簡介：目的利用哺乳動物細胞293T細胞表達含有西尼羅病毒W(wǎng)NVPRME的蛋白，自我組裝成病毒樣顆粒VIRUSLIKEPARTICLES，VLPS，改進優(yōu)化轉(zhuǎn)染等條件實現(xiàn)大規(guī)模轉(zhuǎn)染293T細胞，獲得大量的純化蛋白，以此蛋白作為抗原研制檢測西尼羅病毒抗體的ELISA試劑盒，用試劑盒來實現(xiàn)對我國出入境人員的血清進行調(diào)查。方法篩選典型西尼羅病毒株，構(gòu)建重組質(zhì)粒，大規(guī)模轉(zhuǎn)染293T細胞，優(yōu)化轉(zhuǎn)染的條件和方法，表達西尼羅病毒PRME蛋白，獲得大量的表達重組蛋白，通過間接免疫熒光實驗驗證表達抗原的完整性和特異性，純化西尼羅病毒PRME蛋白抗原，ELISA對表達產(chǎn)物進行鑒定制成大規(guī)模的檢測試劑盒采用蔗糖梯度離心1060％結(jié)合超速離心純化表達產(chǎn)物將純化的表達產(chǎn)物包被子聚苯乙烯微量反應板，與待檢血清中抗WNV抗體反應后，經(jīng)洗滌，再加入辣根過氧化物酶標記羊抗人IGG與之結(jié)合，然后用TMB作用顯色，建立間接ELISA方法，評價建立的間接ELISA方法對我國入境人員血清進行檢測。結(jié)果重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細胞后產(chǎn)生病毒樣顆粒VIRUSLIKEPARTICLESVLPS，優(yōu)化轉(zhuǎn)染的條件和方法，從轉(zhuǎn)染的293T細胞從細胞的上清液中和細胞中的表達的蛋白的的純化物中獲得大規(guī)模的重組蛋白，通過間接免疫熒光試驗表明，表達的病毒樣顆粒蛋白具有良好的抗原性間接ELISA證實，重組蛋白可以作為抗原用于檢測患者血清特異性抗體純化得到的大量的蛋白包被成ELISA試劑盒，通過對來自西尼羅疫區(qū)的286份我國入境人員血清檢測，與金標準美國FOCUS的WNVIGG檢測試劑盒比較，ELISALAB陽性檢出率為356％，F(xiàn)OCUSWNVIGG檢測試劑盒則為325％，兩者之間無統(tǒng)計學差異X2305，P0078＞005KAPPA值為08372，兩者具有良好的一致性，其中兩者的陽性檢出符合率為9118％，陰性符合率為9534％，總符合率為9266％。結(jié)論在哺乳動物細胞中表達的西尼羅病毒樣顆粒具有良好的抗原性以西尼羅病毒樣顆粒為抗原建立檢測WNV抗體的間接ELISA方法，檢測效果不亞于進口試劑盒，大規(guī)模轉(zhuǎn)染細胞所純化的西尼羅病毒的重組蛋白可以實現(xiàn)制成大規(guī)模商品化的試劑盒，可以以此試劑盒來對我國出入境人員進行血清學監(jiān)測。

簡介：點擊查看更多pXZ208-EGFP-HO-1慢病毒表達載體的構(gòu)建與鑒定.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：華中科技大學博士學位論文單純皰疹病毒胸苷激酶基因聯(lián)合內(nèi)皮抑素基因治療肝癌的實驗研究姓名邵俊偉申請學位級別博士專業(yè)普通外科學指導教師易繼林20040401華中科技大學同濟醫(yī)學院博士學位論文自殺基因SUICIDEGENE是指可引起細胞死亡的基因，即將某些細菌、病毒和真菌中特有的藥物敏感基因?qū)肽[瘤細胞，通過此基因編碼的特異性酶類將原先對細胞無毒或毒性極低的藥物前體在腫瘤細胞內(nèi)代謝成有毒性的產(chǎn)物，以達到殺死腫瘤細胞的目的，也稱藥物敏感基因。HSKTK基因是最有特點的自殺基因，它編碼胸苷激酶，該酶可將核瞢類似物NA代謝為二磷酸化物，后者在細胞內(nèi)酶的作用下成為有毒性的三磷酸化物而發(fā)揮抗腫瘤作用。病毒源性的TK基因與哺乳動物細胞內(nèi)的TK基因在生化性質(zhì)上有著很大的差異，細胞TK所催化的反應特異性較強，只能催化脫氧胸苷酸，而HSVTK除有此功能外，還能催化抗病毒核苷類似物ACYCLOVIRACV，GANCICLOVIRGCV，BROMOVINYDEOXYURIDINEBDVDU，這些前藥不能在細胞TK的作用下磷酸化，因而其本身對細胞無毒或毒性很低，但HSVTK基因?qū)爰毎⒈磉_后，生成特定的酶，這些酶將這些前藥三磷酸化，轉(zhuǎn)換成毒性產(chǎn)物，阻斷核酸代謝途徑，導致細胞死亡。正常人體的血管內(nèi)皮細胞倍增時間為一年，而實體瘤組織中血管內(nèi)皮細胞的倍增時間僅4天。血管是腫瘤生長的“糧草”，又是腫瘤細胞的溫床，血管的“瘋長”支持和幫助了腫瘤的瘋長，也為腫瘤細胞轉(zhuǎn)移和擴散提供了前提。因此，抑制血管生成可能是治療腫瘤的有效方法。FOLKMAN早在1971年就提出了抑制腫瘤血管生成，使腫瘤細胞因缺血缺氧而部分死亡從而達到治療腫瘤的目的，但是直到最近五年，這方面的研究才受到人們的重視，但是現(xiàn)有的一般抗血管形成藥物只能使腫瘤生長減緩，而不能使之完全消除，從腫瘤組織中發(fā)現(xiàn)的血管形成抑制因子，包括血管抑素ANGIOSTATIN、內(nèi)皮抑素ENDOSTATIN，它們對血管生成抑制作用更強。ENDOSTATIN為膠原蛋白XVIII的C端球形末端部分片段或其類似物。內(nèi)皮抑素在體外及小鼠中已證實能對多種移植的實體腫瘤及其轉(zhuǎn)移物有完全抑制作用，而且FOLKMAN發(fā)現(xiàn)在經(jīng)過6輪重復治療后，腫瘤對之仍然敏感，不產(chǎn)生耐藥性。總之，考慮到此二者所具有的抑制腫瘤的不同特性，實驗中通過對HSVTK和ENDOSTATIN基因抑制腫瘤生長作用加以證實的基礎上，進一步研究此兩者聯(lián)合使用下對肝癌的治療是否有協(xié)同作用，為肝癌的基因治療打下一定的基礎，為此，我們進行了以下的實驗研究。2

簡介：分類號R733密級公開UDC616006編號2011213186廣州醫(yī)科大學廣州醫(yī)科大學碩士研究生學位論文碩士研究生學位論文USP22SHRNA慢病毒載體的構(gòu)建及慢病毒載體的構(gòu)建及其干擾其干擾人鼻咽癌細胞鼻咽癌細胞CNE2的研究的研究研究生研究生余宏偉余宏偉導師師周同沖周同沖教授教授申請學位級別申請學位級別臨床醫(yī)學碩士年級級二零一一級學科專業(yè)業(yè)腫瘤學研究方向研究方向腫瘤放射治療論文提交日期論文提交日期2014年5月論文答辯日期論文答辯日期2014年5月學位類型型臨床型學位授予單位學位授予單位廣州醫(yī)科大學答辯委員會主席答辯委員會主席評議人人二零一四二零一四年五月目錄中文摘要1英文摘要3主要符號表5前言6材料與方法9結(jié)果24討論31結(jié)論33參考文獻34綜述37攻讀碩士學位期間取得的研究成果43致謝43學位論文原創(chuàng)性聲明45學位論文知識產(chǎn)權(quán)權(quán)屬聲明45關(guān)于學位論文使用授權(quán)的說明45

簡介：東南大學碩士學位論文乙型肝炎病毒宮內(nèi)感染危險因素分析及嬰兒聯(lián)合免疫失敗的預測姓名許傳露申請學位級別碩士專業(yè)婦產(chǎn)科學指導教師韓國萙20120623東南人學碩1學位論文分析顯示產(chǎn)前出血、羊水污染、羊水過少是宮內(nèi)感染的危險因素，多因素LOGISTIC回歸分析顯示母親分娩前高載量HBVDNA是宮內(nèi)感染的獨立危險因素OR892，95％CI67L一1624。2在251例母嬰感染組中，61例嬰兒聯(lián)合免疫失敗，免疫失敗率為243％61／251。通過單因素分析比較，對于出生時HBSAG嬰兒，出生時HBVDNA陽性宮內(nèi)感染率明顯高于出生時HBVDNA陰性的嬰兒。發(fā)生宮內(nèi)感染嬰兒出生時HBSAG、HBEAG和HBVDNA水平均相對高于未發(fā)生宮內(nèi)感染嬰兒，在1月齡時HBSAG、HBEAG及HBVDNA水平明顯高于出生時P，6LOGL0CP／ML母親發(fā)生宮內(nèi)感染。產(chǎn)前出血，羊水污染，羊水過少是宮內(nèi)感染的危險因素，母親分娩前高載量HBVDNA是宮內(nèi)感染的獨立危險因素。2出生時血清HBSAG的嬰兒聯(lián)合免疫失敗率為243％，出生時HBSAGRHBVDNA陽性，出生時相對高HBSAG、HBEAG、HBVDNA水平和1月齡時高HBSAG、HBEAG、HBVDNA水平，低HBSAB水平是預測聯(lián)合免疫失敗的危險指標。關(guān)鍵詞肝炎病毒，乙型；宮內(nèi)感染；疾病傳播，垂直；聯(lián)合免疫失敗

簡介：目的評估不同濃度目安眼膏對實驗性家兔單純皰疹性角膜炎的療效。方法將實驗性單純皰疹性角膜炎家兔分為4組，觀察組分別用Ⅰ號眼膏5％目安眼膏、Ⅱ號眼膏1O％目安眼膏、對照組用Ⅳ號眼膏3％無環(huán)鳥苷、Ⅴ眼膏基質(zhì)，觀察角膜病變并評分，同時進行兔結(jié)膜囊淚液膜病毒分離并計算病毒滴度。結(jié)果5％目安眼膏在治療過程中角膜潰瘍范圍較3％ACV眼膏對照組明顯縮小，病毒滴度高峰時平均病毒滴度也較低，均有顯著性差異，而10％目安眼膏與3％ACV比較統(tǒng)計學上無顯著性差異。結(jié)論5％和10％目安眼膏對治療實驗性家兔單純皰疹性角膜炎有明顯療效，且5％目安眼膏療效優(yōu)于3％無環(huán)鳥苷眼膏，1O％目安眼膏療效與3％無環(huán)鳥苷眼膏相同。

簡介：目的采用分子流行病學的方法，通過漢坦病毒核酸RTPCR分型及部分擴增片段的序列分析，研究河南省不同地區(qū)嚙齒類動物攜帶腎綜合征出血熱病毒狀況和病毒型別，了解其基因型的分布、變異、新型別存在與否，并對其系統(tǒng)發(fā)生及進化關(guān)系加以分系，為腎綜合征出血熱防治研究提供科學依據(jù)。方法籠捕法捕鼠，計算鼠密度，確定鼠種構(gòu)成。用直接免疫熒光法檢測動物肺組織切片，應用漢坦病毒型特異性引物以RTPCR方法對抗原檢測陽性的鼠肺標本擴增M和S基因片段上的特異核苷酸序列并測序，將擴增片段的核苷酸序列與已知病毒序列進行比較，用PHYLIP軟件對得到的序列繪制系統(tǒng)發(fā)生樹，了解其進化關(guān)系，以明確基因亞型及其地理分布情況。結(jié)果在河南省不同生境的7個縣市區(qū)中共布鼠籠4720個，捕獲嚙齒類動物695只，褐家鼠為優(yōu)勢鼠種，占3353％。其次為黃胸鼠，占1841％。應用直接免疫熒光法檢測全部鼠肺，其中陽性肺組織切片95份，陽性率為1367％。陽性切片中，褐家鼠和倉鼠分別占470％和2632％。陽性標本并用RTPCR反應擴增并電泳檢測。對3份M片段、S片段均擴增陽性標本進行序列測定，并對其核苷酸序列進行分析顯示，均為漢城型SEO漢坦病毒，與漢坦病毒R22株、L99株、HB55株、HB86株、SR11株分別屬相同亞型。同一地區(qū)的漢坦病毒其核苷酸序列同源性較為接近，表明不同亞型間有著明顯的地理聚集現(xiàn)象。在研究中無新的型別出現(xiàn)。結(jié)論河南省不同地區(qū)出血熱病毒的主要宿主動物是褐家鼠，不同宿主動物攜帶的漢坦病毒之間的核苷酸序列同源性較高，但也存在一定的差異。這種差異形成的原因有待進一步研究。

簡介：分類號分類號R749R749密級一般密級一般ＵＤＣＵＤＣ6168961689編號編號20092121762009212176廣州醫(yī)學院碩士學位論文多個多個GABAAGABAA受體亞基基因與雙相障礙受體亞基基因與雙相障礙I型及其認知功能的關(guān)聯(lián)研究及其認知功能的關(guān)聯(lián)研究研究生研究生關(guān)力杰關(guān)力杰導師師曹莉萍曹莉萍教授教授申請學位級別申請學位級別醫(yī)學碩士醫(yī)學碩士年級二零零九級二零零九級學科專業(yè)精神病精神衛(wèi)生學精神病精神衛(wèi)生學研究方研究方向生物精神病學生物精神病學論文提交日期論文提交日期20122012年5月論文答辯日期論文答辯日期20122012年5月學位類學位類型醫(yī)學學術(shù)學位醫(yī)學學術(shù)學位學位授予單位學位授予單位廣州醫(yī)學院廣州醫(yī)學院答辯委員會主席答辯委員會主席評議評議人20122012年5月目錄主要縮略詞表主要縮略詞表1中文摘要中文摘要2英文摘要英文摘要6前言1010材料與方法材料與方法1414結(jié)果2323討論3434結(jié)論4242參考文獻參考文獻4343綜述4646致謝5353原創(chuàng)性聲明原創(chuàng)性聲明5454知識產(chǎn)權(quán)權(quán)屬聲明知識產(chǎn)權(quán)權(quán)屬聲明5454學問論文使用授權(quán)說明學問論文使用授權(quán)說明5454

簡介：四川大學博士學位論文包載反義RNA重組腺病毒微球的制備及逆轉(zhuǎn)肝細胞癌MRP的研究姓名余少鴻申請學位級別博士專業(yè)外科學（普外）指導教師嚴律南20040422包載反義RNA重組腺病毒微球的制備及逆轉(zhuǎn)肝細胞癌MRP的研究研究生余少鴻導師嚴律南摘要目的構(gòu)建攜帶反義多藥耐藥相關(guān)蛋白NAP基因的重組腺病毒微球并轉(zhuǎn)染人肝癌耐藥細胞株，并進行肝動脈栓塞治療，了解包載反義RNA重組腺病毒微球逆轉(zhuǎn)肝細胞癌MRP的治療效果，為高分子化學與基因治療的結(jié)合提供臨床應用的理論基礎。方法采用可降解的生物材料聚乳酸一聚乙烯醇PELA包被攜帶反義MRP基因的重組腺病毒制成微球，體外測定微球的粒徑、載病毒量、包封率及釋放規(guī)律，并用其轉(zhuǎn)染人肝癌耐藥細胞株HEPG2/ADM,48H及120H后檢測轉(zhuǎn)染細胞熒光強度。MTT法檢測耐藥細胞的阿霉素半數(shù)致死量ICSO流式細胞儀檢測細胞內(nèi)紅色熒光強度，以熒光指數(shù)FL代表DNR濃度以0ACTIN為內(nèi)參照，以RTPCR法觀察轉(zhuǎn)染48H及120H后耐藥細胞MRPMRNA的表達量高低，比較MRP的逆轉(zhuǎn)情況及反義基因表達的特異性及作用的時效關(guān)系。設不做任何處理組，生理鹽水組，空白微球組，攜帶反義MRP的重組腺病毒組為對照，觀察經(jīng)肝動脈注射RADV微球的靶向性效果動態(tài)測定RADV微球在肝癌組織及癌旁組織，腎肺組織內(nèi)的分布，觀測腫瘤體積大小、腫瘤生長率及平均生存時間。結(jié)果成功地構(gòu)建了攜帶反義MRP基因的重組腺病毒微球，直徑約

簡介：ACOGNITIVESTUDYONENGLISHAFFECTIVE●●TNLNESELEARNERSATHESISSUBMITTEDINPARTIALFULFILLMENTOFTHEREQUIREMENTSFORTHEDEGREEOFMASTEROFARTSINSCH001OFFOREIGNLANGUAGESANDCULTURESOFNANJINGNORMALUNIVERSITYBYYINZEJINUNDERTHESUPERVISION0FPROFNICHUANBINNANJINGNORMALUNIVERSITYNANJING，CHINAMAY，2014摘要關(guān)于情緒和記憶之間的關(guān)系，在語言學、心理學、認知科學等相關(guān)領(lǐng)域已有大量研究佐證。其中，關(guān)于情感性詞匯記憶與檢索的研究，已取得了令人矚目的進展。情緒性詞匯意指詞匯中包含了情感因素的詞匯。與“高興”，“生氣”，“傷心”等詞面上即刻表達情緒的詞匯不同，它們在詞義中隱含了情感狀態(tài)，如“圣誕節(jié)”、“巧克力”、“考試”等。在已有的研究中，大都基于被試對母語情緒性詞匯的判斷開展研究，而對二語習得者二語情緒性詞匯判斷的研究，近幾年才開始出現(xiàn)。盡管有相關(guān)研究證明二語習得者對習得語中的情緒性詞匯的認知與記憶，與其母語中的情緒性詞匯表現(xiàn)出了相同的認知和記憶趨勢，但是，在國外針對母語是漢語，二語是英語的習得者，相應的研究并不多見。在國內(nèi)，已有的研究僅也僅局限于母語為漢語的被試對情緒性詞匯的認知與記憶。因此，本論文基于已有的理論研究框架，擬探討母語為漢語，二語為英語的習得者對英語情感性詞匯的認知與記憶。具體講，本文將開展研究如下三個問題1母語為漢語，二語為英語的習得者對英語情緒性詞匯的判斷與母語為英語的使用者是否一致2如果研究問題一成立，母語為漢語，二語為英語的習得者對英語情緒性詞匯的記憶與喚醒是否先于母語3母語為漢語，二語為英語的習得者對英語情緒性詞匯的記憶與喚醒在短時記憶和長時記憶中是否有差異針對以上三個研究問題，本文采用問卷調(diào)查與記憶判斷的研究范式，以江蘇某高中的160名學生己學完牛津英語9B為被試，進行了數(shù)據(jù)的采集，并對采集到的數(shù)據(jù)應用SPSS進行了詳細的數(shù)據(jù)分析。其結(jié)果表明母語為漢語，二語為英語的習得者對英語情緒性詞匯的判斷與母語為英語的使用者一致；他們對英語情緒性詞匯的儲存與提取，明顯優(yōu)先于中性詞匯這種記憶的優(yōu)先性同時存在與長BTIG憶與短時記憶中。中國存在著數(shù)量非常龐大的英語學習者以及英語教育工作者，本文開展的的研究，將對教材編寫、提高英語學習效率等提供極有價值的參考。關(guān)鍵詞情感性詞匯；二語；情感判斷；記憶；喚醒度

簡介：華中科技大學博士學位論文肝癌病毒抗原表達與相關(guān)因素實驗研究姓名史光軍申請學位級別博士專業(yè)外科學指導教師陳孝平20060401華中科技大學同濟醫(yī)學院博十畢業(yè)論文基因水平來認識，似乎可認為肝纖維化是一種繼發(fā)性基因調(diào)控失衡肝病。IⅡ型前膠原作為M型膠原的前體主要在活化的肝星狀細胞內(nèi)被合成和釋放，在細胞外其N端與C端肽同時被肽內(nèi)切酶剪切下來，被降解的N端肽即為PⅡINP。由于PIILNP和IIL型膠原以等摩爾形成并進入血循環(huán)，故血清PIIINP水平可反映III型膠原的合成情況，且與病理改變有較好的平行。HA主要有肝內(nèi)皮細胞攝取分解，少量小分子由腎小球濾過。血清HA升高主要是由于肝臟內(nèi)皮細胞攝取與降解HA的功能下降，當肝纖維化或肝硬變是造成肝損害，間接地影響內(nèi)皮細胞功能所致。Ⅳ一C是基膜網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的主要組成部分，在細胞內(nèi)合成后直接以前膠原形式參與細胞外間質(zhì)的構(gòu)成。血清ⅣC被認為反映膠原的合成，與纖維化程度成正相關(guān)?？梢宰鳛闄z查肝纖維化的進展指標。LN是細胞外間質(zhì)中的一種非膠原性結(jié)構(gòu)糖蛋白，是基底膜的一種主要成分。LN水平能反映肝臟的損害和肝組織病變的活動進程。對預示肝纖維化的發(fā)生和肝硬化的診斷具有重要價值。人體的免疫狀態(tài)和腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，在抗腫瘤的免疫反應中，淋巴細胞具有極其重要的作用。T淋巴細胞由2個主要亞群組成，即CD4細胞和CD8細胞，前者稱輔助性或誘導性T淋巴細胞，具有輔助和誘導靜止細胞活化功能，對防御腫瘤有重要意義；后者稱為抑制性或細胞毒性T淋巴細胞，具有負調(diào)節(jié)效應，能抑制B細胞產(chǎn)生抗體。CD4細胞和CD8細胞之間相互作用和制約對調(diào)節(jié)細胞免疫反應和維持免疫平衡有重要作用。當機體CD4細胞和CD8細胞發(fā)生變化時，可導致機體免疫功能紊亂，從而削弱了機體抗腫瘤的能力。NK是一種非特異性免疫活性細胞，無需抗原的事先致敏，具有非抗體依賴性溶細胞毒性，也是構(gòu)成細胞免疫系統(tǒng)的主要成分。對肝癌患者進行T細胞亞群和NK細胞活性的測定，可基本反映機體的細胞免疫功能，對于判斷預后具有重要參考價值。甲胎蛋白AFP是肝癌發(fā)生、發(fā)展過程中表達的蛋白質(zhì)，被認為是標志性蛋白而用于肝癌的早期診斷。原發(fā)性肝癌與HBV、HCV感染的相關(guān)性已得到國內(nèi)外學者的一致認同，且己證實HBV、HCV與原發(fā)性肝癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。目前國內(nèi)外的研究多局限于肝癌組織和血清學各自的病毒表達，而對肝癌組織本身HBV、HCV感染背景及其與肝組織活動指數(shù)、肝組織纖維化分期、血清肝纖維化標志物等臨床及2

簡介：背景血管內(nèi)皮生長因子VULARENDOTHELIALGROWTHFACTOTVEGF也稱血管調(diào)理素VUTOTROPIN和血管通透因子VULARPERMEALILITYFACTVPF是FERRARA等在1989年從牛垂體濾泡星狀細胞的條件培養(yǎng)基中純化出來的一種具有肝素結(jié)合活性的生長因子是在胚胎發(fā)生和創(chuàng)傷愈合過程中啟動血管形成的一個高度特異性的有絲分裂原能特異性地作用于血管內(nèi)皮細胞促進血管內(nèi)皮細胞增殖1加速新生血管形成并增加血管通透性2。促進內(nèi)皮細胞間質(zhì)的膠原酶表達促進血漿纖維蛋白原的外滲導致纖維蛋白原的沉積。VEGF已應用于治療缺血性疾病如修改人體神經(jīng)干細胞基因充分表達VEGF治療大腦內(nèi)出血中風3并且移植脂肪源性干細胞促進VEGF合成促進腦缺血疾病的血管再通4。VEGF在臨床的應用有著更廣闊的前景。目的1構(gòu)建攜帶VEGF基因ADEASY復制缺陷型重組腺病毒載體系統(tǒng)。2大鼠骨髓間質(zhì)干細胞的培養(yǎng)。3觀察RADVEGF轉(zhuǎn)染大鼠骨髓基質(zhì)細胞BMSCS后VEGF的表達情況。方法1從PCR21VEGF質(zhì)粒中克隆出VEGFA基因的編碼序列。2VEGFA基因插入腺病毒系統(tǒng)的穿梭載體PADTRACKCMV中。3在含有腺病毒骨架載體PADEASY1的大腸桿菌BJ5183中進行同源重組獲得重組子PADEASY1VEGF。4鑒定PADEASY1VEGF將PADEASY1VEGF轉(zhuǎn)染人胚腎細胞AD293A細胞獲得含VEGF基因的重組腺病毒RADVEGF熒光顯微鏡觀測綠色熒光蛋白GFP的表達。5反復感染HEK293A細胞擴增腺病毒50％組織培養(yǎng)感染量法TCID50檢測病毒滴度。6體外培養(yǎng)大鼠骨髓間質(zhì)干細胞。7RADVEGF轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)細胞轉(zhuǎn)染后在熒光顯微鏡下觀察并采用ELISA法檢測VEGF的表達水平。結(jié)果1經(jīng)酶切鑒定基因測序及綠色熒光觀察證實成功構(gòu)建出含有VEGF基因的腺病毒載體RADVEGF。2擴增得到1010PFU／ML高滴度重組腺病毒。3RADVEGFA轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)細胞后ELISA檢測發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染組上清液中VEGF蛋白分泌量明顯高于對照組P結(jié)論成功構(gòu)建含有VEGF基因的腺病毒載體RADVEGFRADVEGF轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)細胞能夠表達并分泌VEGF為缺血性腦血管疾病的基因治療提供基礎。

簡介：目的了解公共場所從業(yè)人員吸煙行為的現(xiàn)狀，探討對這類人群控煙干預的方法。通過對公共場所經(jīng)營者進行健康教育，提高他們控煙知識水平和參與控煙意識，便于室內(nèi)公共場所將全面禁煙工作的開展。方法采取分層隨機抽樣方法，獲得河西區(qū)250家室內(nèi)公共場所，對其從業(yè)人員進行單純隨機抽樣進行問卷調(diào)查。問卷包括一般情況問卷、吸煙情況調(diào)查、家庭關(guān)懷度指數(shù)調(diào)查表、壓力知覺量表、尼古丁依賴量表、抑郁自評量表等6個量表。對經(jīng)營者進行健康教育，使用省級人群二手煙暴露水平調(diào)查表對經(jīng)營者進行培訓前后各1次問卷調(diào)查，并對前后吸煙危害知曉率和態(tài)度等變化進行比較。結(jié)果調(diào)查總?cè)藬?shù)為1209人，吸煙人數(shù)為369人，現(xiàn)在吸煙率為305％，其中男性現(xiàn)在吸煙率為504％，女性現(xiàn)在吸煙率為33％；戒煙率為26％，其中男性戒煙率17％，女性戒煙率190％。吸煙者有戒煙意愿者占187％，其中182％男性吸煙者有戒煙意愿，294％女性吸煙者有戒煙意愿。吸煙者與非吸煙者在性別、學歷、在工作場所是否有人吸煙和家里是否有人吸煙、壓力知覺總得分、抑郁自評得分、家庭功能評級、對“公共場所禁止吸煙的規(guī)定”態(tài)度和對“開展吸煙與健康的宣傳教育活動”態(tài)度問題的差異有統(tǒng)計學意義P005。有無戒煙意愿的吸煙者在平均開始吸煙年齡、連續(xù)吸煙年數(shù)、目吸煙數(shù)量、尼古丁依賴程度、在是否擔心吸煙影響生活質(zhì)量、影響健康、是否認為吸煙與社交有關(guān)的差異有統(tǒng)計學意義P005，公共場所經(jīng)營者對吸煙危害一般常識有一定了解，對二手煙的認知度較高，通過3周的控煙干預，比較干預前后，對低焦油含量卷煙的危害比一般卷煙小的錯誤認識等問題上知曉率有明顯的提高P005。但通過對公共場所控煙制度的建立和禁煙標示的張貼等問題的調(diào)查，近376％的單位未建立有效的禁煙制度，禁煙標示張貼率為872％，但對于吸煙者在公共場所吸煙的行為，僅544％的單位稱會上前勸阻。結(jié)論公共場所從業(yè)人員吸煙現(xiàn)況不容樂觀，應重視這類人群，對公共場所經(jīng)營者進行控煙健康教育有一定干預效果。

簡介：汕頭大學醫(yī)學院碩士學位論文I碩士學位論文姓名封金花學號10920122所在學院汕頭大學醫(yī)學院導師姓名林廣裕教授專業(yè)兒科學入學日期2009年9月答辯日期2012年5月題目英文英文題目題目DETECTIONCLINICALACTERIZATIONOFHUMANRHINOVIRUSINHOSPITALIZEDCHILDRENWITHACUTERESPIRATYTRACTINFECTIONINYUEDONGAREA粵東地區(qū)住院兒童急性呼吸道感染中鼻病毒的檢出及臨床特征研究汕頭大學醫(yī)學院碩士學位論文III摘要目的了解20082010年粵東地區(qū)急性呼吸道感染住院兒童人鼻病毒（HRV）的檢出情況、流行規(guī)律和感染患兒的臨床特點。材料與方法材料收集2008年10月至2010年9月廣東省汕頭大學醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院兒科急性呼吸道感染1335例住院兒童咽拭子進行病毒學檢測，并記錄其年齡、性別、癥狀、體征等臨床資料以供分析研究。方法1應用PCR或RTPCR技術(shù)進行HRV、呼吸道合胞病毒RSV和其它8種呼吸道常見病毒（流感病毒A，B型、副流感病毒1，3型、人偏肺病毒、人博卡病毒、腺病毒和WU多瘤病毒）篩查。2對HRV陽性病例的臨床資料進行分析，并與RSV陽性病例的臨床資料進行分析比較。結(jié)果1、1335例呼吸道感染住院患兒的咽拭子標本中檢測出HRV陽性124例（93）。陽性率最高的是IVA335例（251），其余的依次遞減RSV202例（151），HBOV110例（82），PIV385例（64），PIV160例（45），WUPYV46例（34），ADV44例（33），HMPV43例（32），IVB19例（14）。2、HRV流行的季節(jié)各年并不相同，2009年檢出高峰夏季，2010年在秋季。24個月，60月，84月，47例（35），≥84月，各年齡組均易感染HRV。3、單純HRV感染和混合其它病毒感染的患兒臨床癥狀、體征、胸片、白細胞計數(shù)（WBC）、

簡介：目的通過體外培養(yǎng)大鼠心肌細胞，建立柯薩奇病毒體外感染心肌細胞模型，探討益心康對感染CVB3病毒心肌細胞的保護及對病毒的抑制作用，為該藥的進一步研究及臨床應用提供理論依據(jù)。方法1、心肌細胞原代培養(yǎng)體外原代培養(yǎng)3天的SD大鼠心肌細胞。2、HELA細胞的培養(yǎng)。3、制備病毒擴增CVB3病毒的毒力，測定CVB3病毒的毒力TCID50。4、制備益心康提取物。5、測定益心康提取物及利巴韋林注射液對心肌細胞的最大無毒劑量TCID0。6、藥物的干預取單層生長狀態(tài)良好的乳鼠心肌細胞，分成4組①細胞對照組②病毒對照組③益心康組④利巴韋林組。培養(yǎng)24H、48H在倒置顯微鏡下觀察細胞病變CPE，待病毒對照組CPE出現(xiàn)100％（）時，停止培養(yǎng)。7、療效指標的檢測1倒置顯微鏡下觀察各組24小時、48小時心肌細胞的形態(tài)學變化及CPE情況。2MTT法測定48小時各組心肌細胞存活率。3ELISA法測定48小時各組CKMB及CTNI，比較益心康及利巴韋林對心肌細胞的保護作用。4RTPCR法測定各組柯薩奇病毒MRNA的含量，比較益心康及利巴韋林對柯薩奇病毒復制的抑制作用。8、統(tǒng)計學處理采用SPSS160統(tǒng)計軟件分析，數(shù)據(jù)處理用X±SD表示，各組均數(shù)比較采用方差分析及兩兩比較，兩組間比較用T檢驗，P＜005為差異有統(tǒng)計學意義。實驗結(jié)果1、形態(tài)學觀察觀察各組心肌細胞24小時、48小時的形態(tài)學變化和細胞病變CPE。正常對照組24小時、48小時心肌細胞貼壁生長，細胞生長旺盛，向周圍伸出放射狀突起，心肌細胞呈同步搏動，節(jié)律規(guī)整，搏動有力，6080次MIN；病毒對照組心肌細胞，在接種病毒24小時后，細胞仍搏動但速度較慢，節(jié)律欠規(guī)整，開始出現(xiàn)細胞病變。接種病毒48小時后，可見細胞團縮、破碎等細胞病變，基本停止搏動；益心康組、利巴韋林組與病毒對照組比較，病變明顯減輕，益心康組細胞病變輕于利巴韋林組。2、用MTT法測定各組細胞存活率結(jié)果顯示正常組、益心康組、利巴韋林組細胞存活率均明顯高于病毒對照組；益心康組細胞存活率高于利巴韋林組。3、ELISA法測定各組CKMB及CTNI的結(jié)果顯示正常細胞組、益心康組、利巴韋林組細胞上清液CKMB、CTNI均明顯低于病毒對照組，益心康組CKMB、CTNI低于利巴韋林組。4、應用RTPCR法測定各組心肌細胞MRNA的含量顯示正常細胞組未檢測到CVB3病毒，而益心康組和利巴韋林組在感染CVB3病毒48小時后CVB3病毒含量均低于病毒對照組；病毒對照組與益心康組和利巴韋林組比較，有顯著性差異，益心康組心肌細胞病毒含量略低于利巴韋林組，益心康和利巴韋林比較無顯著性差異。結(jié)論1、益心康具有保護心肌細胞，減輕心肌細胞病變的作用。2、益心康具有提高心肌細胞存活率的作用，并且該作用優(yōu)于利巴韋林。3、益心康能降低心肌細胞CKMB、CTNI的表達，具有減輕心肌損傷的作用，并且該作用優(yōu)于利巴韋林。4、益心康能降低CVB3病毒NRNA的表達，具有抑制CVB3病毒復制的作用，該作用與利巴韋林相當。