簡介：第一部分人偏肺病毒分離株蛋白質(zhì)特性的初步探討目的分析新近發(fā)現(xiàn)的兒童呼吸道病毒病原人偏肺病毒HUMANMETAPNEUMOVIRUS，HMPV中國大陸流行株，初步明確人偏肺病毒HUMANMETAPNEUMOVIRUS，HMPV主要蛋白質(zhì)的基本特性。方法以純化的HMPV重慶分離株CHN0501滅活病毒為抗原，免疫家兔獲得抗血清。用此抗血清為一抗通過免疫印跡法檢測HMPV蛋白。用NGLYC10SERVER、OGLYC31SERVER、PHOS20SERVER分析HMPVA亞型標準株CAN9783氨基酸序列，預測HMPV蛋白氨基酸序列中可能的糖基化、磷酸化位點。結(jié)果ELISA檢測顯示所制備的抗血清與HMPV的蛋白反應效價達1500以上，可有效識別HMPV蛋白。軟件分析示G蛋白糖基化位點最多，而P蛋白磷酸化位點最多。以兔抗HMPV血清為一抗的免疫印跡法提示CHN0501的G蛋白糖基化水平較一致，與CAN9980和CAN9981不同，其分子量介于55至72KDA之間，約68KDA；F蛋白F亞單位分子量介于40至55KDA，約為48KDA。結(jié)論初步明確了HMPV兩個主要膜表面糖蛋白的分子量和糖化特點，為后續(xù)蛋白功能研究奠定了基礎(chǔ)。第二部分人偏肺病毒F蛋白的糖基化和磷酸化位點預測目的預測人偏肺病毒F蛋白的糖基化、磷酸化位點。方法應用神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)分析預測HMPV4亞型代表株F蛋白氨基酸序列的N連接、O連接糖基化位點、賴氨酸殘基的Ε氨基的糖基化位點和磷酸化位點。結(jié)果4亞型代表株F蛋白均有的保守N連接糖基化位點、賴氨酸殘基Ε氨基的糖基化位點和磷酸化位點。無相同的保守的O連接糖基化位點。A2亞型株4個區(qū)段可能無糖基化和磷酸化位點。結(jié)論應用神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)分析預測了F蛋白的糖基化和磷酸化位點，為進一步研究HMPV蛋白糖基化的功能及免疫學意義的研究奠定了理論基礎(chǔ)，獲得了多肽疫苗開發(fā)的不需修飾的候選區(qū)。

簡介：點擊查看更多新型甲型H1N1流感病毒血凝素蛋白人源化中和單抗和多肽表位疫苗研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的對我國河南地區(qū)陰道毛滴蟲臨床分離株進行陰道毛滴蟲病毒的檢測。研究陰道毛滴蟲病毒的寄生對陰道毛滴蟲的臨床致病性、甲硝唑耐藥性、與人型支原體的共生及基因多態(tài)性的影響。方法1將收集到的30株陰道毛滴蟲分離株在無菌TYMTRYPTICASEYEASTEXTRACTMALTOSE培養(yǎng)基中37℃培養(yǎng)，達到純培養(yǎng)后，用同時提取DNA和RNA的方法提取蟲體的總核酸，1％的瓊脂糖凝膠對其進行電泳分析，初步篩選陰道毛滴蟲病毒陽性株。將已提取的陰道毛滴蟲病毒陽性株總核酸與核酸酶進行反應，再進行1％的瓊脂糖凝膠電泳分析鑒定。2對收集到的陰道毛滴蟲病患者的臨床癥狀進行分析，根據(jù)無癥狀、輕度癥狀、中度癥狀、重度癥狀四級分法，判定陰道毛滴蟲病毒陽性株和陰性株臨床癥狀的輕重程度。用兩樣本秩和檢驗的方法對所得數(shù)據(jù)進行處理，研究陰道毛滴蟲病毒對滴蟲的臨床致病性有無影響。3用連續(xù)稀釋法測量30株陰道毛滴蟲臨床分離株的甲硝唑最小致死濃度MINIMUMLETHALCONCENTRATION，MLC，對比陰道毛滴蟲病毒陽性株和陰性株最小致死濃度，所得數(shù)據(jù)用SPSS160進行處理，分析陰道毛滴蟲病毒對甲硝唑耐藥性有無影響。4用陰道毛滴蟲人型支原體擴增的特異性引物，對30株陰道毛滴蟲分離株進行人型支原體的檢測，分析陰道毛滴蟲病毒的寄生是否影響人型支原體與陰道毛滴蟲的共生。5用陰道毛滴蟲TVMARL基因位置擴增的特異性引物，通過MGEPCR方法對30株陰道毛滴蟲臨床分離株進行TVMARL的位置擴增，應用MEGA50軟件進行系統(tǒng)進化圖譜繪制，分析蟲體的基因多態(tài)性。結(jié)果130株陰道毛滴蟲分離株總核酸進行電泳，其中有6株TV5、TV10、TV13、TV17、TV22、TV23滴蟲除了有基因組DNA，還有一條55KBP的病毒帶，為陰道毛滴蟲病毒陽性株。2陰道毛滴蟲病毒陽性株的臨床致病性輕于陰道毛滴蟲病毒陰性株ZC3428，P3陰道毛滴蟲病毒陽性組的甲硝唑MLC值568±3588ΜGML小于陰道毛滴蟲病毒陰性組的甲硝唑MLC值2427±20899ΜGML，兩者差異具有統(tǒng)計學意義T2143，P4人型支原體不易與有陰道毛滴蟲病毒寄生的陰道毛滴蟲株共生X20000，P530株陰道毛滴蟲臨床分離株TVMARL基因位置擴增結(jié)果顯示陰道毛滴蟲基因具有明顯的多態(tài)性，所做系統(tǒng)進化樹顯示6株陰道毛滴蟲陽性株遺傳關(guān)系比較密切。結(jié)論1在我國河南地區(qū)陰道毛滴蟲臨床分離株中檢測到陰道毛滴蟲病毒的寄生，寄生率為20％。2陰道毛滴蟲病毒陽性蟲株引起的臨床癥狀較輕，對甲硝唑比較敏感，不易與人型支原體共生，病毒還會影響蟲體的基因多態(tài)性。

簡介：話語心理學是在后現(xiàn)代文化思潮的影響下興起于20世紀80年代末的一種新的心理學取向。話語心理學解構(gòu)現(xiàn)代心理學的語言研究同時批判現(xiàn)代心理學的研究思維。它將話語作為一切心理研究的切入點嘗試通過話語分析來重新闡釋認知等心理學問題從而達到對人本質(zhì)的進一步理解。話語心理學的產(chǎn)生受到了社會學、哲學、語言學等多方影響現(xiàn)代心理學也給予諸多啟迪在此基礎(chǔ)上話語心理學形成了自己的理論立場和方法論特色。即從實在論到反實在論從符合論到建構(gòu)論從凝固的主客關(guān)系到主客的雙向建構(gòu)從個體主義到話語的社會組織從科學世界到日常話語世界。在對話語獨特理解的基礎(chǔ)上話語心理學提出了功能觀、語境觀和建構(gòu)觀的研究原則將話語分析作為主要的研究方法。同時話語心理學對認知心理學提出批判并給出自己的理解。話語心理學形成時間較短對其作出定論為時尚早從現(xiàn)有的發(fā)展來看它在反對科學主義霸權(quán)上開拓心理學視野與深化認識上具有積極的意義同時話語研究本身也是對心理學研究內(nèi)容的豐富。但是話語心理學缺乏統(tǒng)一的理論觀點強調(diào)話語在心理中的重要作用時容易走向另一個極端仍然是一種二歧視野。心理學的健康發(fā)展需要話語心理學學會如何與其他取向更好的共存。

簡介：目的呼吸道合胞病毒RESPIRATYSYNCYTIALVIRUSRSV是嬰幼兒下呼吸道感染的最重要病原也是造成老年人和免疫缺陷成人高患病率和死亡率的重要原因。接種疫苗是預防傳染性疾病的重要措施接種者自然感染RSV后往往導致加重的TH2型優(yōu)勢應答和肺部炎癥性病理損傷這是RSV疫苗成功的主要障礙。幾十年來闡明RSV的感染機制和疫苗增強性肺部免疫病理的發(fā)病機制一直是RSV研究領(lǐng)域的最前沿是研制安全有效的治療措施和RSV疫苗的重要理論基礎(chǔ)。發(fā)病機制的研究離不開理想的實驗動物模型。小鼠肺炎病毒PNEUMONIAVIRUSOFMICEPVM與人RSVHRSV同屬副粘病毒科、肺病毒亞科、和肺病毒屬小鼠是PVM的天然宿主極少量病毒即可導致嚴重感染PVM感染小鼠可以復制RSV嚴重感染嬰幼兒的臨床特征和炎癥病理。本研究用PVM感染新生47天和成年69周的雌性BALBC小鼠考察PVM感染后在新生小鼠和成年小鼠模型中誘導的免疫應答、炎癥反應和肺部病理變化是發(fā)展有效的治療措施和研制安全有效的RSV疫苗的重要理論基礎(chǔ)。方法1制備PVM并用BHK21細胞滴定。2動物實驗將新生47天和成年69周BALBC小鼠隨機分為4組每組6只分別為1新生47天BALBC小鼠感染組2新生47天BALBC小鼠對照組369周BALBC小鼠感染組469周BALBC小鼠對照組。新生組用375TCID50PVM感染成年組用500TCID50PVM感染。21每天稱量小鼠體重觀察體重變化。22取新生感染組和新生對照組感染后1、3、5、7、9、11、14和18天的肺組織提取總RNA用半定量PCR擴增PVM基因SH考察小鼠肺組織中PVM感染情況。23將肺沖洗液中的細胞經(jīng)瑞士吉姆薩染色計數(shù)各種有核細胞觀察感染后肺部炎癥細胞的變化。24留取感染后3、7、14天小鼠的肺組織做病理切片HE染色觀察肺組織中炎癥浸潤及組織損傷。25用實時定量PCR檢測感染后1、3、5、9、14天肺組織的TH1型細胞因子IFNΓ、IL12TH2型細胞因子IL5、IL6、IL13干擾素IFNΑ、IFNΒ腫瘤壞死因子TNFΑ趨化因子MCP1、MIP1Α、CCL5、MCP3黏液因子GOB5考察感染后TH1TH2應答情況以及肺部炎癥反應情況。26感染后14天取血分離血清用ELISA法測定血清IGG抗體效價。27成年組的檢測指標同新生組不同的是成年組增加了感染后4H組。結(jié)果1制備了實驗所需的PVM病毒滴度為TCID501075ML2體重變化情況新生小鼠感染組與新生對照組相比感染后4天體重減輕感染后7天體重下降至最低然后體重開始慢慢增加到14天與對照組無差異。成年感染組與成年對照組相比感染后3天體重開始迅速下降5天降至最低7天開始體重慢慢增加8天逐漸恢復正常。3半定量PCR擴增PVM基因SH新生小鼠感染PVM后1天基因SH條帶亮度比較弱感染后5天條帶最亮感染后7天和9天條帶亮度較弱至18天消失。成年小鼠感染PVM4小時后基因SH條帶亮度較新生小鼠感染1天后亮感染后3天和5天達高峰7天、9天稍微減弱14天進一步減弱至18天消失。4肺組織HE染色新生和成年對照組小鼠肺泡壁結(jié)構(gòu)完整無水腫周圍僅有少量炎性細胞新生感染組與對照組相比感染后3天肺間質(zhì)炎性細胞增多肺泡壁增厚感染后7天明顯增多肺泡壁增厚水腫其中大部分為淋巴細胞可見單核巨噬細胞、中性粒細胞、嗜酸性粒細胞14天炎癥減弱成年感染組感染后3天和7天均有大量炎性細胞浸潤肺泡壁嚴重充血、水腫有出血點肺泡間隔融合14天炎癥減弱。5支氣管肺泡灌洗液中觀察炎性細胞變化情況成年小鼠感染PVM3天和7天后支氣管肺泡灌洗液中細胞總數(shù)均大于新生感染組成年組感染后3天中性粒細胞比例是5325％7天組中性粒細胞比例是6700％而新生小鼠感染后3天中性粒細胞比例是000％7天組中性粒細胞比例是2700％另外成年組淋巴細胞比例也高于新生小鼠表明成年小鼠感染PVM后比新生感染組炎性細胞浸潤程度嚴重。6ELISA法檢測小鼠感染14天后血清中特異性抗體IGG與對照組相比新生感染組和成年感染組均產(chǎn)生了IGG抗體且有顯著性差異P＜005成年感染組IGG抗體效價1400高于新生感染組1200的效價。7肺組織中細胞因子的表達情況新生小鼠感染PVM后3天肺組織的TH1型細胞因子IFNΓ顯著高于對照組P＜005之后繼續(xù)升高9天時是對照組的150倍感染后IL12表達量與對照組無差異P＞005。成年小鼠感染PVM后肺組織TH1型細胞因子IFNΓ和IL12表達量均與對照組有顯著差異P＜005IFNΓ表達量感染后1天即顯著高于對照組5天時最高是對照組的133倍9天開始下降。IL12感染后5天是對照組的2倍P＜005之后與對照組無差異P＞005。新生小鼠感染后TH2型細胞因子IL5、IL13與對照組無差異P＞005成年小鼠感染后IL5與對照組無差異P＞005感染后5天IL13表達量是對照組的4倍P＜005新生小鼠感染后3天肺組織IL6表達量達高峰P＜005是對照組的17倍5天恢復成年組IL6表達量5天達高峰是對照組的18倍。在成年和新生鼠中IFNΑ均于感染早期迅速增加之后急速下降IFNΒ在新生鼠中的表達動力學與IFNΑ一致但在成年鼠中IFNΒ在感染早期開始表達5天才達高峰。新生小鼠感染后9天腫瘤壞死因子TNFΑ是對照組的30倍P＜005而成年小鼠感染后4小時TNFΑ肺部表達量是對照組的76倍P＜0051天后逐漸降低至14天和對照組無差異P＞005新生小鼠感染后趨化因子MCP1、MCP3、MIP1Α和CCL5均與對照組有顯著差異P＜005感染后3天肺組織MCP1表達量是對照組的41倍至14天低于對照組P＜005感染后5天肺組織MCP3表達量是對照組的118倍至14天與對照組無差異P＞005MIP1Α感染后5天是對照組的21倍感染后3天CCL5是對照組的2倍P＜005成年小鼠感染PVM后5天MCP1是對照組的120倍P＜005至14天是仍高于對照組MCP3感染后5天是對照組的195倍P＜00514天仍高于對照組MIP1Α感染后1天是對照組的50倍P＜005至14天時也仍高于對照組P＜005感染后1天CCL5是對照組的55倍P＜005。黏液因子GOB5的肺部表達量新生和成年感染組均與對照組有顯著差異P＜005新生小鼠感染后9天是對照組的6倍而成年小鼠感染后5天是對照組的16倍感染后9天是對照組的11倍至14天消失說明新生小鼠感染PVM后粘液分泌的變化。結(jié)論PVM感染新生和成年BALBC小鼠均可導致肺部的炎癥病理反應成年小鼠的炎癥反應比新生小鼠更強烈類似于RSV嚴重感染的嬰幼兒。

簡介：目的通過隨機、對照臨床研究觀察心肌康方案對病毒性心肌炎急性期患者動態(tài)心電圖的影響初步評價心肌康方案的療效和安全性為今后制定治療病毒性心肌炎的中醫(yī)藥規(guī)范化方案提供科學依據(jù)。方法本研究共收集到來自2009年3月至2010年3月河南省中醫(yī)院和黑龍江省中醫(yī)研究院門診及住院病人48例隨機分為治療組和對照組。治療組24例男13例女11例年齡最小14歲最大40歲平均247±734歲病程最短2天最長87天平均401±2317天對照組24例男12例女12例年齡最小14歲最大39歲平均24±135歲病程最短3天最長87天平均427±2676天。兩組病例均有不同程度的心悸、胸悶等癥狀。全部病例均符合1998年全國心肌炎心肌病專題研討會提出的成人急性病毒性心肌炎診斷參考標準。兩組病例在性別、年齡、病程、動態(tài)心電圖、心肌酶譜方面比較均無顯著性差異具有可比性。兩組均給予基礎(chǔ)治療患者充分休息、限制活動給予易消化、富含維生素、蛋白質(zhì)飲食靜脈點滴極化液10％葡萄糖液500ML10氯化鉀15ML胰島素8U、肌苷400MG每日一次療程2周。在基礎(chǔ)治療基礎(chǔ)上治療組根據(jù)中醫(yī)辨證結(jié)果給予相應的中醫(yī)心肌康方案治療療程30天對照組給予西醫(yī)常規(guī)治療口服維生素C片02日3次輔酶Q10片10MG日3次療程30天。結(jié)果1對室性早搏的影響治療前治療組24例病人中動態(tài)心電圖顯示室性早搏的有16例經(jīng)治療顯效6例有效7例無效3例總有效率為813對照組15例經(jīng)治療顯效4例有效6例無效5例總有效率為667。兩組比較無顯著性差異P005。2對室上性早搏的影響治療前治療組24例病人中動態(tài)心電圖顯示室上性早搏的有13例經(jīng)治療顯效5例有效5例無效3例總有效率為769對照組12例經(jīng)治療顯效3例有效5例無效4例總有效率667。兩組比較無顯著性差異P005。3對STT改變的影響治療前治療組24例病人中動態(tài)心電圖STT改變的有16例經(jīng)治療顯效4例有效6例無效6例總有效率為625對照組16例經(jīng)治療顯效2例有效7例無效7例總有效率為563。兩組比較無顯著性差異P005。4綜合療效比較治療組治愈4例顯效8例有效8例無效4例總有效率833對照組治愈2例顯效5例有效10例無效7例總有效率708。兩組比較無顯著性差異P005。結(jié)論通過觀察心肌康方案對成人病毒性心肌炎急性期患者動態(tài)心電圖改變的影響顯示心肌康方案可有效減少病毒性心肌炎患者室性早搏、室上性早搏次數(shù)改善STT變化提高綜合療效。但由于樣本量較小各指標與對照組無統(tǒng)計學意義有待于大樣本進一步研究。

簡介：四川大學博士學位論文重組腺病毒介導的RNA干擾對EGFR高表達腫瘤細胞及腫瘤的干預實驗研究姓名欒建剛申請學位級別博士專業(yè)耳鼻咽喉科學指導教師梁傳余20060401四川大學醫(yī)學專業(yè)博士論文英文縮語詞表縮寫英文全名中文譯名BPBASEPAIR堿基對CSCLCESIUMCHLORIDE氯化銫DABDIUMINOHENZIDINETETRAHYDFROCHLORIDE二氨基聯(lián)苯胺DMEMDULBECCO’SMODIFIEDEAGLE’SMEDIUM改良EAGLE培養(yǎng)基DMS0DIMETHYLSULFOXIDE二甲基亞砜DS孫NDOUBLESTRANDEDICNA雙鏈IINAEGFREPIDERMALGROWTHFACTORRECEPTOR表皮生長因子受體FBSFETALBOVINESERUM胎牛血清FCMFLOWCYTOMETRY流式細胞術(shù)胍HEMATOXYLINEOSIN蘇木素一依紅MOIMULTIPLICITYOFINFECTIONVIRUS／CELL感染復數(shù)MRNAMESSENGERRNA信使RNAODOPTICALDENSITY光密度PAGEPOLUACRYLAMIDEGELELECTROPHORESIS聚丙烯酰胺凝膠電泳PBSPHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖液PFUPLAQUEFORMINGUNIT空斑形成單位PTGSPOSTTRANSCRIPTIONALGENESILENCING轉(zhuǎn)錄后基因沉默RISCRNAINDUCEDSILENCINGCOMPLEXRNA誘導沉默符合體RNAIICNAINTERFERENCEICNA干擾P。17ⅢE。88。。HAIN反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應SECSHRNAEXPRESSIONCASSETTESHL州ASMALLHAIRPINRNASIRNASHORTINTERFERINGRNALSHRNA表達框小發(fā)夾RNA小干擾RNA∞叫一耋耋㈣∞‰啊毗貼N嗽階

簡介：點擊查看更多言語-表象認知風格與空間記憶關(guān)系的實驗研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：第一部分大鼠骨髓問質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)和鑒定實驗一大鼠骨髓間質(zhì)干細胞的分離和培養(yǎng)目的分離和培養(yǎng)大鼠的骨髓問質(zhì)干細胞。掌握原代細胞的培養(yǎng)技術(shù)，了解干細胞的生物學特性。材料和方法四月齡的SD大鼠，沿用FRIEDENSTEIN的方法，利用問質(zhì)干細胞粘附于組織培養(yǎng)板的特性，首先利用梯度離心分離出單核細胞，再利用干細胞粘附于塑料培養(yǎng)板的特點，獲得較純的貼壁生長的骨髓間質(zhì)干細胞。結(jié)果細胞貼壁較快，呈克隆生長，細胞形態(tài)為均一的長梭形。在接種24小時后可見成纖維狀的細胞以散在的方式貼壁，23天就可見一些集落形成，710天后集落迅速增多，并且逐漸長大融合成片。隨著集落生長的不斷擴大而融合為單層。傳代培養(yǎng)后細胞不再以成集落的方式生長，而是呈均勻分布生長。原代培養(yǎng)結(jié)束時細胞數(shù)為105左右，P10代細胞數(shù)約為1012左右。結(jié)論大鼠骨髓問質(zhì)干細胞的分離和培養(yǎng)技術(shù)成熟，細胞增殖能力旺盛。實驗二大鼠骨髓間質(zhì)干細胞的鑒定目的通過表面抗原檢測確定培養(yǎng)細胞的正確性。為下一步實驗確定良好的種子細胞。材料和方法通過流式細胞儀檢測大鼠骨髓間質(zhì)干細胞的表面抗原，包括CD29，CD44，CD90，CDI05，CD34，CD45，CDLLB，組織相容性復合體I、H。結(jié)果與對照組相比，大鼠骨髓間質(zhì)干細胞表面抗原CD29，CD44，CD90，CDL05顯示陽性，而表面抗原CD34，CD45，CDLLB為陰性，組織相容性復合體I、II均為陰性。結(jié)論大鼠骨髓問質(zhì)干細胞表面標志為非單一性，表達間質(zhì)細胞、內(nèi)皮細胞和表皮細胞的表面標志，一般認為整合素家族成員CD29，粘附分子CD44、CDL05以及胸腺和外周T淋巴細胞標志CD90等是骨髓間質(zhì)干細胞的重要標志物。第二部分腺病毒和慢病毒載體感染骨髓問質(zhì)干細胞的比較目的攜帶綠色熒光蛋白GFP基因的慢病毒和腺病毒載體系統(tǒng)感染大鼠骨髓問質(zhì)干細胞，觀察感染后GFP的表達情況及持續(xù)時間，比較兩種載體的優(yōu)缺點。材料和方法重組質(zhì)粒PHIVCSCDFCG～PRE含有GFP基因及包裝質(zhì)粒PRSVREV，PMDLGPPRE，PMDG在293細胞感染和收集病毒顆粒；腺病毒載體含有GFP基因自購，分別感染大鼠骨髓問質(zhì)干細胞，觀察GFP蛋白表達情況；流式細胞儀檢測GFP表達情況。結(jié)果感染一周，慢病毒和腺病毒系統(tǒng)對大鼠骨髓間質(zhì)干細胞的感染效率均較高，熒光蛋白表達良好，慢病毒GFP表達90％，腺病毒達到71％，；三周后，慢病毒系統(tǒng)干細胞的感染表達良好，約832％，但腺病毒系統(tǒng)的感染表達已明顯下降，僅達到013％，；五周后，慢病毒系統(tǒng)的感染表達仍保持良好，約79％，而腺病毒僅剩O05％。。結(jié)論慢病毒載體系統(tǒng)對大鼠骨髓間質(zhì)干細胞感染后GFP表達和持續(xù)時間明顯高于腺病毒載體系統(tǒng)，第三部分人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2基因的慢病毒載體構(gòu)建目的將人骨形態(tài)發(fā)生蛋白2基因克隆到新型慢病毒載體中，用于下一步的基因治療方面的研究材料和方法從肝臟組織中抽提總RNA后；設(shè)計NHEI、AGEI雙酶切位點引物，擴增出BMP一2的全長序列，克隆到慢病毒重組質(zhì)粒PHIVCSCDFCGPRE，通過PCR、酶切、測序等方法篩選鑒定重組質(zhì)粒。結(jié)果成功擴增出12KB左右的BMP一2全長序列，序列比對分析與GENEBANK中HUMANBMP一2閱讀框架序列100％吻合。第四部分攜帶HBMP2基因的慢病毒載體的包裝和體外表達目的包裝慢病毒載體、測定其病毒滴度、檢測其蛋白表達情況。材料和方法重組質(zhì)粒PHIV～CSCDFCGPRE含有HBMP2基因，包裝質(zhì)粒PRSVREV，PMDLGPPRE，PMDG在293T細胞感染和收集病毒顆粒。用ELISA的方法檢測慢病毒的滴度。間接免疫熒光分析和WESTERNBLOTTING分析檢測HBMP2基因的體外表達情況。結(jié)果慢病毒載體系統(tǒng)包裝順利，經(jīng)測定其滴度為29210。，間接免疫熒光分析和WESTERNBLOTTING分析HBMP2基因的表達情況良好。第五部分攜帶TFILMP2基因的慢病毒感染骨髓間質(zhì)T細胞的定向分化目的觀察慢病毒載體誘導RMSCS后的變化情況，檢測RMSCS是否按預期方向向成骨細胞轉(zhuǎn)化。材料和方法含有HBMP2基因的慢病毒載體誘導RMSCS，誘導第O、3、6、9、12、15、18、2L天測定堿性磷酸酶的活性及細胞染色情況；采用鈣的定量測定沉積鈣的濃度；免疫組化分析工型膠原蛋白表達情況。結(jié)果誘導后的RMSCS，隨著大鼠骨髓間質(zhì)干細胞誘導時間的延長，其堿性磷酸酶的活性逐漸增加，染色良好，而未經(jīng)病毒誘導的干細胞，培養(yǎng)21天，其堿性磷酸酶的活性無明顯的變化；誘導組CA2的濃度持續(xù)升高，到第15天后CA2的濃度達到最大，此后達到平穩(wěn)期，未誘導組鈣沉積無明顯變化；誘導組I型膠原蛋白表達明顯增加，染色呈陽性，而未誘導組無明顯變化。結(jié)論通過免疫組化和組織化學技術(shù)證明，誘導的RMSCS細胞能夠產(chǎn)生I型膠原、堿性磷酸酶，并具有礦化能力，證實在慢病毒載體的誘導下RMSCS向成骨細胞分化。

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簡介：漢灘病毒HANTAANVIRUS，HTNV為布尼亞病毒科FAMILYBUNYAVIRIDAE漢坦病毒屬（HANTAVIRUS，HV）的一種單股分節(jié)段的負鏈RNA病毒。HTNV雖以嚙齒類動物為儲存宿主，卻不引起宿主發(fā)病，然而在人類可引起兩類急性傳染病腎綜合征出血熱HEMRHAGICFEVERWITHRENALSYNDROMEHFRS和漢坦病毒肺綜合征HANTAVIRUSPULMONARYSYNDROMEHPS。全世界每年大約有15萬HFRS和HPS患者，其中HFRS病例的90％以上發(fā)生在亞洲。我國是世界上HFRS疫情最嚴重的國家，HTNV是引起我國重癥HFRS的主要病原體，因此，HTNVHFRS嚴重危害人民的健康。自1978年首次從宿主動物中成功分離HV以來，國內(nèi)外學者對HV及其相關(guān)疾病的病原學、流行病學、發(fā)病機制、診斷及防治等方面進行了大量的研究并取得了一系列的成果，但其發(fā)病的分子機制尚未完全明了，也沒有特異有效的治療措施，安全有效的疫苗尚待進一步開發(fā)。因此，探討HV感染致病的分子機理，尋找有效的抗病毒治療藥物及研制新型HV疫苗，一直是相關(guān)領(lǐng)域研究的熱點。目前普遍的觀點認為，HV相關(guān)疾病是由免疫介導的病理反應所致。固有免疫（INNATEIMMUNITY）作為機體抗感染免疫的第一道防線，在漢坦病毒感染及發(fā)病機制中可能起重要作用，然而HV誘導固有免疫的分子機制尚不清楚。HV主要通過感染血管內(nèi)皮細胞從而引起機體的免疫病理反應。TLR4是血管內(nèi)皮細胞表面的一種重要的膜分子，參與內(nèi)皮細胞抗感染的固有免疫反應。LPS是TLR4的主要配體，但是近年來發(fā)現(xiàn)TLR4在抗病毒免疫中也發(fā)揮了重要作用，HTNV可能通過與TLR4的相互作用誘發(fā)機體的固有免疫反應。前期我們研究發(fā)現(xiàn)，HTNV76118株感染人臍靜脈內(nèi)皮細胞系EVC304后可誘導TLR4的表達升高，進一步采用RNAI技術(shù)，構(gòu)建了EVC304TLR4細胞系，以此為基礎(chǔ)發(fā)現(xiàn)TLR4介導HTNV感染EVC304細胞所導致的IFNΒ，IL6和TNFΑ的表達升高，TLR4信號轉(zhuǎn)導途徑中TRIF的表達在HTNV感染前后變化明顯，而MYD88的表達變化不明顯。本研究以上述為基礎(chǔ)，通過間接免疫熒光實驗觀察TLR4下游轉(zhuǎn)錄因子IRF3和NFΚB的細胞核移位以及它與HTNV感染的時程關(guān)系，同時以RTPCR和間接免疫熒光方法觀察HTNV感染EVC304細胞后，TLR4是否介導細胞間粘附分子1（ICAM1）的表達變化，闡明TLR4信號轉(zhuǎn)導通路在HTNV感染EVC304細胞中的作用，為HFRS的發(fā)病機理研究和藥物研制提供新資料。本課題研究內(nèi)容和結(jié)果如下1HTNV的培養(yǎng)及其對EVC304細胞的感染培養(yǎng)VERO細胞，然后用本室所保存的HTNV76118株感染VERO細胞，通過VERO細胞的傳代進一步擴增HTNV，710天后反復凍融VERO細胞并分離上清。然后培養(yǎng)EVC304TLR4細胞和EVC304TLR4細胞，用制備的HTNV上清分別感染，發(fā)現(xiàn)HTNV可以有效地感染這兩種細胞。2EVC304TLR4細胞中的TLR4表達檢測分別培養(yǎng)EVC304TLR4細胞和EVC304TLR4細胞，各取1106個細胞提取總RNA，用半定量RTPCR來檢測兩種細胞中TLR4的表達情況。結(jié)果表明在EVC304TLR4細胞中TLR4表達水平很低（即在該細胞中TLR4能被有效抑制），提示EVC304TLR4細胞可以在本實驗中用于研究TLR4的基因功能。3轉(zhuǎn)錄因子IRF3和NFKB的細胞核移位及其與HTNV感染的時程關(guān)系HTNV分別感染EVC304TLR4細胞和EVC304TLR4細胞，以LPS刺激作為陽性對照組，以未進行任何刺激組作為陰性對照組。觀察在感染后05H、1H、3H、6H、12H后轉(zhuǎn)錄因子IRF3和NFKB的細胞核移位情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在所有組中刺激05H后IRF3和NFKB都沒有發(fā)生細胞核移位，在感染EVC304TLR4細胞1H、3H、6H后IRF3和NFKB發(fā)生了細胞核移位，其中以感染6H的細胞核移位最為明顯，而在12H時沒有觀察到細胞核移位現(xiàn)象。在HTNV感染EVC304TLR4各組中各個時段均未發(fā)現(xiàn)細胞核移位現(xiàn)象。4粘附分子ICAM1在HTNV感染前后的表達HTNV分別感染EVC304TLR4細胞和EVC304TLR4細胞6H后，用RTPCR和間接免疫熒光技術(shù)分別檢測粘附分子ICAM1的表達變化，結(jié)果顯示HTNV感染EVC304前后以及TLR4基因沉默前后ICAM1變化不明顯，且陽性對照組變化亦不明顯。結(jié)論HTNV①感染EVC304細胞后TLR4可能介導轉(zhuǎn)錄因子IRF3和NFKB的細胞核移位，且在一定時間內(nèi)（16H），核移位隨感染時間延長而增加。HTNV②感染EVC304細胞前后，ICAM1變化不明顯，且與TLR4沉默與否無明顯關(guān)系。本實驗初步闡明了在HTNV感染EVC304細胞中TLR4所引起的固有免疫信號通路活化的分子機制，為HFRS發(fā)病機理研究提供了新資料。

簡介：蘇州大學博士學位論文針對PTN重組慢病毒介導的SIRNA技術(shù)在小細胞肺癌基因治療中的實驗研究姓名余勇申請學位級別博士專業(yè)呼吸內(nèi)科學指導教師胡華成（教授）201009針對PTN重組慢病毒介導的SIRNA技術(shù)在小細胞肺癌基因治療中的實驗研究中文摘要II及干擾PTN的病毒組中PTN的表達。結(jié)果結(jié)果RTPCR和WESTERNBLOT檢測結(jié)果均表明，PTN基因在H446細胞中表達顯著高于H460細胞。構(gòu)建的慢病毒載體經(jīng)測序驗證正確。所構(gòu)建的SHRNA序列（GCAGCTGTGGATACTGCTGAA）對PTNMRNA的抑制效率為72，對PTN蛋白的抑制效率為592。大量包裝與純化后病毒滴度為1108TUML。PTN基因抑制組的H446細胞活力顯著低于正常未干擾組和陰性對照組細胞，基因抑制聯(lián)合化療組較單純基因抑制組及化療組細胞活力下降，細胞凋亡率增高，并具呈濃度依賴性。PTN基因沉默后，H446細胞中SLFN5和MMP9的表達分別較陰性對照組上調(diào)了1651和473，而AMOT和VEGF的表達分別較陰性對照組下調(diào)了331和266。協(xié)同化療后，上述趨勢更為明顯。動物實驗瘤體組織中干擾PTN病毒組PTNMRNA和PTN蛋白的表達明顯低于正常未干擾組及陰性病毒對照組，抑制率為分別為39及28。干擾PTN病毒組瘤體體積顯著小于正常未干擾組及陰性病毒對照組，若協(xié)同化療則瘤體縮小更明顯。結(jié)論結(jié)論構(gòu)建PTNRNA干涉載體，轉(zhuǎn)染后可有效降低H446細胞PTN的轉(zhuǎn)錄和表達，抑制H446細胞的生長并促進其凋亡，并可進一步影響H446細胞增殖和轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的表達變化。動物實驗也顯示針對PTN基因靶向治療可顯著抑制移植腫瘤在體內(nèi)的生長，若與化療協(xié)同則抑制作用更強。有望為小細胞肺癌基因治療提供一種選擇的治療手段。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞癌，小細胞肺；小干涉RNA，慢病毒；多效蛋白；H446細胞；異體移植作者余勇指導教師胡華成

簡介：目的①觀察腺病毒介導的IL24基因轉(zhuǎn)移對LPS誘導的系膜細胞增生的影響，并探索其對系膜細胞LPS誘導的系膜細胞的細胞周期調(diào)節(jié)蛋白P21、P27和CYCLINE的影響；②探討腺病毒介導的IL24基因轉(zhuǎn)移對系膜細胞分泌細胞因子的影響。方法①IL24腺病毒載體構(gòu)建及擴增通過RTPCR方法構(gòu)建IL24腺病毒載體，并經(jīng)序列分析證實。腺病毒載體在293細胞中擴增。②腎小球系膜細胞培養(yǎng)、分組及腺病毒感染系膜細胞在5％FCSDMEM中培染ADIL24；LPS組在5％FCSDMEM中加LPS10MGL，感染ADGFP；LPSIL24組在5％FCSDMEM加LPS10MGL，感染ADIL24。培養(yǎng)后分別取24小時、48小時提取細胞樣本或培養(yǎng)上清。③RTPCR和ELISA方法檢測IL24在GMC中的表達，ELISA方法檢測IL1、IL6的表達。④用MTT法和流式細胞術(shù)檢測GMC增生。⑤用WESTERNBLOT檢測P21、P27及CYCLINE的表達。⑥用ANNEXINVFITC流式細胞術(shù)檢測GMC凋亡。結(jié)果①對照組系膜細胞無IL24表達，ADIL24感染GMC后4小時到48小時IL24有穩(wěn)定表達。②IL24無誘導系膜細胞增生活性，而LPS可明顯誘導GMC增生IL24則可明顯抑制LPS誘導的GMC增生，但仍高于對照組。③LPS干預后的系膜細胞周期調(diào)節(jié)蛋白P21、P27表達下調(diào)CYCLINE表達上調(diào)；轉(zhuǎn)染IL24的系膜細胞P21、P27表達上調(diào)而CYCLINE表達下調(diào)。④IL24基因轉(zhuǎn)移上調(diào)系膜細胞IL6分泌，而對系膜細胞分泌TNFΑ無明顯影響。結(jié)論①IL24基因轉(zhuǎn)移可使LPS誘導的系膜細胞增殖受到抑制。②外源性IL24基因可誘導系膜細胞凋亡，使細胞周期負調(diào)控蛋白P21、P27表達上調(diào)的同時使細胞周期正調(diào)控蛋白CYCLINE表達下調(diào)，使系膜細胞生長抑制，被阻滯在G0G1期，這可能是IL24抑制LPS誘導的系膜細胞增殖的作用機制。③外源性IL24基因轉(zhuǎn)移可使系膜細胞分泌IL6上調(diào)，而對系膜細胞分泌TNFΑ無明顯影響。

簡介：江蘇大學碩士學位論文EB病毒BARF1基因表達對胃癌細胞系SGC7901生物學行為的影響姓名李友瓊申請學位級別碩士專業(yè)臨床檢驗診斷學指導教師周天戟20090605江蘇大學碩士學位論文ABSTRACTOBJECTIVETOSTUDYTHEEFFECTOFBARFIGENEENCODEDBYEPSTEINBAN“VIRUS0三BVINGASTRICCANOERCELLONCELLBIOLOGICALBEHAVIORSOASTOKNOWTHEFUNCTIONOFBARFLPROTEINANDTHEROLEINEBVASSOCIATEDGASTRICCARCINOMAEBVAGCMETHXIS1BARFIOPENREADINGFRAMEWASAMPLIFIEDBYPOLYMERASECHAINREACTIONPCRBASEDONTHEDNATEMPLETEEXTRACTEDFROMEBVPOSITIVECELLLINEB958ANDCLONEDINTOPSG5EUKARYOTICEXPRESSIONVECTORTHROUGHPGEMTCLONINGVECTORANDCONFIRMEDBYRESTRICTIONENZYMESANDDNASEQUENCING2PSG5一BARFLANDPSG5RECURCONTROLWERESEPARATELYTRANSFECTEDINTOMODERATELYDIFFERENTIATEDGASTRICCANCERCELLLINESGC7901THETRANSFCCTEDCELLSWERECLONEDBYLIMITEDDILUTIONANDSELECTEDBYGENEFICIN；418BARFLEXPRSSIONWASCONFIRMEDBYRTPCR3THEEFFECTOFBARFLONCELLPROLIFERATIONWASCARDEDOUTBYCELLCOUNTINGANDBLTRASSAYTHEFUNCTIONONAPOPTOSISINDUCEDBYANTICANCERDRUGDIAMMINEDICHLOROPLATINUMPDPWASPREFORMEDBYCELLCOUNTING，HOECHST33342STAININGANDDNALADDERASSAYINAGARGELELECTROPHORESISTHECARCINOGENICITYWASDETERMINEDBYSOFTAGARCOLONYFORMATIONASSAYANDTHECELLMIGRATIONABILITYBYTRANSWELLMIGRATIONASSAYRESULTS1PSG5BARFLWASSUCCESSFULLYCONSTRUCTEDANDTRANSFECTEDINTOSGC7901CELLSANDCELLCLONESSTABLYEXPRESSINGBARFLWEREOBTAINED2THEREWEREHIGHERPROLIFERATIONVELOCITIES，HIGHERSURVIVALRATEANDLOWERAPOPTOSISRATEANDLESSDNALADDERAFTERINDUCTIONBYDDPHIGHERCOLONYFORMATIONRATEINSOFTAGARANDHIGHERMIGRATIONRATEINBARFLEXPRESSINGCLONESCOMPARINGTOTHECONTR01CONCLUSIONOURRESLLLTINDICATEDTHATBARFLEXPRESSIONINGASTRICCARCINOMACELLSLEDTOMORERESISTANTTOAPOPTOSISINDUCEDBYDDPFASTERPROLIFERATION，HIGHERⅡ

簡介：點擊查看更多流式細胞術(shù)測定漢灘病毒滴度方法的建立.pdf精彩內(nèi)容。