EGCG抑制涎腺腺樣囊性癌細胞生長及EGFR-Erk信號轉導通路的作用研究.pdf

1、研究背景與目的:
　　腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma，ACC)是涎腺中最為常見的惡性腫瘤之一，其生長較為緩慢但侵襲性強，常沿神經(jīng)、血管生長，易復發(fā)和轉移。目前對該腫瘤的治療主要以手術和放化療為主，尚達不到理想的治療效果，預后極差。且常規(guī)的化學藥物所產(chǎn)生的毒副作用以及腫瘤細胞對化療藥物容易產(chǎn)生耐藥性仍是困擾臨床的難題。因此，尋找或研發(fā)能夠抑制腫瘤細胞生長的無毒藥物成為當前口腔醫(yī)學領域的研究熱點。

2、　　茶多酚(tea polyphenols)具有良好的抗瘤活性，但其作用機制仍不明確。茶多酚是茶葉中多酚類物質的總稱，其中EGCG（表沒食子兒茶素沒食子酸酯）含量最高。茶多酚中EGCG能抑制口腔癌、肺癌、胃癌、大腸癌等癌細胞生長，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)其通過多種途徑抑制腫瘤的形成、生長和轉移。EGCG對于不同種類腫瘤細胞的抑制作用及其相關機制并不一致，其對于涎腺腺樣囊性癌的抑制作用及相關機制未見報道。本文擬研究EGCG對涎腺腺樣囊性癌SACC-83細

3、胞株增殖、凋亡的作用，并對EGCG影響細胞生長的機制進行初步探討，為進一步臨床EGCG靶向治療口腔腺癌的應用提供細胞學參考。
　　研究方法:
　　本研究以涎腺腺樣囊性癌SACC-83細胞株實驗對象，研究不同濃度（0-80μM）的EGCG對SACC-83細胞生長的作用及其機制。通過倒置顯微鏡下細胞形態(tài)觀察，MTS法檢測細胞增殖活力，流式細胞儀檢測細胞凋亡，Western Blot蛋白印跡法檢測EGCG對SACC-83細胞EGF

4、R/Erk信號通路蛋白以及抗凋亡蛋白Bcl-2的表達情況，研究EGCG對SACC-83細胞生長的影響，并對EGCG影響細胞生長的機制進行初步探討。
　　研究結果:
　　1.倒置顯微鏡下觀察細胞學形態(tài)發(fā)現(xiàn)，EGCG（濃度0-80μM）對涎腺腺樣囊性癌細胞SACC-83作用48 h時，SACC-83細胞隨EGCG濃度升高而逐步出現(xiàn)細胞凋亡現(xiàn)象。細胞體積縮小，連接消失，與周圍的細胞脫離，懸浮細胞增多，細胞質呈明顯的空泡化。

5、　　2.經(jīng)MTS檢測，EGCG（0-80μM）對SACC-83有增殖抑制作用。當濃度達到40μM時，EGCG作用48、72 h后細胞的增殖率低于對照組（P＜0.05）。當達到80μM時，24、48、72 h后均檢測到了細胞增殖率與對照組有顯著性差異(P＜0.05)。且48、72 h后，80μM組的細胞增殖率顯著低于40μM組，40μM組顯著低于20μM組(P＜0.05)。EGCG在濃度40-80μM的范圍內對SACC-83細胞具有生長抑

6、制作用，并存在劑量效應。
　　3.經(jīng)流式細胞儀分析，EGCG(0-80μM)作用于SACC-83細胞24、48、72 h后，與空白對照組比較，濃度20μM、40μM、80μM組凋亡率顯著增高，且三個時間點的20μM組的凋亡率顯著高于10μM組(P＜0.05)。在這三個時間點均未檢測到20μM、40μM、80μM組之間凋亡率的差異(P＞0.05)。EGCG在濃度20-80μM時對SACC-83細胞具有凋亡促進作用。
　　4.W

7、estern blot蛋白印跡法檢測EGCG(0-80μM)作用SACC-83細胞48 h后，隨著EGCG濃度的增大，EGFR（表皮生長因子受體）、p-Erk（磷酸化細胞外信號調節(jié)激酶1/2）、Bcl-2（B淋巴細胞瘤-2）蛋白的表達降低，Erk（細胞外信號調節(jié)激酶1/2）的相對表達量基本持平。EGCG對SACC-83細胞有抑制Bcl-2、EGFR蛋白表達、Erk蛋白磷酸化的作用。
　　結論:
　　1.EGCG對涎腺腺樣囊性