孵育10分鐘，PBS洗3皿N3次。DAB顯色，蘇木素復染，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，顯微鏡下觀察，照相。2原位雜交法分別檢測空白載體組、轉染NS4B組、轉染P53組、共轉染NS4B及P53組的P53MRNA表達情況將PCXN2組、PCXN2NS4B組、PCN2P53組及共轉染組細胞分別消化接種于經(jīng)多聚賴氨酸處理的蓋玻片上，置于37℃，5％C02孵箱中培養(yǎng)24小時。細胞長好后01MPBSPH74洗2MIN3次固定液為4％多聚甲醛／O1MPBSPH7276，含有1／1000DEPC。室溫固定30MIN。蒸餾水充分洗滌。30％H2021份純甲醇50份混合，室溫處理30MIIL。蒸餾水洗滌3次。暴露MRNA片段切片上滴加3％檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶1RNL3％檸檬酸加2滴濃縮型胃蛋白酶，混勻，37℃消化120SEC。原位雜交用PBS洗5ININ3次。蒸餾水洗1次。后固定固定液為1％多聚甲醛／01MPBSH7276，含有1／1000DEPC。室溫固定10RNIN。蒸餾水洗滌3次。預雜交每張切片滴加20LLL預雜交液。恒溫箱38℃2。4H。吸取多余液體，不洗。雜交每張切片滴加20UL雜交液。將原位雜交專用蓋玻片蓋在切片

簡介：點擊查看更多重組人乙型肝炎病毒核糖核酸酶H基因工程菌的優(yōu)化表達及其單克隆抗體制備.pdf精彩內容。

簡介：河南師范大學碩士學位論文桿狀病毒基因連續(xù)缺失方法的建立及其應用于初級感染因子功能研究姓名張紅玲申請學位級別碩士專業(yè)動物學指導教師文禎中姚倫廣20090601為研究桿狀病毒基因功能提供高效方法。本研究利用細菌間結合轉移，條件復制型質?？寺CR產(chǎn)物，ISCEI線性化供體載體，細菌間同源重組，GALK，THYA，RSPL正反向篩選技術建立高效基因連續(xù)缺失方法。首先構建出能夠克隆PCR產(chǎn)物的條件復制型多功能R6KT載體，該載體即可以克隆3’A產(chǎn)物常規(guī)TAQ，也可以克隆平末端PCR產(chǎn)物PFU酶，該載體使用R6KY復制子，含2個ISCEI位點，只能在表達PIR菌株中生存BW23474或者BUN20，無法在常規(guī)宿主菌中復制與存活。PCR產(chǎn)物克隆到T載體中，通過結合轉移方式進入BACMID宿主菌。BACMID宿主菌為通過改造的能表達ISECI歸位酶的GALK缺陷型宿主菌，在阿拉伯糖誘導下，所表達的歸位酶能夠線性化T載體，釋放出所攜帶的同源重組臂與篩選標記基因。42度誘導下，產(chǎn)生REDGAM重組酶，介導篩選標記基因與BACMID目的片段發(fā)生同源重組，陽性重組菌落能夠在基本培養(yǎng)基上生長。通過合適酶切位點BSU36I切除篩選標記并自聯(lián)，只保留100BP同源重組臂。再次通過結合轉移將該質粒轉導入陽性重組菌，通過誘導ISCEI線性化載體，高溫誘導RED重組酶發(fā)生同源重組去掉BAEMID中的篩選標記，并通過補加反向篩選化合物的平板進行篩選。如此可以達到循環(huán)使用篩選標記來連續(xù)缺失多個基因，并且該方法不需要電轉化PCR產(chǎn)物，不需要二次重疊PCR，直接利用結合轉移方式傳送DNA片段，操作方便快速，重組效率增加到90％以上。尤其在連續(xù)缺失3個以上基因能夠充分發(fā)揮其優(yōu)勢，為研究由多個基因控制的生物功能提供最佳方法。應用該方法，方便地連續(xù)依次缺失了家蠶核型多角體病毒中的目前已知的與初級感染因子相關的3個基因，P74，PIF1和PIF2，為進一步研究桿狀病毒初級感染機制提供了基礎。關鍵詞桿狀病毒，GALK，THYA，RED重組，同源重組Ⅱ

簡介：山西醫(yī)科大學碩士學位論文多狀態(tài)MARKOV模型在輕度認知損害轉歸研究中的應用姓名楊珊珊申請學位級別碩士專業(yè)流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學指導教師余紅梅20100429山西醫(yī)科大學碩上學位論文MULTISTATEMARKOVMODELINOUTCOMEOFMILDCOGNITIVEIMPAIRMENTABSTRACTOBJECTIVETHEAIMOFTHIS咖DYISTOINTRODUCEMULTIS詛TEMARKOVMODELMOUTCOMEPREDICTIONOFMILDCOGILITIVEIMPAI肌ENTAILDIND印THANALYZETHELONGITUDINALCHALLGESOFMCIPATIENTS’CO伊LITIVELEVELAILDRELATEDFIACTORSIILORDERTOPROVIDETHEO巧BASISFORADPREVENTIONA11DEARLYINTERVENTIONAMONGELDERLYPEOPLEALSOTILISSTUDYISDESIGNEDTODISCUSSABOUTMULTISTATEMARKOVMODELMETHODOLOGICALIYALLDTOPROVIDEMETHODOLOGICALREFERENCEFORⅡ圮BIOLOGYMODELRESEARCHINWHICHSTATESCALLBEUSEDTOEXPRESSDYN鋤ICLIFEPROCESSESMETHODSWESUPPOSEDTHAT∈IURINGTHEPRO黟ESSIONOFAD，TRANSITIONF兩MTHEIRPRESENTSTATETOTHENEXTSTATEOILLYDEPENDSONTLLECURRENTSTATE，BUTNOTDIRECTLYAFL’ECTEDBYTHEPREVIOUSSTATESTHISISCALLEDMARL∞V‘饑FOLLOWUPE疵“’PROPE啊ANDBASEDONIQCHANGESTHATRENECT仃ENDSINCO印ITIVEFHCTIONINTHEFOLLOWUPPATIENTS，、張CONSTMCTEDAFOURSTATESMODELACCORDINGT0TLLEMULTISTATEMARKOVMODELTHEORY，PARAMETERSESTIMATIONMETHODWASDETERMINED，MODELP踟ETERSWEREOBTAINED，AILDFINALLYCONCLUSIONSWEREDRA、VNRESULTSMULTISTATEM缸KOVMODELW硒FITTED、№11UNIV2URIATE鋤ALYSISSHO、ⅣEDTHATGENDER，AGE，EDUCATIONLEVEL，M撕TALSTATUS，SMOKING，CEREBRALHEMO玎HAGE，HYPENENSIOILHI曲CHOLESTEROLINTHESEMIN，DIABETES，LDL，SBPAILDDBP、耽RESTATISTICALLYSI鰣FICANTFORMULTIV撕ATEANALYSIS，GENDER，AGE，EDUCATIONLEVEL，CEREBRALHEMOMLAGEANDSBPA臟CTEDTRANSITION舶MSTATEOFCOGILITIVE缸1CTIONSTABILI夠TOSTATEOFSEVEREDETERIORATIONMCIPATIENTSOFFEMALE，THEOLDER，LOWEREDUCATIONALLEVEL，THEOCCU盯ENCEOFBRAINHEMONHAGE，謝THHYPERTENSIONWEREASSOCIATED嘶MANINCREASINGRISKOFTR趾SITION療0MSTATCOFCOGLLITIVEFUNCTIONSTABILITRTOSTATEOFSEVEREIIETERIORATIONAGE觚DEMLCATIONLEVELINNUENCED仃ANSITIONFBMSTATEOFCOGILITIVE如LLCTIONSTABILITYT0STATEOFSLIGHTDET嘶ORATIONEDUCATIONLEVELINNUENCED仃ANSITION舶MSTATEOFCOGMTIVE如NCTIONS訕LILI哆TOSTATEOFIIILPR0VINGNONEOFGENDERAGE，EDUCATIONLEVEL，CEREB豫LHEMOMLAGEANDSBP姐FECTEDTRALLSITIOILSBE撕EENOTHERSTA_TESANDACCORDIILGT0MEFINEDMULTISTATEMARKOVMODEL，Ⅵ，CESTIMATEDTRALLSITIONINTENSI吼伽OYEARSTRAILSITIONPROBABILI吼ANDMEALLSOJO啪TIMESDURINGEACHS協(xié)TECONCLUSIONBASEDONⅡLEM血島CTORSOFEACHSTAGEDLLRINGPROGRESSIONOFAD，PREVENTIONME硒URESPHASESBYPHASESC趾BETAKENIILADDITIO瑪嬲讎E行ECTIVETOOLFIORDEALING研NLLONGITUDIILALIIATA’也EMULTISTATEM缸KOVMODEIC鋤TAKEIILT0ACCOUMALLOFT11ESTATES，OUTCONLES，TIMEIILF0加LATIONOF咖TETRALLS“IONANDPOSSIBLEFACTO璐SINML切NEOUSLYNCAILALSOFINDDISEA∞PIOGRESSIONRELATEDF秈ORS，EVALUATEDISEASEPROCESSDYI姍IC2LLLY趾ALYZE觚ITIONPROBABILITIESBET、ⅣEENSTATESANDHOWTBESE缸ANSITIONPROBABILITIESCLLARLGE、析THF如TORSAILDTIILLEⅡ

簡介：揚州大學碩士學位論文重組桿狀病毒介導的人組織激肽釋放酶在昆蟲細胞中的表達姓名張茹君申請學位級別碩士專業(yè)動物學指導教師孫懷昌20090501揚州大學碩士學位論文2EXPRESSIONOFRECOMBINANTHUMANTISSUEKALLIKREINUSINGBACULOVIRUSINSECTCELLEXPRESSIONSYSTEMM．D．CANDIDATERUJUNZHANGSUPERVISORPROLHUAICHANGSUNABSTRACTTHEBACULOVIRUSINSECTCELLEXPRESSIONSYSTEMHASBEENEXTENSIVELYUSEDTOEXPRESSRECOMBINANTPROTEINS，WITHRELATIVELYHIGHYIELDSANDAUTHENTICPOSTTRANSLATIONALMODIFICATIONSOFTHE．EXPRESSEDPRODUCTS．TOEXPRESSRECOMBINANTHUMANTISSUEKALLIKREINKLKLUSINGTHEBACULOVIRUSINSECTCELLEXPRESSIONSYSTEM，THEKLKLCDNAWASAMPLIFIEDBYHIGHFIDELITYPCRFROMARECOMBINANTEUKARYOTICEXPRESSIONVECTORPOV4KWITHSUITABLERESTRICTIONSITESAND6XHISTAGINTRODUCED．AFTERDIGESTIONWITHRESTRICTIONENZYMESBAMHIANDXHOI，THEPCRPRODUCTWASSUBCLONEDINTOBACULOVIRUSTRANSFERVECTORPFASTBACLANDTHERESULTANTRECOMBINANTVECTORPFASTBACLKLKLWASINTRODUCEDINTODHL0BACE．COLICONTAININGTHESHUTTLEVECTORBACMID．BYSITESPECIFICTRANSPOSITION，THEKLKLCDNAWASINTEGRATEDINTOBACMIDANDTHERECOMBINANTSHUTTLEVECTORBACMIDKLKLWASGENERATED．BYTRANSFECTIONOFSF9CELLSWITHBACMID．KLKL，THERECOMBINANTBACULOVIRUSWASOBTAINED．AFTERINFECTIONOFS／9CELLSWITHTHERECOMBINANTVIRUSFOR3PASSAGES，THERECOMBINANTENZYMEWASDETECTEDBYINDIRECTFLUORESCENCEASSAYANDWESTERNBLOTWITHTHEEXPECTEDMOLECULARWEIGHTOF35KDA．MOSTOFTHERECOMBINANTPROTEINWASPRESENTINTHECYTOPLASM．THESUCCESSFULEXPRESSIONOFRECOMBINANTKLKLLAIDAFOUNDATIONFORDEVELOPMENTOFREAGENTSFORKLKLIDENTIFICATIONANDFUNCTIONALSTUDIES．KEYWORDSHUMANTISSUEKALLIKREIN；BACULOVIRUS；INSECTCELL；EXPRESSION

簡介：分類號UDCR342密級重慶醫(yī)科大學碩士學位論文論文題目SAP與高氧肺纖維化及重組腺病毒AD5SAP的構建作者姓名婁小麗指導教師姓名職稱、單位名稱黃英教授重慶醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院申請學位級別碩士學科、專業(yè)名稱兒科論文答辯年月2010年5月2010年5月目錄符號說明?????????????????????????????????1中文摘要?????????????????????????????????．2英文摘要?????????????????????????????????。4論文正文SAP與高氧肺纖維化重組腺病毒AD5．SAP的構建????????．7第一部分SAP與高氧肺纖維化???????????????????????7前言????????????????????????????????????。71材料和方法???????????????????????????82結果????????????????????????????????????．133討論????????????????????????????????????．144，J、結????????????????????????????????????17參考文獻??????????????????????????????L8第二部分重組腺病毒AD5．SAP的構建???????????????????20前言????????????????????????????????????．201材料????????????????????????????????????．2L2方J法????????????????????????????????????．233結果????????????????????????????????????．324討論????????????????????????????????????．365，J、結????????????????????????????????????．40參考文獻?????????????????????????????．4L全文總結?????????????????????????????????42附圖?????????????????????????????????????????．43文獻綜述一????????????????????????????????。46文獻綜述二???????????????????????????????．53蜀C謝?????????????????????????????????????????．56攻讀學位論文期間的研究成果????????????????????????57

簡介：目的和背景病毒性心肌炎VIRALMYOCARDITISVMC由嗜心性病毒感染引起是導致青少年心律失常、充血性心力衰竭及猝死的重要原因且部分VMC有慢性化并向擴張型心肌病轉化的趨勢。既往研究表明VMC患者心肌活檢或尸檢及動物研究中均可見心肌纖維化發(fā)生認為心肌纖維化是VMC的重要病理改變。心肌纖維化是指心肌間質中細胞外基質EXTRACELLULARMATRIXECM主要是Ⅰ、Ⅲ型膠原占心肌膠原總量85％以上的代謝紊亂及排列分布異常而基質金屬蛋白酶MATRIXMETALLOPROTEINASESMMPS作為降解基質的主要酶類參與了多種心臟病膠原間質的病理改變。MMP9屬于MMPS中的明膠酶類能水解變性膠原及Ⅰ型膠原等其在心肌炎急性期即被炎癥因子激活并伴隨心肌壞死持續(xù)上調是與心肌損害密切相關的一種酶類但在VMC的發(fā)病過程中MMP9是否參與了心肌膠原重構及其與Ⅰ、Ⅲ型膠原的關系如何作者尚未見文獻報道。本研究以VMC小鼠為模型通過免疫組化和RTPCR檢測VMC小鼠心肌中MMP9、Ⅰ、Ⅲ型膠原的動態(tài)表達以期進一步了解MMP9在VMC心肌纖維化過程中的作用為阻斷或逆轉心肌纖維化尋找新的切入點。方法84只BALBC小鼠隨機分成對正常組N32、模型組N52模型組腹腔注射01ML嗜心性柯薩奇病毒B3NANCY株MYOCARDITIC是導致VMC膠原重構和心肌纖維化的重要因素之一。

簡介：目的EB病毒是一種分布廣，人群感染率高的皰疹病毒。樹突狀細胞是免疫功能最強大的抗原提呈細胞。研究EBV誘導臍帶血單核細胞來源樹突狀細胞分化和凋亡的變化，初步探討其對樹突狀細胞生物活性的影響。方法無菌條件下采集足月順產(chǎn)新生兒臍帶血，體外分離純化單核細胞，經(jīng)RHIL4和RHGMCSF誘導向樹突狀細胞分化，病毒組在培養(yǎng)的第0天加入B958細胞培養(yǎng)上清。FITCCD14、PECD11C和PC5CD1A三染色流式細胞術檢測DC表面特異分化表型。ANNEXINVFITCPI雙染色流式細胞術檢測DC凋亡率，HOECHST33258染色和TUNEL染色熒光顯微鏡檢測DC凋亡后的形態(tài)學變化，比色法測定CASPASE3、CASPASE8和CASPASE9的酶活性。羅丹明123染液檢測線粒體膜電位變化。WESTERNBLOT檢測XIAP的表達。結果第7天的兩組細胞表面CD14分子表達下降，而DC相對特異分子CD11C和CD1A表達增加。表明采用GMCSF和IL4成功誘導出臍帶血單核細胞來源的DC。病毒組在第5D早期凋亡細胞（ANNEXINVPI）比率為868％±272％，與對照組（762％±264％）相比無顯著性差異。第6、7D的早期凋亡率分別為1570％±283％、1675％±253％，而對照組分別為707％±479％、451％±201％。第6、7D兩組相比有顯著性差異（P結論EB病毒通過線粒體途徑促進臍帶血單核細胞來源樹突狀細胞凋亡。引起CASPASE3、8、9酶的活化和線粒體膜電位的降低。這可能是EBV逃逸宿主免疫監(jiān)視的機制之一。

簡介：山東大學碩士學位論文腎綜合征出血熱病毒基因序列分析與分子流行病學研究姓名宋紹霞申請學位級別碩士專業(yè)流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學指導教師王志玉畢振強20050512山東大學碩士掌位論文腎綜合征出血熱病毒基因序列分析與分子流行病學研究研究生宋紹霞導師王志玉教授畢振強主任醫(yī)師中文摘要目的從山東省嚙齒類等動物中鑒定漢坦病毒HV，陽性標本進行RTPCR擴增，測定序列，與以往山東省HV病毒株一起進行序列分析和分子流行病學研究。了解它們的同源性和遺傳距離，掌握山東省不同地區(qū)腎綜合征出血熱HFRS的分布特征，遺傳規(guī)律，進化關系；找出山東省的代表株，克隆其M基因。為從根本上預防和控制HFRS在山東省的流行打下堅實基礎并為研制HFRS特異診斷試劑和新型疫苗提供科學依據(jù)。，方法采集山東省不同地區(qū)的鼠肺標本，應用間接免疫熒光法IFA鑒定出HV感染的陽性標本。根據(jù)GENBANKIIVM基因保守序列及相關參考文獻應用PRIMER5軟件設計HTN與SEO型通用引物及將HTN型I型和SEO型II型分型的型特異性引物。通過RTPCR法擴增陽性標本中FLYM片段部分基因，測序并用DNASTAR軟件進行同源序列比較并構建系統(tǒng)發(fā)生樹。觀察山東省IIV堿基變異情況，找出山東省的代表株，進行全M片段擴增并構建克隆載體。測序并用BLAST軟件進行同源序列比較，觀察核苷酸以及所推導的氨基酸變異情況；利用SIGNALP、DNASTAR和TMPRED軟件預測其信號肽序列、疏水區(qū)、抗原區(qū)及跨膜區(qū)，分析氨基酸變異對HV包膜糖蛋白生物活性的影響。結果I捕獲2073只嚙齒目和食蟲目動物，鑒定出103份IIV感染陽性標本，陽性率為497％O2陽性標本經(jīng)RTPCR擴增，得到26份HV相應M片段2003～2302M。3測序結果經(jīng)核苷酸序列分析表明26份HV同源性較高在973～100O％，

簡介：廣州醫(yī)學院碩士學位論文腺病毒介導NK4基因和B71基因共表達治療胰腺癌的體外研究姓名吳坤松申請學位級別碩士專業(yè)外科學指導教師彭和平20090520廣州醫(yī)學院碩士學位論文腺病毒介導NK4基岡和B7．1基岡共表達治療胰腺癌的體外研究癌細胞中NK4基因和B7．1基因的MRNA水平，WESTERNBLOT檢狽JJB7．1蛋白的表達；4．MTT觀察AD．NK4一B7．1感染在體外對SWI990生長的影響，并檢測NK4．B7．1重組腺病毒體的細胞克隆表達產(chǎn)物對血管內皮細胞生長的影響。結果該病毒能有效感染HEK293細胞并在細胞內成功增殖，通過不同MOI的AD．GFP腺病毒感染，發(fā)現(xiàn)在MOIDX于80EFU／ML時，感染效率隨病毒滴度的增加而提高。當MOI為60EFU／ML時，SWL990細胞的感染效率接近100％。以病毒感染24DX時NK4．B7．1基因表達水平為100％，B7．1及NK4都在第5天達到最高水平的表達，隨后開始下降，第九天的表達水平只有24DX時表達量的1．5倍左右。到12天時兩個基因的表達水平都只?！?4DX時表達量的約1／4。WESTERN．BLOT法檢測到ADNK4．B7．1感染能明顯增強B7．1的表達；ADNK4．B7．1感染對SWL990的生長無明顯改變．病毒感染上清液可顯著抑HGF誘導的血管內皮細胞的牛長。結論1．腺病毒介導能有效地感染SWL990細胞并表達高水平的NK4和B7．1基因；2．腺病毒感染及ADNK4．B7．1的表達在體外對SWL990生長無明顯影響；3．ADNK4．B7．1能夠抑制血管內皮細胞的生長，提示其在腫瘤基因治療中可能具有重要意義。這些研究為進一步研究B7．1和NK4基因聯(lián)合治療胰腺癌動物實驗提供了依據(jù)。關鍵詞腺病毒；SWL990細胞；NK4基因；B7．1基因；共表達基因治療4