cry4B基因的克隆、表達及其在蕈蚊中受體的初步分析.pdf

1、厲眼蕈蚊（Lycoriella sp.）是危害食用菌的一種雙翅目害蟲，它以幼蟲取食食用菌，對食用菌產(chǎn)量造成嚴重的影響。本研究采用山藥作為眼蕈蚊的飼料，通過控制溫度和濕度的變化，選出最佳飼養(yǎng)條件，即在濕度為80％，溫度25℃的條件下，幼蟲的存活率和存活歷期均最長，短期內(nèi)建立種群，在試驗室進行蕈蚊的大量飼養(yǎng)。
　　蘇云金芽胞桿菌（Bacillus thuringiensis，簡稱Bt）LLP29是一株高效殺蚊菌株。經(jīng)前期試驗，發(fā)現(xiàn)濃度

2、較高的LLP29菌株發(fā)酵液能較好地控制眼蕈蚊的幼蟲。Bt LLP29菌株Cry4B具有較高的殺蟲毒性。本研究根據(jù)cry4B基因序列設(shè)計的特異性引物，成功克隆了LLP29特有的cry4B基因，并對其進行了生物信息學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)cry4B基因和已報道的cry4B之間的同源性高達99%，同時還揭示出了cry4B基因及其編碼蛋白的一些生物和理化性質(zhì)，表明該蛋白不含信號肽，無跨膜區(qū)域。通過氨基酸分值高低，得出該蛋白為親水性蛋白。結(jié)構(gòu)域預(yù)測表明Cry

3、4B由Endotoxin_N、Endotoxin_M和Endotoxin_C3個結(jié)構(gòu)域組成。它其與其他Bt cry同源基因的相似性差異較大。與Cry4Ba的相似性最高為99%。通過原核表達獲得Cry4B殺蚊蛋白，以眼蕈蚊為靶標進行生物測定，其LC50達1160 ng/mL。運用生物素-親和素沉降試驗，成功分離到兩個Cry4Ba結(jié)合蛋白。但可能是結(jié)合蛋白濃度偏低，質(zhì)譜檢測，未能獲得有效數(shù)據(jù)。本研究利用Cry4B毒素蛋白，通過Pulls d