簡介：登革熱病毒DENGUEVIRUS是一種能夠引發(fā)登革熱疾病的黃病毒屬病毒，病患區(qū)主要分布在熱帶和亞熱帶地區(qū)。據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，世界上五分之二的人口將面臨罹患登革熱的危險。全球每年有超過5000萬的登革熱感染病例，其中50萬例發(fā)展為登革出血熱DHF和登革休克綜合征DSS，嚴重的甚至導致死亡。由于登革熱較高的死亡率，它已經成為嚴重危害人類健康的傳染性疾病之一。遺憾的是，這種疾病在預防免疫方面，目前尚未研制出有效的疫苗。在疾病治療方面，也未能有針對性的藥物問世。因此，找到有效抗登革熱病毒的抑制劑已經迫在眉睫。登革熱病毒是單股正鏈RNA病毒，可翻譯成三種結構蛋白核蛋白C，膜結合蛋白PRM和包膜蛋白E和七種非結構蛋白NS1，NS2A，NS2B，NS3，NS4A，NS4B和NS5。其中NS3蛋白具有絲氨酸蛋白酶的作用，與NS2B蛋白形成異源二聚體復合物，該復合物在病毒的多聚蛋白轉錄和水解過程中發(fā)揮重要作用。通過抑制蛋白酶復合物的活性我們可以阻斷病毒的生長和繁殖。隨著2006年第一個活性登革熱絲氨酸蛋白酶的單晶衍射結構的測定和2011年四肽醛抑制劑BZNLELYSARGARGH與登革熱絲氨酸蛋白酶復合物的晶體結構的解析，設計結構導向的絲氨酸蛋白酶抑制劑已經具備了先決條件。本文以登革熱絲氨酸蛋白酶為靶點，基于蛋白酶晶體結構的特點，參考已報道的四肽醛BZNLELYSARGARGHKI58ΜM的結構，以三肽醛LYSBOCARGPBFLYSCBZH為母核結構，通過選擇不同的LINKER構建一系列環(huán)肽小分子化合物，合理設計優(yōu)化后進行了生物活性篩選。其中合成的目標化合物Ⅲ和X對DENV2絲氨酸蛋白酶的抑制率均超過50％，目標化合物Ⅲ的抑制率目標化合物Ⅲ的IC50值為35ΜM，EC50值為33ΜM，為設計針對絲氨酸蛋白酶NS2BNS3PRO為靶點的抗登革熱病毒的抑制劑提供了一定的參考依據(jù)。

簡介：第一部分EBV特異性細胞毒性T淋巴細胞體外誘導培養(yǎng)及殺傷效果鑒定目的研究EB病毒特異性細胞毒性T淋巴細胞EBVCTL體外誘導和擴增培養(yǎng)的方法，并檢測其殺傷的效果。方法采集EBV血清抗體陽性的6例正常供體的外周血單個核細胞（PBMNC），用EBV轉化的B淋巴細胞系（BLCL）作為抗原遞呈細胞及抗原刺激劑經輻照滅活后不斷刺激培養(yǎng)自體PBMNC，誘導產生EBVCTL，并將其擴增培養(yǎng)；采用流式細胞儀鑒定其免疫表型；然后檢測不同效靶細胞比例條件下EBVCTL對自體BLCL、自體植物血凝素培養(yǎng)的B淋巴母細胞（PHABLAST）、HLA不合供體的BLCL（ALLOBLCL）、K562細胞株的殺傷效果。結果6例EBV血清抗體陽性正常供體來源的PBMNC在體外成功篩選并擴增培養(yǎng)了EBVCTL，擴增效率為PBMNC數(shù)的186550倍。刺激10次培養(yǎng)后的EBVCTL對自體BLCL在201，101，51三種效靶細胞比例條件下特異性殺傷效率的平均值分別為594、432、290；對PHABLAST、ALLOBLCL、K562的非特異性殺傷率在上述三種效靶細胞比例下平均值依次為71、94、103（P﹤005），66、83、81（P﹤005），54、73、63（P﹤005）。結論EBVCTL能有效在體外篩選培養(yǎng)并擴增，并能有效殺傷HLA相合的BLCL；可望成為EBV相關性移植后淋巴細胞增殖性疾病的過繼免疫治療的有效方法。第二部分異基因造血干細胞移植后淋巴細胞增殖性疾病的臨床分析目的提高對異基因造血干細胞移植后淋巴細胞增殖性疾?。≒TLD）的認識，探討其有效的治療策略。方法回顧性分析2006年1月至2011年12月我院行異基因造血干細胞移植的524例病例，其中同胞全相合移植299例，無關供體相合移植149例，親緣半相合移植51例，臍血移植25例。結果根據(jù)臨床表現(xiàn)及病理結果共確診7例PTLD；在上述四種移植類型中PTLD發(fā)病率依次為03（1299），27（4149），20（151），40（125）；后三者發(fā)病率均高于同胞全相合移植組（P044）；在預處理應用抗胸腺細胞球蛋白（ATG）的患者中發(fā)病率為27（6225），明顯高于無ATG者（1299P046）。7例PTLD臨床表現(xiàn)特征主要分為兩類6例發(fā)生在移植后2至8個月，播散性起病，正規(guī)經驗性抗感染治療無效的發(fā)熱，淋巴結進行性腫大，血象三系進行性下降，EB病毒血癥，病情迅速進展，短期內出現(xiàn)多臟器功能不全；1例發(fā)生在移植后18月，以頜下淋巴結進行性腫大局限性起病，EBVDNA檢測陰性，病程相對緩和。病理類型6例為彌漫大B細胞淋巴瘤，1例為小淋巴細胞性淋巴瘤。7例中4例給予含利妥昔單抗方案治療，2例恢復，2例死于PTLD進展；1例給予供者淋巴細胞輸注后恢復；其余2例對抗病毒對癥支持治療無效死亡。結論PTLD是一組異質性淋巴細胞增殖性疾病，盡早診斷，及時采用有效措施治療有望改善其預后。

簡介：目的探討人類免疫缺陷病毒HUMANIMMUNODEFICIENCYVIRUS，HIV感染者在急性期的臨床特點以及接受抗病毒治療ANTIRETROVIRALTHERAPY，ART48周過程中的免疫學和病毒學應答變化，并進一步分析艾生特強化治療和雷公藤多甙片TRIPTERYGIUMWILFDIIHOOKF，TWHF對病毒儲存庫和免疫激活是否有影響，從而尋找對急性期HIV感染者的臨床干預措施，有助于深化對早期強化治療的認識，并為達到艾滋病功能性治愈提供一定的理論依據(jù)。方法1橫斷面研究招募44例未接受過ART的HIV急性期感染者，采集外周靜脈血標本，收集臨床流行病學資料，描述急性期的臨床癥狀，分析CD4T及CD8T細胞計數(shù)、CD4CD8比值、異常免疫激活、血漿病毒載量、感染途徑、感染時間等指標之間的相關性。2隊列研究篩選27例急性期HIV感染者，根據(jù)CD4T細胞計數(shù)進行1∶1匹配原則選取27例慢性期感染者作為對照，規(guī)律ART并于基線、治療后4、12、24、36、48周進行隨訪，觀察啟動ART后兩組人群在CD4T細胞計數(shù)、CD4CD8比值、血漿病毒載量和CD8T細胞上HLADR、CD38表達水平的動態(tài)改變。進一步將27例急性期HIV感染者根據(jù)接受ART方案的不同分為三個亞組，第一組為11例患者接受含艾生特RALTEGRAVIR，RAL的ART，并于ART24周時加用TWHF第二組為10例患者僅接受四聯(lián)強化ART第三組為6例患者接受標準三聯(lián)ART，分別在基線、治療4、8、12、24、36及48周共7個時間點進行規(guī)律隨訪。觀察三組人群CD4T細胞計數(shù)、病毒載量及CD8T細胞上HLADR、CD38表達水平的動態(tài)改變。3隊列研究分別從上述隊列中篩選出16例急性期和慢性期初治HIV感染者，分別檢測基線、4、12、24及48周共5個時間點PBMC中的HIVDNA的動態(tài)變化，并分析與CD4T細胞計數(shù)、血漿病毒載量及CD8T細胞上HLADR、CD38表達水平的相關性。進一步分析TWHF組（6例）、TWHF組（4例）和對照組（6例）三組人群中急性期感染者在上述5個時間點的HIVDNA的動態(tài)變化是否有差異。結果1橫斷面研究44例急性期HIV感染者最常見的癥狀和體征包括發(fā)熱28例636％、頸部淋巴結腫大23例523％、皮膚黏膜損害8例182％、腹瀉9例205％、咽痛、咳嗽各4例91％等少見首診癥狀和體征包括1例23％格林巴利綜合征、1例23％上臂蜂窩織炎、1例23％頭痛嘔吐、1例23％肛周膿腫、1例23％血小板減少。其中7例159％患者無明顯癥狀。其中32例患者727％可以明確具體感染時間，平均為85IQR51，118天，25例568％出現(xiàn)了淋巴細胞比例升高，CD4T細胞計數(shù)中位數(shù)為413ULIQR359UL，620UL，CD8T細胞計數(shù)中位數(shù)1521ULIQR1054UL，2226UL，最大值高達7984UL，CD4CD8平均為029015，037，其中42例955％患者呈現(xiàn)明顯的倒置現(xiàn)象。血漿病毒載量中位數(shù)為489LG拷貝MLIQR459LG拷貝ML，543LG拷貝ML。CD8T細胞表面的HLADR和CD38表達比例分別為744％±162％和847％±125％。CD4T細胞和淋巴細胞計數(shù)之間存在顯著的正相關關系R049，P0001，CD8T細胞的HLADR和CD38表達比例與血漿病毒載量有顯著的正相關趨勢R043，P0005R050P00008。2隊列研究27例急性期和27例慢性期HIV感染者經過48周ART，血漿病毒載量分別降低了368LG拷貝ML和332LG拷貝ML，兩組CD4T細胞計數(shù)分別增長了223UL和121ULP0032，CD8T細胞計數(shù)分別減少1102UL和271ULP0004。ART48周時，兩組CD4T細胞計數(shù)及比例、CD8T細胞計數(shù)及比例和CD4CD8比值大于1的患者所占的比例無統(tǒng)計學差異P＞005。兩組CD8T細胞的HLADR表達比例分別降低489％和354％，CD38表達比例分別降低451％和223％，發(fā)現(xiàn)AHI組的CD38表達比例變化量明顯高于CHI組P0006，而兩組的HLADR表達比例無統(tǒng)計學差異P0081。在TWHF組、TWHF組和對照組中，強化治療組的血漿病毒載量的下降速率明顯快于對照組P0019，CD4T細胞計數(shù)在48周內的變化量分別151UL、227UL、193ULP057，CD8T細胞計數(shù)變化量分別為1527UL、1112UL1550ULP074，三組人群之間HLADR和CD38表達比例均無統(tǒng)計學差異P＞005。3隊列研究基線時，AHI組和CHI組PBMC中HIVDNA分別為211181，245和222205，254LG拷貝106PBMC，P057，CHI組HIVDNA與血漿病毒載量呈顯著正相關關系P0026，R005，AHI組未發(fā)現(xiàn)兩者之間的相關性。規(guī)律ART后，兩組人群平均HIVDNA含量均呈下降趨勢，但各個時間點之間亦無明顯統(tǒng)計學差異P＞005。治療48周時，TWHF組、TWHF組和對照組的HIVDNA分別為117006，125、177086，208和111038，135拷貝106PBMC，三組人群之間亦無統(tǒng)計學差異。結論HIV急性期感染者常見臨床表現(xiàn)是發(fā)熱、頸部淋巴結腫大、皮疹及腹瀉CD8T細胞計數(shù)顯著升高，CD4CD8倒置明顯和異常升高免疫激活是急性期的特征性表現(xiàn)，病毒載量和T細胞激活亞群檢測，尤其是CD4CD8比值有助于早期診斷急性期HIV感染。相比慢性期，對急性期HIV感染者進行早期ART治療，不僅可以早期將病毒載量控制在檢測下限以下，而且可以更顯著降低CD8T上CD38和HLADR的表達，艾生特強化治療可以快速降低病毒載量，但不能影響機體的免疫學的應答。從病毒儲存庫方面分析發(fā)現(xiàn)，病毒儲存庫在急性期的早期即開始建立，急性期和慢性期病毒載量和HIVDNA在治療后衰減呈正相關，說明任何階段抗病毒治療都可以起到減少病毒儲藏庫的作用。急性期患者接受雷公藤多甙聯(lián)合艾生特強化治療48周，觀測到PBMC中HIV1DNA的含量呈降低的變化趨勢。

簡介：目的研究維持性血液透析患者丙型肝炎病毒HCV感染的血清學診斷方法探討抗HCV聯(lián)合HCVRNA檢測在維持性血液透析患者HCV感染早期診斷中的意義以期獲得維持性血液透析患者HCV感染早期診斷的可靠方法并明確深圳市第二人民醫(yī)院血液透析中心患者丙型肝炎病毒感染的現(xiàn)況。方法選擇深圳市第二人民醫(yī)院血液透析中心183例維持性血液透析患者為研究對象分別使用不同HCV抗體試劑盒檢測抗HCV使用TMA法定性檢測HCVRNA熒光定量PCR法定量檢測HCVRNA比較不同產品及診斷方法對HCV的檢出率評價ALT變化與HCVRNA載量以及抗HCVSCO值與HCVRNA載量的關系。結果兩種不同產品國產試劑和進口試劑對抗HCV檢測結果一致在本中心183例維持性血液透析患者中檢出抗HCV陽性患者13例檢出率為71％兩者間差異無統(tǒng)計學意義P1000TMA法定性檢測HCVRNA陽性16例檢出率為87而免疫熒光定量PCR法檢測HCVRNA陽性10例檢出率為55兩者之間差異有統(tǒng)計學意義Χ287537P0000HCVRNA定性檢測比檢測抗HCV的檢出率高兩者的差異有統(tǒng)計學意義Χ281531P0000聯(lián)合檢測抗HCV和HCVRNA定性檢測結果HCV陽性共19例檢出率為104與單獨檢測抗HCVP0031相比較差異有統(tǒng)計學意義但與單獨定性檢測HCVRNAP0250比較差異無統(tǒng)計學意義。HCVRNA的載量和ALT的變化無相關性R0189P0536抗HCV初篩的SCO值與HCVRNA載量無相關性R0174P0569。深圳市第二人民醫(yī)院血液透析中心患者丙型肝炎病毒感染率為104高于獻血人群Χ218857P0000。結論本研究結果顯示HCVRNA定性檢測較抗HCV檢測能縮短維持性血液透析患者HCV感染后檢出的“窗口期”有利于早期診斷。HCVRNA定性檢測能較臨床現(xiàn)行的HCVRNA免疫熒光定量檢測顯著提高HCV感染的檢出率。聯(lián)合檢測抗HCV及HCVRNA定性檢測既能縮短HCV感染檢出的“窗口期”也能顯著提高HCV感染的檢出率可避免漏檢處于血清轉換期或慢性病毒攜帶或既往感染的“隱性”患者值得臨床推廣應用。ALT的變化和HCV載量無明顯相關性在血液透析患者中輔助早期診斷HCV感染的作用較小。

簡介：河北醫(yī)科大學博士學位論文實驗性癲癇大鼠認知功能障礙的機制探討及尼莫地平的影響姓名王佩申請學位級別博士專業(yè)神經病學指導教師王維平20080401英文縮寫EDTAEEGENEPSPFCMGABAG1UHFSLTDL阻MAPKKNMDNMDAPBSPMSFPKAETHYLENEDIAMINETETRAACETIC乙二胺四乙酸ELECTROENCEPHALOGRAM腦電圖ERRORNUMBER錯誤反應次數(shù)EXCITATORYPOSTSYNAPTISPOTENTIALS興奮性突觸后電位FLOWCYTOMETRY流式細胞術GAMAAMINOBUTYRICACIDY氨基丁酸GLUTAMICACID谷氨酸HIGHFREQUENCYSTIMULATION高頻刺激LONGTERMDEPRESSION長時程抑制LONGTERMPOTENTIATION長時程增強MITOGENACTIVATEDPROTEINKINASEKINASE有絲分裂原活性蛋白激酶激酶NIMODIPINE尼莫地平NMETHYLDASPARTICN甲基D天門冬氨酸PHOSPHATEBUFFEREDSALINE磷酸鹽緩沖液PHENYLMETHYLSULFONYLFLUORIDE苯甲基磺酰氟PROTEINKINASEA2L

簡介：華東師范大學博士學位論文自我的社會認知與自我成長團體姓名呂建國申請學位級別博士專業(yè)基礎心理學指導教師俞文釗200051ABSTRACTFROMTHEFUNDAMENTALVIEWPOINTTHATTHESELFGROWSINTHEINTERACTIONBETWEENINDIVIDUALANDCOLLECTIVEACLOSERLOOKISTAKENATTHEJNTERACTIVECONTEXTANDTHESOCIALCOGNITIONOFTHESELFINTHESELFGROWTHGROUPANDACCORDINGTOTHEIDEAOFTHEJNTERNALIZATIONOFTHESOCIALCOGNITIVESTRUCTUREINSELFGROWTHAPROPOSESRAISEDTOMAKESUREOFTHEPOSSIBILITYANDNECESSARYCONDITIONTOADAPTGROUPINTERVENTIONSOFFACILITATINGSELFGROWTHTHROUGHTHESOCIALCOGNITIONSTRUCTUREIMPROVEMENTTHROUGHASETOFFIELDSTUDY，MANAGINGTHESOCIALSELECTINGSITUATIONANDCONFLICTINGFEEDBACKITISFOUNDTHATTHESUBJECTS’WORKINGSEIFCONCEPTMAYCHANGEINTHESITUATIONOFHIGHAROUSALANDHIGHINCONSISTENCYANDTHECHANGEDSELFCONCEPTMAYTAKEPARTINTHEGUIDANCEANDADJUSTMENTOFTHESOCIAICOGNITIONOFTHESELFITISDEMONSTRATETHATINCASETHEINDIVIDUALISTHREATENEDBYTHECONFLICTSITUATIONTHECOLLECTIVESELFMAY10WDOWNINTHECHANGESMENTIONEDABOVESEXDIFFERENCEISANACTIVEMEDIUMFACTORINTHEANALYSISOFTHEDIFFERENTTYPESOFRECEIVINGCONFLICTFEEDBACKITISFOUNDTHATTHEREEISTSTHETENSIONSYSTEMANDTHETENSIONINFLUENCESTHESELFDESCRIPTIONBOMININDIVIDUALSELFANDCOLLECTIVESELGINTHEMUTUAICONSTRUCTIVECOGNITIONFRAMEWORK，CONNECTEDTHESOCIALCOGNITIVETHEORIESOFTHESEL￡AMODELOFMUTUALCONSTRUCTIONINSELFGROWTHISPROPOSEDUNDERTHISMODEL，THE5STEPSOFTHEGROUPPROCESSORIENTATION，OPENNESS，EXPLORATION，RESPONSLBILITYANDINTEGRATION；THE5PRINCIPLESFOROPERATIONPROGRESSIVEORIENTATION，SITUATIONHIGHLIGHT，COGNITIVETENSION，COHORTCOMPOSITIONANDAUTOSELECTION，ARECLEARLYEXPRESSEDINTHECASESTUDYANDINTHETRAININGPROGRAM“THESELFGROWTHILAND”THEPRACTICEOFTHEGROWTHGROUPWASORIGINATEDFROMLEWINIANTGROUPDURING40STHISCENTURYASTHEEARLIESTTYPEOFLEARNINGGROUP，ITWASTHECOMPONENTOFORGANIZATIONDEVELOPMENTLEDBYLEWINANDITHASTHEBASICAIMTOIMPROVEMANAGERSSKILLSOFINTERPERSONALCOMMUNICATION，TOFACILITATEINDIVIDUALGROWTHANDORGANIZATIONALGROWTH，ANDFINALLYTOIMPROVETHEPERFORMANCEOFTHEWHOLEORGANIZATIONTHROUGHTHETHEORETICALANDAPPLICATIVESTUDY，THISRESEARCHOFFERSABENEFICIALFRAMEWORKTOPERSONNELTRAININGIN‘HUMANCENTERED”MANAGEMENTKEYWORDSSOCIALCOGNITIONOFTHESELFSELFGROWTHGROUP，SELFCONCEPT，HUMANCENTEREDMANAGEMENT，GROUPINTERVENTION

簡介：背景現(xiàn)有治療性HPV疫苗在宮頸癌人類臨床試驗中缺乏顯著療效。增強腫瘤抗原特異的殺傷效應細胞免疫應答是提升疫苗效果的重要策略。病毒樣顆粒VLPS在激發(fā)體液免疫中己證明具有高度免疫原性，是理想的疫苗載體。目的本研究擬探討以VLPS形式呈遞HPVCTLS抗原肽，考察激發(fā)的特異細胞免疫應答以及對腫瘤生長的干預，以揭示VLPS作為治療型疫苗載體的應用潛能，并提供候選治療性HPV疫苗。方法根據(jù)文獻報道選擇小鼠中證明有效的4個HPV16E6、E7CTLS表位，經基因重組將其DNA片段克隆于乙肝核心抗原HBCAG優(yōu)勢抗原表位。重組蛋白在大腸桿菌中經誘導表達，以硫酸銨鹽析法和蔗糖密度梯度離心純化，并經高效液相凝膠過濾色譜和電鏡進行分析鑒定。制備的VLPS以預防性和治療性策略分別對小鼠TC1細胞移植腫瘤進行免疫干預。研究檢測了小鼠腫瘤大小變化脾細胞分離后經特異抗原肽刺激，以ELISA檢測IFNΓ表達，以ELISPOT檢測分泌IFNΓ的淋巴細胞，并以流式細胞分析儀檢測CD8IFNΓ細胞此外，本研究還評價了VLPS疫苗刺激機體產生的免疫記憶，探討了體內預存的抗載體抗體、VLPS結構、免疫途徑等因素對抗原特異治療性VLPS疫苗免疫的影響。結果重組蛋白在大腸桿菌中獲得了高效表達，純化的蛋白主要以VLPS形式存在基于E74957表位的VLPS以預防性策略免疫小鼠后，完全抑制了移植腫瘤的生長在治療性策略中，VLPS顯著抑制了23MM腫瘤的增長，對于56MM甚至更大的腫瘤（89MM），VLPS疫苗免疫同樣顯示了明顯的腫瘤生長抑制作用此外，VLPS疫苗刺激機體產生了有效的免疫記憶應答，最少可持續(xù)15周機體預存的抗載體抗體對VLPS疫苗發(fā)揮作用無顯著影響抗原肽體外刺激脾細胞，結果顯示疫苗免疫小鼠脾細胞具有增強的IFNΓ表達，提高的分泌IFNΓ的淋巴細胞水平，以及增加的小鼠體內CD8IFNΓ細胞數(shù)目。結論呈遞HPVE7CTLS表位的VLPS疫苗能夠激發(fā)持續(xù)有效的E7特異細胞免疫應答，顯著抑制腫瘤生長，有希望作為候選治療性HPV疫苗，同時，HBCAGVLPS是有應用潛能的治療性疫苗載體。

簡介：自從1954年首次成功在孿生子問進行腎移植以來，經過半個世紀的不懈努力，腎移植技術已從探索走向成熟。近年來，由于技術的改進，對免疫學認識的深入以及強有力免疫抑制劑的問世，患者的近中期生存率及生活質量已有極大的改善，1年尸腎存活率已達96％，5年腎存活率達80％。但是器官移植后受者的人類巨細胞病毒HUMANCYTOMEGALOVIRUSHCMV感染仍然是導致移植后患者死亡的主要原因之一。移植術后CMV肺部感染發(fā)生率為20％～70％，且15％～35％為有癥狀的CMV病，典型的CMV肺部感染多發(fā)生于移植術后1～6個月內。CMV在全世界成人中感染率為60％～100％，多為潛伏性感染，機體表現(xiàn)為持續(xù)血清學陽性即抗CMV抗體IGG陽性。當免疫功能下降、特別是細胞免疫力低下時，機體又可新感染CMV，或潛伏的病毒再次激活、復制，形成活動性CMV感染，重者則發(fā)生明顯的“CMV病”，在這種情況下，CMV常與其他病原體使免疫功能低下者發(fā)生二重或多重感染，病情兇險，死亡率高。CMV肺部感染被認為不僅是器官移植術后近期死亡的重要原因，而且還可能與急性排斥反應和慢性移植物失功有關。如能早期診斷活動性CMV感染，并及時給予抗病毒治療可有效改善免疫受抑制和免疫缺陷病人活動性HCMV感染的癥狀，降低其疾病的嚴重性和死亡率。因此，在監(jiān)測CMV易感病人時，應及早而準確地把握病人是否發(fā)生活動性HCMV感染，這樣才能及時治療活動性感染的病人，又使未發(fā)生活動性感染的病人免受抗病毒藥的毒性損害。第一部分建立NASBBA法檢測即刻早期核糖核酸的實驗條件及在器官移植后巨細胞病毒感染診斷中的初步實驗研究目的器官移植術后CMV感染是導致移植后患者死亡的主要原因之一，因而早期、快速而準確地診斷CMV活動性感染已成為監(jiān)測CMV感染狀況、及時給予抗病毒治療以及判斷預后的關鍵。關于CMV的診斷方法很多，如病毒包涵體檢查、病毒分離培養(yǎng)、血清抗體檢測及DNA聚合酶反應PCR、CMV抗原血癥的檢測等，這些方法各有優(yōu)缺點，但是存在一個共同的不足之處，即無法區(qū)分CMV潛伏性感染和活動性感染。隨著對CMV基因組的結構和功能的深入研究，有學者發(fā)現(xiàn)即刻早期和晚期基因的轉錄產物和病毒復制緊密相連，由此提出檢測病毒MRNA是快速診斷CMV活動性感染的一項黃金指標。近年來，應用核酸基礎序列擴增NUCLEICACIDSEQUENCEBASEDAMPLIFICATION，NASBA技術檢測病毒RNA得到了快速發(fā)展。NASBA法檢測RNA是一項引物依賴性的核酸技術，我院自2000年1月始采用該法測定PP67MRNA用于移植術后CMV活動性感染的臨床診斷，取得了許多經驗，PP67MRNA檢測雖然特異性高，但敏感度低，而且陽性結果出現(xiàn)時間較晚等缺點，不能滿足臨床的需要。為了尋求更好的檢測指標，于2004年1月，我們建立了應用NASBA法檢測即刻早期核糖核酸IMMEDIATEEARLYMRNA，IEMRNA的實驗條件，結合臨床實際，并與PP67和抗原血癥檢測相比較。方法病例為我院2004年1月～2004年6月接受器官移植的患者，共42例，腎移植25例，肝移植13例，骨髓移植4例。術后每周抽抗凝血一次至術后3個月。首先建立NASBA法檢測LEMRNA的實驗條件及相關試劑的合成。采用NASBA法檢測IEMRNA、PP67MRNA，同時進行免疫組化ENVISIONTM二步法檢測PP65抗原血癥。所有患者均采用PREDMMFCSAFK506三聯(lián)免疫抑制治療。術后采用普遍性預防抗病毒治療方案，給予丙氧鳥苷25～5MGKG1D1，分2次靜脈滴注，共2周。如患者發(fā)生CMV病則丙氧鳥苷劑量加倍。20例健康成人的血標本作為陰性對照。結果42例器官移植術后患者共收集了134份外周血標本，分別進行了PP65抗原、PP67MRNA及IEMRNA的檢測，有2份標本擴增野生型MRNA及SCMRNA失敗，視為無效，有效標本數(shù)實為132份。36份抗原血癥陽性≥1個5萬PMNL標本中有25份IEMRNA同時陽性，陽性符合率為694％；13份PP67MRNA陽性標本中有11份IEMRNA陽性，陽性符合率為846％。42例移植術后患者中，檢出PP65抗原陽性≥1個5萬PMNL25例陽性檢出率595％，PP67MRNA陽性11例陽性檢出率262％，IEMRNA陽性16例陽性檢出率381％。發(fā)生有癥狀的活動性CMV感染CMV病11例，其中抗原陽性8例，PP67MRNA陽性6例，IEMRNA陽性10例。IEMRNA的敏感度、特異度、陽性預測值及陰性預測值分別為909％、806％、625％和961％。結論1NASBA法檢測CMVMRNA具有便捷、快速、準確可靠的優(yōu)點，特異性高，假陽性率低。2PP67MRNA的檢出對疾病診斷具有高的特異性，但敏感度低，不適于作為移植后先發(fā)制人抗病毒治療方案的依據(jù)，可以作為一個判斷預后的指標。3IEMRNA的檢測具有較理想的敏感性和特異度，IEMRNA能夠更好的反映CMV活動性感染的狀況，是病毒活動性感染的早期診斷指標。第二部分NASBA法檢測即刻早期核糖核酸在腎移植后巨細胞病毒感染診斷和指導治療中的意義研究目的目前腎移植后抗CMV病的重點是預防，包括普遍性預防抗病毒治療和先發(fā)制人PREEMPTIVETHERAPY治療。普遍性預防治療會給患者帶來沉重的經濟負擔和加重的藥物毒性問題，先發(fā)制人的抗病毒治療方案，可以減少治療的費用與藥物毒性而又不會延誤治療，早期檢測到活動性CMV感染是先發(fā)制人方案的先決條件。為了準確地把握好臨床的用藥時機，準確地開始和終止用藥，減少不必要的經濟損失和藥物毒負作用等，這就要求實驗室的檢測能夠早期、快速、準確可靠反映HCMV的活動狀況，同時能夠動態(tài)地檢測CMV在受者體內的活動變化。在此前提下，我們對腎移植術后55例患者的CMVLEMRNA、PP67MRNA、PP65抗原以及血清學抗體進行了動態(tài)檢測，結合抗病毒治療，尋找一種可用于先發(fā)制人抗病毒治療方案的最佳指標。方法病例選自我院接受腎移植的患者，共55例，術前所有供者和受者均采取不抗凝血標本，用ELISA檢測CMVIGG和IGM抗體。術后每周抽EDTA抗凝血一次共3個月，分別采用NASBA法檢測IEMRNA、PP67MRNA和免疫組化ENVISIONTM二步法檢測PP65抗原血癥。均采用PREDMMFCSAFK506三聯(lián)免疫抑制治療，發(fā)生急性排斥反應者給予MP沖擊治療3～5天，無效者改用ATG或OKT3。初次檢出任何一項陽性結果時靜脈給予丙氧鳥苷25～5MGKG1D1，直至轉陰后繼續(xù)治療7～14天。發(fā)現(xiàn)CMV病時丙氧鳥苷劑量加倍，治療無效或出現(xiàn)毒副作用如白細胞、血小板低下時改用磷甲酸鈉。結果1術前血清學狀況及術后CMV病感染率術前供者LGG抗體陽性者15例，接受陽性供體的受者7例為IGG陽性，8例為IGG陰性。接受供者IGG抗體陽性腎臟患者的感染率明顯高于陰性者。2CMV抗原指數(shù)檢測結果55例患者術后出現(xiàn)抗原陽性29例527％，陽性細胞數(shù)為20～6055萬PMNL，平均1235萬PMNL，其中＞10個5萬PMNL者17例，＞20個5萬PMNL者5例。觀察期內術后半年內發(fā)生有癥狀的活動性CMV感染CMV病13例。發(fā)生CMV病者的平均抗原指數(shù)高于非CMV病患者。IEMRNA陽性患者的平均抗原指數(shù)高于陰性者。3IEMRNA、PP67MRNA及抗原血癥診斷指標比較55例患者中，PP65抗原血癥陽性29例527％，PP67MRNA陽性14例254％，IEMRNA陽性20例364％。發(fā)生有CMV病13例，均接受了更昔洛韋治療，10例治療后檢測結果陰轉，同時癥狀消失。有2例出現(xiàn)ARDS，其中1例因呼吸衰竭死亡。IEMRNA的敏感度、特異度、陽性預測值和陰性預測值分別為923％、809％、600％和971％。4三項檢測指標的動態(tài)變化LEMRNA首次檢出平均時間31O±154天，早于PP67MRNA437±163和PP65抗原血癥396±156天。而PP67MRNA的平均陰轉時間早于其他兩項。結論1腎移植術前病人的CMV血清學狀況無論是陽性還是陰性，如果接受CMV陽性供者的腎臟，則術后感染發(fā)生率明顯高于接受CMV陰性供者腎臟的病人。2CMV病患者的平均抗原指數(shù)水平高于非CMV病者，說明抗原指數(shù)與CMV感染的嚴重程度有一定的關系。但某些抗原指數(shù)高者可能并無臨床癥狀，而低抗原指數(shù)者也有可能出現(xiàn)明顯的發(fā)熱等臨床表現(xiàn)。IEMRNA陽性者的平均抗原指數(shù)高于陰性者。3IEMRNA具有相對合適的敏感度、特異度、陽性預測值和陰性預測值，IEMRNA的檢測能夠更好的反映CMV活動性感染的狀況。而PP67具有較高的特異性，陽性結果代表了CMV病已經到了嚴重程度，對判斷預后有一定的意義。4IEMRNA首次檢出的平均時間早于PP67MRNA和PP65抗原血癥。而PP67MRNA的平均陰轉時間早于其他兩項。LEMRNA檢出時間早有利于掌握最佳用藥時機，防止了病情的延誤，使患者得到及時的治療。

簡介：目的觀察咳喘寧防治病毒誘發(fā)小兒哮喘的臨床療效，并通過觀察咳喘寧對患兒病毒感染階段TH亞群細胞因子表達的影響，闡明其免疫調節(jié)作用機理，為哮喘病的防治提供理論與實踐依據(jù)。方法采用隨機、單盲、對照的方法，將120例病毒誘發(fā)哮喘患兒隨機分為咳喘寧治療組60例和西藥對照組60例，觀察7天后臨床癥狀積分的改變。采用酶聯(lián)免疫雙抗體夾心ELISA法檢測患兒血清中TH1型細胞因子IL12與TH2型細胞因子IL4的含量，并分析其治療前后的變化。結果1咳喘寧治療組無論是總有效率還是臨床控制率，均明顯優(yōu)于對照組，其在改善噴嚏、流涕、咳嗽、咯痰等方面效果更明顯。2咳喘寧的療效與患兒性別、病程無關，但與患兒年齡有關，年齡越小，療效越好。3病毒誘發(fā)哮喘患兒血清TH1型細胞因子IL12水平降低，TH2型細胞因子IL4及外周血嗜酸性粒細胞EOS水平升高，IL12與IL4水平成負相關，IL4與EOS水平呈正相關，IL12與EOS水平呈負相關。說明患兒TH1TH2型細胞因子水平處于失衡狀態(tài)。咳喘寧能顯著提高患兒血中IL12，降低IL4，從而對病毒誘發(fā)哮喘患兒TH亞群產生調節(jié)作用，其作用明顯優(yōu)于對照組。咳喘寧能明顯降低患兒外周血EOS水平，其作用比對照組更明顯。結論咳喘寧防治病毒誘發(fā)小兒哮喘具有較好療效，其作用機制與提高患兒IL12水平，降低IL4與EOS水平有關。

簡介：目的1、應用HBV復制小鼠模型研究MIFNΑ不同亞型對HBV的抗病毒效果。2、探索MIFNΑ不同亞型的抗HBV作用機制。3、為揭示臨床IFNΑ治療HBV慢性感染患者應答不佳的分子機制及探索新的HBV治療策略提供實驗依據(jù)。方法1、尾靜脈高壓水注射PAAVHBV12質粒于BALBC建立HBV復制小鼠模型在注射質粒的前1天至注射后第8天每天腹腔注射MIFNΑ1、Α2、Α4、Α5、Α6、Α9、Α11重組蛋白僅注射生理鹽水組小鼠作為對照。2、注射質粒后1、4、7、10天內眥靜脈取血ELISA檢測血清HBSAG、HBEAG、HBSAB、HBEAB和HBCAB定量PCR檢測HBVDNA水平第4天和10天每組處死35只小鼠取肝組織免疫組化檢測肝內HBCAG表達水平定量PCR檢測肝內HBVDNA水平以及干擾素刺激基因OAS和PKR的MRNA水平。3、GRAPHPADPRISM5軟件作圖SPSS170對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析統(tǒng)計學方法為方差分析P結果1、在HBV復制小鼠模型中MIFNΑ5對血清HBSAG、HBEAG和HBVDNA的抑制效果最明顯MIFNΑ11的抑制效果最弱2、MIFNΑ處理組小鼠血清中HBSAB、HBEAB和HBCAB的表達均無明顯變化3、在HBV復制小鼠模型中MIFNΑ5對肝組織內HBCAG的表達以及HBVDNA的復制抑制效果最明顯MIFNΑ11的抑制效果最弱4、MIFNΑ4、Α5處理組OASMRNA水平與HBVDNA水平成負相關其它處理組無明顯相關性。結論1、在HBV復制小鼠模型中MIFNΑ5對HBV復制的抑制效果最明顯MIFNΑ11的抑制效果最弱。2、不同亞型MIFNΑ抗HBV作用差異的機制有待進一步深入研究。本研究的創(chuàng)新點及意義本研究表明在HBV復制小鼠模型中不同MIFNΑ亞型的抗病毒效果存在差異MIFNΑ5抗HBV效果比目前臨床常用的IFNΑ2更明顯本研究為臨床研發(fā)抗HBV感染的新型高效IFNΑ提供了實驗依據(jù)。

簡介：漢坦病毒（HANTAVIRUS）屬于布尼亞病毒科，是一種有包膜的單股負鏈RNA病毒。漢坦病毒主要引起兩種急性傳染病，一種是腎綜合征出血熱（HEMRHAGICFEVERWITHRENALSYNDROME，HFRS），該病是我國重點防治的傳染??；另一種是漢坦病毒肺綜合征（HANTAVIRUSPULMONARYSYNDROME，HPS），主要流行于美洲國家。HFRS是以發(fā)熱、出血和腎功能損害為主要特征的一種急性病毒性傳染病。病毒感染人體后可以侵犯內皮細胞和多種免疫細胞，誘生各類細胞因子的變化，最終導致免疫系統(tǒng)紊亂、血管通透性增加等一系列病理改變。但其具體機制尚未完全闡明，有待進一步研究。病毒的感染并非是泛嗜性的，每一種病毒通常只能感染某種或某些特定的靶細胞。通常，病毒由靶細胞表面的特異分子介導病毒進入細胞，該分子可作為病毒受體參與病毒的識別與結合等過程。病毒與細胞膜表面受體結合是病毒感染致病的第一步。Β3整合素已確認為致病性漢坦病毒的受體，Β3整合素上的PSI結構域（PLEXINSEMAPHIN–INTEGRIN，PSI）是漢坦病毒與整合素相互作用的位點。然而，近年來有研究報道，網格蛋白（CLATHRIN）相關的受體可能介導了漢坦病毒的吸附和入胞過程，但由于抑制網格蛋白的內吞作用并同時抑制Β3整合素并不能完全阻斷漢坦病毒的內化，因此漢坦病毒很可能還存在其他的內化通路。另外，本實驗室前期在應用RAS募集（RASRECRUITMENTSYSTEM，RRS）酵母雙雜交系統(tǒng)研究漢坦病毒包膜糖蛋白相互作用分子，尋找病毒受體的研究中發(fā)現(xiàn)，漢坦病毒包膜糖蛋白G1、G2均可以與纖維連接蛋白（FIBRONECTIN，F(xiàn)N）相互作用。FN是由血管內皮細胞、血管平滑肌細胞和肝臟產生的一種多功能蛋白質它的合成和降解由轉化生長因子Β（TGFΒ）調節(jié)。研究表明，F(xiàn)N在多種病毒感染過程中起重要作用，與病毒的入胞過程和致病過程密切相關。那么，漢坦病毒是否還存在著其他入胞途徑FN在漢坦病毒感染過程中又有什么作用呢是否能輔助病毒入胞，以及是否在漢坦病毒感染致病中起重要作用基于以上疑問，圍繞FN進行了如下研究1、FN與漢坦病毒核衣殼蛋白及小窩蛋白的共定位研究已知網格蛋白依賴型入胞途徑和小窩蛋白依賴型內吞途徑是許多病毒入胞的重要途徑。為了確定漢坦病毒是否可以由FN介導經小窩途徑入胞，我們研究了漢坦病毒與FN及小窩蛋白在細胞內的共定位關系。首先基于空斑形成實驗的實驗結果，應用微量細胞培養(yǎng)法（雙抗夾心ELISA）測定漢坦病毒的TCID50，對病毒感染滴度進行了滴定。在此基礎上，應用共聚焦顯微鏡分別觀察了漢坦病毒感染的人臍靜脈血管內皮細胞（HUVEC）中漢坦病毒與FN和小窩蛋白在感染細胞內亞細胞水平的共定位關系。結果發(fā)現(xiàn)漢坦病毒NP與FN和小窩蛋白可以共定位于HUVEC的細胞膜和細胞核周區(qū)域從而說明了漢坦病毒的入胞途徑除了可以通過網格蛋白依賴的入胞途徑外，可能還可通過FN介導的小窩蛋白途徑進入細胞。2、不同F(xiàn)N片段對漢坦病毒感染的競爭抑制試驗為進一步明確FN分子在漢坦病毒感染中的作用，我們應用5種FN片段進行了漢坦病毒感染競爭抑制試驗，以確定FN分子中的哪個結構片段或者哪種形式在漢坦病毒感染過程中起作用。具體方法是采用重組全長FN、細胞結合片段、連接區(qū)片段、鉸鏈區(qū)片段、硫酸肝素結合片段競爭抑制漢坦病毒感染敏感細胞HUVEC。用ELISA試驗分別檢測病毒抗原，結果表明，5種FN片段無論加入的濃度高低，對漢坦病毒的感染均有一定的抑制作用。特別是40KDA的連接區(qū)片段對漢坦病毒感染的抑制作用具有濃度依賴性，即隨著其濃度的增加病毒的載量也漸次減低。其余4種片段對漢坦病毒感染的阻抑作用并未隨著加入片段的濃度升高而增強，因此其阻抑病毒感染的作用可能具有非特異性。3、腎綜合征出血熱患者不同病期外周血FN及TGFΒ1的動態(tài)變化為探求FN及其相關因子TGFΒ1在漢坦病毒致病中的作用，共采集了HFRS患者不同病期的血清、血漿樣本各260份，以及正常人血樣30份。首先應用WESTERNBLOT檢測到HFRS患者血清中含有FN；繼而應用ELISA法對HFRS患者及健康人血清、血漿中FN及其相關細胞因子TGFΒ1進行檢測。結果發(fā)現(xiàn)，HFRS患者不同病期血漿中FN水平隨病期的推移呈波動升高趨勢，其中發(fā)熱期、低血壓休克期、少尿期患者血漿中FN水平均低于正常對照組。多尿期、恢復期血漿中FN水平均高于正常對照組（P綜上所述，在漢坦病毒感染過程中，F(xiàn)N有可能起到多種作用。在漢坦病毒感染時，病毒可能通過由組織型FN介導的小窩途徑入胞，且其FN連接區(qū)部位可能起到關鍵作用。同時，TGFΒ1與HFRS患者體內FN的關系還有待進一步的探討。本研究結果為進一步從分子水平上闡明漢坦病毒的入胞和致病機制提供了新的線索和依據(jù)。

簡介：分類號R3密級單位代碼學號1031220121004南京醫(yī)斜犬掌碩士學位論文題學科專業(yè)生理堂學院名稱直京醫(yī)型太堂基趟醫(yī)堂院目錄中文摘要LABSTRACT6第一部分SEIPIN缺失對情緒行為的影響及其性別差異13前言1。3一日Ⅱ舌材料和方法15結果22討論30參考文獻34第二部分SEIPIN缺失對認知行為的影響及其分子機制研究38前言38月O舌J芍材料和方法39結果46討念54參考文獻一58綜述一62英文縮寫及中英文全名對照表74攻讀學位期間發(fā)表文章情況75致謝78

簡介：目的；構建漢坦病毒HANTAVIRUS，HV莒南擴增株JUN05株核衣殼蛋白NUCLEOCAPSIDPROTEIN，NP的熒光蛋白表達載體；將HVNP基因與EGFP基因在BHK21細胞中融合表達，熒光顯微鏡下觀察融合蛋白的表達強度，以及融合蛋白在細胞中定位和分布，免疫組化觀察融合蛋白的免疫反應性，從而為新型HV診斷試劑研制與開發(fā)，以及NP結構與功能的研究奠定基礎。方法；根據(jù)HV莒南擴增株JUN05株NP基因的序列和表達載體PEGFPN1的多克隆位點序列，設計引物，通過PCR的方法擴增NP全基因。PCR產物回收后以核酸內切酶BGLⅡ、PSTⅠ雙酶切，克隆至同樣雙酶切的PEGFPN1載體上，并保持NP基因與EGFP基因的讀碼框一致，CACL2法轉化并篩選陽性克隆。通過PCR方法和雙酶切方法鑒定，并通過DNA測序技術最終鑒定表達載體的構建情況。將重組質粒以脂質體法轉染BHK21細胞，轉染24H后固定細胞，熒光顯微鏡檢和免疫組化技術觀察融合蛋白的表達并拍照記錄。結果；1構建了含有HVNP基因的熒光蛋白表達載體，酶切鑒定、PCR鑒定、及測序結果表明載體構建成功。2測序結果表明，NP基因成功連入EGFP基因上游，二者讀碼框一致無移位，與NP基因在克隆載體中的序列比對，無PCR擴增導致的堿基突變，并且NP基因末端的終止密碼子TAA被去除。并添加了KOZAK序列，為高效表達提供了基因水平的改造。3熒光顯微鏡下觀察，NPEGFP融合蛋白在BHK21細胞中得到高效表達，細胞漿內充滿了致密的綠色熒光，熒光呈核周分布，達到了以綠色熒光蛋白作為報告基因觀察NP的表達及定位的目的。免疫組化也出現(xiàn)了陽性信號。結論；本次研究利用基因工程技術成功地構建了含有HV莒南擴增株JUN05株NP全長基因的表達載體PEGFPNP。NP基因成功連入EGFP基因上游，使NP基因位于CMV啟動子之下，并添加了KOZAK序列，為高效表達提供了基因水平的改造。融合蛋白NPEGFP基因在BHK21細胞中得到了高效表達，呈現(xiàn)明亮的綠色熒光，表達的融合蛋白具有NP和EGFP的雙重活性，可用綠色熒光蛋白作為報告基因觀察NP的表達及定位，并為進一步篩選穩(wěn)定轉染細胞株，大量制備純化該蛋白，應用于HV的診斷奠定了基礎。

簡介：中國醫(yī)科大學博士學位論文逆轉錄病毒中介TNFΑ基因轉導的TIL抗人腦膠質瘤效應的實驗研究姓名關俊宏申請學位級別博士專業(yè)外科學指導教師陳淑珍200341X109，平均擴增274445倍，表明人腦膠質瘤TIL體外在IL一2作用下可得到良好的增殖；人腦膠質瘤TIL對TJ8510細胞殺傷活性與其培養(yǎng)時間相關，7FIL經IL一2培養(yǎng)10天，呈現(xiàn)出對腫瘤細胞的殺傷活性，但殺傷活性較低，而此時LAK的殺傷活性明顯高于TIL；當培養(yǎng)20天時TIL殺傷活性迅速增加，而LAK殺傷活性迅速下降，兩者差異顯著；30天時TIL殺傷活性處于高峰，而LAK殺傷活性繼續(xù)下降。提示人腦膠質瘤TIL對IL一2反應遲鈍，活化潛伏期長，而LAK細胞則相反，TIL體外抗瘤活性與增殖能力相關。2基因轉導前后，細胞的增殖情況未受到明顯影響，證明逆轉錄病毒中介的基因轉移并不影響宿主細胞自身的功能，TIL完全符合基因治療中運載細胞的要求；對TNFA基因轉導后的TIL細胞TNFA表達水平的檢測結果顯示TNFTIL細胞TNFD的分泌量遠遠超過TIL細胞和NEOR一‘FIL細胞；TNFTIL細胞表達TNFD的動態(tài)觀察結果TNFTIL細胞在體外培養(yǎng)30天，可持續(xù)表達高水平的TNFOL，說明導入TNF一0【基因已完整、穩(wěn)定地整合于TIL細胞基因組中并獲得了表達。比較TIL、NEOR一7FIL和TNFTIL三者的抗瘤活性，本實驗結果表明轉導TNFA基因的‘FIL細胞對人腦膠質瘤TJ8510細胞的體外抗瘤活性明顯提高，與TIL和NEORTIL相比差異顯著，我們認為這是由于TNFD基因轉導TIL細胞后，能持續(xù)高水平地分泌內源性的TNFD，從而放大了TIL自身的抗瘤活性。3局部轉輸TNFTIL和靜脈轉輸TNF一耵L均能明顯抑制裸鼠皮下腫瘤的生長，且抑瘤效果高于TIL治療組，TIL靜脈轉輸元明顯抑瘤效果，說明TNF一僅基因轉染TIL放大了TIL的體內抗瘤效應；而局部轉輸TNF一‘RIL較靜脈轉輸TNFTIL對腫瘤生長的抑制效果更為明顯，提示過繼性免疫治療膠質瘤以局部轉輸方式為佳。雖然靜脈轉輸TNFTIL的治療效果不及局部轉輸，但也能抑制人腦膠質瘤裸鼠皮下實體瘤的生長，與單純靜脈轉輸TIL的抑瘤效果差異顯著。我們認為其原因可能是①TNFD基因轉染后，放大了腫瘤局部TIL的抗瘤效應；②血循環(huán)中的TNFTIL分泌的TNF一0【可能在一定程度上發(fā)揮了全身抗腫瘤作用。2

簡介：I分類號分類號密級密級UDC學號學號406211212029南昌大學碩士研究生學位論文慢病毒介導慢病毒介導BMPRII基因基因沉默對人肝癌移植瘤生長沉默對人肝癌移植瘤生長的影響的影響THEEFFECTOFBMPRIIGENESILENCINGONTHEGROWTHOFHUMANHEPATOCELLULARCARCINOMATRANSPLANTATIONTUM王碩培養(yǎng)單位（院、系）南昌大學第二附屬醫(yī)院指導教師姓名、職稱吳建兵教授主任醫(yī)師申請學位的學科門類醫(yī)學學科專業(yè)名稱腫瘤學論文答辯日期2015年5月答辯委員會主席徐方云評閱人陳麗周存才2015年5月摘要II摘要目的目的探討B(tài)MPRII基因RNA干擾（RNAI）的重組慢病毒載體對人肝癌HEPG2細胞裸鼠移植瘤BMPRII基因表達和移植瘤生長的影響。方法方法1、前期研究已明確了具有下調BMPRII基因的SIRNA干擾序列，設計并合成SHRNAOLIGO退火后構建入干擾慢病毒載體PLSHRNAFBMPRII，用構建的慢病毒載體PLSHRNAFBMPRII轉染293T細胞，包裝慢病毒，并用熒光法測定滴度，用包裝的PLSHRNAFBMPRII干擾慢病毒侵染HEPG2細胞。2、通過實時定量逆轉錄聚合酶鏈反應QRTPCR、蛋白印跡（WESTERNBLOT）技術檢測慢病毒轉染后各組細胞中BMPRIIMRNA及蛋白水平表達的變化，明確處理后BMPRII沉默的效果。3、建立人肝癌HEPG2細胞裸鼠移植瘤模型，隨機分成實驗組、陰性對照組和空白對照組。隔天1次向各組動物腫瘤內分別注射BMPRIISHRNA慢病毒顆粒、攜帶無效序列的慢病毒顆粒和09氯化鈉溶液02ML，共5次，測量各組腫瘤體積的大小，繪制腫瘤生長曲線，13天后處死裸鼠。4、應用WESTERNBLOT及免疫組化技術檢測移植瘤中BMPRII蛋白水平表達。結果結果1、QRTPCR及WESTERNBOLT檢測結果顯示轉染組與空白對照組及陰性對照組相比，BMPRIIMRNA及蛋白表達水平明顯下調，差異有統(tǒng)計學意義（P005）?？瞻讓φ战M和陰性對照組剝脫的瘤體體積分別為（1274613302）MM3和（1255213005）MM3，而實驗組剝脫的瘤體體積為（32868772）MM3