簡介：福建醫(yī)科大學碩士學位論文GAP43和紅色熒光蛋白融合基因重組腺相關病毒載體的構建及表達姓名藍丹鋒申請學位級別碩士專業(yè)眼科學指導教師唐寶豐朱益華20060401福建醫(yī)科大學碩士學位論文2PAAVGAP43RFP載體的構建將目的基因RFP和載體PAAVGAP43一EGFP分別用SALI和BGLII進行酶切，回收后行連接反應，連接產物轉化ECOLIDH5A菌落PCR篩選獲得陽性重組體SALI和BGLII雙酶切分析及DNA測序結果證明插入片斷的序列及開放讀碼框完全正確。3GAP43RFP融合蛋白在293細胞的表達將PAAVGAP43一RFP和PAAVRC、PHELPER質粒共轉染AAV293細胞，24H后熒光顯微鏡下即可見紅色熒光布滿整個細胞核，48H后熒光增強，少部分布滿整個細胞；未轉染DNA組則未見紅色熒光；PAAVEGFP轉染組見綠色熒光布滿整個細胞。GAP43一RFP融合蛋白在AAV293細胞中成功表達。結論本實驗成功構建了以GAP43為目的基因、以RFP為報告基因的腺相關病毒表達載體，該載體能在哺乳動物細胞中表達，為進一步通過基因治療方法研究GAP43對視神經損傷修復的影響及紅色熒光蛋白作為生物標記分子來研究GAP43的表達打下基礎。關鍵詞生長相關蛋白43紅色熒光蛋白基因克隆腺相關病毒載體

簡介：點擊查看更多兒童閱讀相關認知能力的發(fā)展趨勢及其影響因素研究.pdf精彩內容。

簡介：碩士學位論文論文題目非癡呆型血管性認知障礙患者MMSE與MOCA評分比較及其與C反應蛋白、葉酸、維生素B12的相關性研究研究生姓名李海龍指導教師姓名李文專業(yè)名稱神經病學研究方向腦血管病論文提交日期2013年5月非癡呆型血管性認知障礙患者MMSE與MOCA評分比較及其與C反應蛋白、葉酸、維生素B12的相關性研究中文摘要I非癡呆型血管性認知障礙患者MMSE與MOCA評分比較及其與C反應蛋白、葉酸、維生素B12的相關性研究中文摘要背景背景血管性認知障礙VULARCOGNITIVEIMPAIRMENTVCI是指由腦血管病或腦血管病的危險因素引起的從輕度認知障礙到癡呆的一大類綜合征，包括無癡呆型血管性認知障礙VULARCOGNITIVEIMPAIRMENTNODEMENTIAVCIND、血管性癡呆VULARDEMENTIA，VD和混合性癡呆MIXEDDEMENTIA，MD。VCI是老年人慢性進展性認知損害最常見的類型，VCI中未達到癡呆診斷標準者被定義為VCIND。VCIND患者的認知功能損害是局灶性的或記憶相對保留，不足以引起嚴重的功能障礙，隨時間推移和病情發(fā)展，大多數VCIND將發(fā)展為血管性癡呆VD。由于在VCIND階段，有多種可干預的危險因素存在，早期發(fā)現并在日常生活受到影響前進行干預，可避免發(fā)展到不可逆的VD晚期階段。簡易精神狀態(tài)量表（MINIMENTA1STATEEXAMINATION，MMSE是一種被臨床醫(yī)生使用最廣泛的認知功能障礙篩查量表，但很多已達到VCI診斷標準的患者，其MMSE得分仍在正常范圍。MMSE敏感性較差，漏診率高。目前MOCA在國內多是用于篩查、評估有輕度認知功能障礙MCI的患者，有較高的敏感性，但MOCA在VCIND患者中的應用研究較少。本研究主要探討兩種評估量表的差別及優(yōu)缺點，以選擇敏感度和特異度更高的神經心理學評估量表作為快速篩查有非癡呆型血管性認知功能障礙患者的工具。目前認為，VCI發(fā)病可能是在多種機制的共同作用下引起的，炎性因素在其中扮演著重要的角色。一些炎性因子在腦脊液和血液中的水平變化與VCI可能有一定的相關性。C反應蛋白CRP為炎癥時的急性時相蛋白，是臨床最顯著的炎癥標記物。因此，檢測相關炎性標志物并進一步了解其在認知損害中的作用，有助于VCI患者的早期防治。近年來的研究發(fā)現葉酸、VITAMINB12與血管性認知障礙有關。葉酸及VITAMINB12與VCI的關系及其作用國內外文獻報道較少，而且結果、結論不一致。

簡介：隸南女堅臨床醫(yī)學碩士學位論文2型糖尿病患者認知功能及腦白質損害的臨床研究專業(yè)名稱神經病學研究生姓名譚玉導師姓名周紅副教授東南大學學位論文獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學位論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得東南大學或其它教育機構的學位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生虢嚼弘日期加㈨石東南大學學位論文使用授權聲明東南大學、中國科學技術信息研究所、國家圖書館有權保留本人所送交學位論文的復印件和電子文檔，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文。本人電子文檔的內容和紙質論文的內容相一致。除在保密期內的保密論文外，允許論文被查閱和借閱，可以公布包括刊登論文的全部或部分內容。論文的公布包括刊登授權東南大學研究生院辦理。研究生簽名◆P翮繇C妒日期山”PF，7

簡介：北京郵電大學碩士學位論文企業(yè)網絡防病毒體系的設計與實施姓名王廣河申請學位級別碩士專業(yè)軟件工程指導教師羅守山20071220北京郵電大學工程碩士研究生學位論文的現狀，結合實際情況和需求，設計了一套企業(yè)網絡防病毒體系。這個體系可以為信息安全管理提供一個較全面的、方便的、直觀的、準確的病毒監(jiān)控平臺，減輕不斷出現的病毒對網絡和應用帶來的破壞和風險，為企業(yè)的信息化建設提供安全保障。本文主要做了以下工作1對企業(yè)內部病毒類型進行收集分析，確認已經使用的防病毒產品的種類。2對公司總部及屬地分公司的網絡架構、網絡應用和病毒防治情況進行摸底。3對病毒技術進行分析，為防病毒體系的設計提供技術參考。4對防病毒體系管理平臺進行統(tǒng)一規(guī)劃，設計適合的體系方案。5對整個體系進行實施和測試。關鍵詞防病毒體系網關系統(tǒng)測試流量監(jiān)控蜜罐IV

簡介：現已明確持續(xù)性高危型人乳頭瘤病毒HUMANPAPILLOMAVIRUS，HPV感染是宮頸癌發(fā)生的主要誘因，其中由HPV16感染引起的宮頸癌占宮頸癌總數的56％。目前尚無有效的宮頸癌治療性疫苗問世，我國是宮頸癌的高發(fā)區(qū)，因此研制發(fā)針對HPV16的治療性疫苗意義重大。理想的治療性疫苗需要全面活化機體的抗瘤免疫，特別是特異性細胞免疫，因此各種免疫刺激分子在腫瘤及病毒治療性疫苗的研究中倍受重視，特別是在DNA及蛋白疫苗的應用具特別的意義。與活的重組微生物疫苗或滅活疫苗相比，該類疫苗雖然成分單一明確，安全性好，但缺乏刺激產生“危險信號”的能力，活化固有免疫及抗原呈遞細胞ANTIGENPRESENTINGCELLS，APC的能力明顯不足，因此不利于特異性免疫的有效活化。疫苗的安全性和免疫原性是研發(fā)有效疫苗時必須考慮的兩個關鍵性因素，通過引入HSP70免疫佐劑以提高DNA疫苗的免疫原性可望獲得免疫原性增強的腫瘤治療性DNA疫苗，該類疫苗除需考慮常規(guī)DNA疫苗的安全性之外，還需兼顧佐劑分子人體應用后可能存在的潛在危險性。小鼠研究發(fā)現MTHSP70可誘發(fā)機體產生自身免疫性腸炎，進一步研究發(fā)現其原因是在體內產生了HSP70的自發(fā)反應性T淋巴細胞。對人源及細菌來源的HSP70肽復合物疫苗免疫活性的比較研究可為相應的人用疫苗的選擇提供參考依據。本課題組在前期針對HPV16的治療性疫苗的研究工作中，聯合基因切割重排、定點突變及密碼子優(yōu)化等技術構建獲得了消除了轉化活性且免疫原性增強的HPV16E7修飾基因ME7，以ME7為抗原基因的HPV16治療性疫苗極具進一步研發(fā)的價值，為此我們申請了國家發(fā)明專利。為了推動以ME7為基礎的HPV16治療性疫苗的深入研究，本研究擬在本室構建的常規(guī)的PVR1012ME7MTHSP70研究的基礎上，分別構建帶外泌信號肽基因的分支結核桿菌來源的和人來源的HSP70融合ME7抗原基因的DNA疫苗PVR1012SIGME7MTHSP70和PVR1012SIGME7HUHSP70，然后比較分析常規(guī)的PVR1012ME7MTHSP70和帶外泌信號肽基因的PVR1012SIGME7MTHSP70DNA疫苗免疫活性的差異，同時對人和分支結核桿菌兩種不同種屬來源的HSP70肽復合物DNA疫苗PVR1012SIGME7MTHSP70和PVR1012SIGME7HUHSP70的免疫活性進行比較研究。實驗方法及結果如下1PVR1012SIGME7MTHSP70和PVR1012SIGME7HUHSP70的構建以PVR1012ME7重組質粒為模板，將人CD33信號肽基因和ME7基因利用OVERLAPPCR的方法連接在一起，獲得N末端帶信號肽的不含終止密碼子的ME7基因SIGME7’，酶切后將SIGME7基因和MTHSP70基因連接在一起，構建SIGME7MTHSP70融合基因，然后將該融合基因插入PVR1012真核表達質粒，獲得PVR1012SIGME7MTHSP70重組質粒。以含有人HSP70基因的PMSHSP70為模板，利用PCR的方法得到HUHSP70基因，然后將HUHSP70和PVR1012SIGME7MTHSP70上的MTHSP70置換，構建了PVR1012SIGME7HUHSP70，酶切鑒定和DNA測序驗證正確。2重組質粒的表達鑒定堿裂解法和聚乙二醇沉淀法大量提取并純化質粒DNA，脂質體2000介導轉染COS7細胞，48小時后收集裂解液和上清，BCA蛋白定量試劑盒分別對總裂解液和濃縮后的總上清蛋白進行定量，各取110體積處理后的裂解液和上清上樣，檢測轉染細胞裂解液和上清中的融合蛋白表達情況。結果表明PVR1012ME7MTHSP70、PVR1012SIGME7MTHSP70和PVR1012SIGME7HUHSP70的裂解液和上清中均發(fā)現相應融合蛋白的表達，分子量分別是85，87和100KDA。細胞裂解液中的融合蛋白表達水平明顯高于上清中的表達水平，三種融合蛋白在細胞裂解液中的表達水平基本一致，在上清中的表達水平也基本一致。以上結果提示常規(guī)的重組質粒也能在胞外表達，而且和帶外泌信號肽的重組質粒在胞外的表達水平幾乎沒有區(qū)別，三種融合蛋白的表達以細胞內表達為主。3動物免疫及疫苗體外免疫活性的檢測將68周齡雌性C57BL6小鼠隨機分為四組，每組7只，分別用于PVR1012ME7MTHSP70ME7MTHSP70、PVR1012SIGME7MTHSP70SIGME7MTHSP70、PVR1012SIGME7HUHSP70SIGME7HUHSP70和生理鹽水NMALSALINE，NS肌肉免疫。免疫前預先在每只小鼠的雙側股四頭肌內各注射50ΜL布比卡因，一天后在相同部位注射50ΜG的質粒DNA，7天后加強免疫1次，最后一次免疫后的第10天，分離小鼠脾細胞，體外經E749572ΜGML和E730_67肽2ΜGML分別刺激后，ELISPOT實驗檢測分泌IFNΓ的E7特異性CD8T細胞數目；流式細胞術實驗檢測E7特異性CD8T細胞、CD4IFNΓTH1細胞和CD4IL4TH2細胞的數目；收集小鼠血清，ELISA法檢測免疫血清中E7特異性抗體水平。ELISPOT實驗中ME7MTHSP70，SIGME7MTHSP70，SIGME7HUHSP70組和NS對照組中5105個小鼠脾細胞中平均分泌IFNΓ的CD8T細胞數目分別為503、100、651和5。流式細胞術實驗中四個組CD8IFNΓ雙陽性的細胞數目分別是497、389、686和280，CD4IFNΓ雙陽性和CD4IL4雙陽性細胞數目分別是385、386、389和383以及165、168、158和150。ELISA實驗中120滴度時的OD490NM值分別為050±008、056±013、062±015、0，45±002。以上結果表明，常規(guī)的ME7MTHSP70比帶外泌信號肽的SIGME7MTHSP70具有更高的CD8T細胞反應，人源性SIGME7HUHSP70比結核桿菌源性SIGME7MTHSP70具有更高的CD8T細胞反應，三組質粒DNA疫苗幾乎沒有CD4IFNΓTH1細胞和CD4IL4TH2細胞介導的CD4T細胞反應，三組質粒DNA疫苗也都沒有顯著提高E7特異性的抗體水平。4疫苗體內抗瘤活性的檢測腫瘤預防實驗中，預先按上述方法進行DNA疫苗肌肉免疫，最后一次免疫后的第7天接種75104個HPV16E6E7的陽性TC1瘤細胞，接種后的第12天時，SIGMNE7MTHSP70組的1只小鼠形成移植瘤，其它兩種質粒組未形成移植瘤，NS對照組的7只小鼠形成移植瘤；在接種后的55天時，ME7MTHSP70組，SIGME7MTHSP70組和SIGME7HUHSP70組小鼠的未成瘤率分別是100％，86％和100％。腫瘤治療實驗中，預先接種75104個TC1細胞，3天后按上述方法進行DNA疫苗免疫。在TC1瘤細胞接種后的14天，SIGME7MTHSP70組的1只小鼠形成移植瘤，其它兩種質粒組未見移植瘤形成，NS對照組的7只小鼠全部形成移植瘤；接種后的20天，ME7MTHSP70組的1只小鼠和SIGME7MTHSP70組的另1只小鼠形成移植瘤，SIGME7HUHSP70組的小鼠仍未見移植瘤形成；接種后的60天，ME7MTHSP70組，SIGME7MTHSP70組和SIGME7HUHSP70組小鼠的未成瘤率分別是86％，71％和100％。以上結果表明常規(guī)的ME7MTHSP70比帶外泌信號肽的SIGME7MTHSP70具有更高的抗腫瘤活性，人源性的SIGME7HUHSP70比結核桿菌源性的SIGME7MTHSP70展現了更高的抗腫瘤活性?？傊?，以上結果表明，常規(guī)的ME7MTHSP70DNA疫苗與帶外泌信號肽的HSP70相關HPV16ME7DNA疫苗相比可顯著提高E7特異性CD8T細胞反應和抗腫瘤活性；與結核桿菌源性HSP70相比，人源性HSP70在HPV16ME7DNA疫苗中具有更強的免疫佐劑活性；上述各種形式的ME7HSP70DNA疫苗的抗瘤活性可能主要是由活化E7特異的CD8T細胞所誘發(fā)的。本研究提示常規(guī)的人源性HSP70融合HPV16ME7基因的DNA疫苗可望產生更高效的特異性抗腫瘤免疫，該研究為HPV16感染相關的宮頸癌以及其它已知腫瘤特異或相關抗原的腫瘤治療性DNA疫苗實驗研究打下了基礎。

簡介：橫跨半個多世紀認知失調理論激發(fā)了大量的研究得到了極大的豐富和發(fā)展。理論研究從自我層面擴展到了較基礎的心理加工層面但是到目前為止關于認知矛盾如何喚起失調、又是什么驅使個體緩解矛盾和失調等問題仍然存在爭議神經機制的研究為認知失調心理機制提供了新的證據。首先失調喚起與失調減緩的神經過程是相互分離的表明兩者的內在機制是獨立運作的可分別著重進行研究。其次失調減緩階段的神經回路與情緒調節(jié)的神經回路重疊。再加上失調喚起階段情緒反應相關腦區(qū)的活動增強證明了負性情緒狀態(tài)的存在。據此一種可能的機制是失調減緩涉及情緒調節(jié)過程?？紤]到人在減弱或消除失調感的過程中一般對自己的心理活動狀態(tài)缺乏明確的意識。本研究從內隱情緒調節(jié)的視角對失調減緩的心理機制進行實證研究具體考察情緒調節(jié)內隱態(tài)度和情緒調節(jié)策略對失調減緩的調整機制。研究一改編閾上啟動范式啟動關于情緒調節(jié)的內隱態(tài)度探討其對失調減緩的影響。結果發(fā)現啟動情緒調節(jié)內隱態(tài)度的個體對選中項和拒絕項的態(tài)度均發(fā)生了改變對選中項的評價明顯提高對拒絕項的評價明顯降低而啟動情緒表達內隱態(tài)度的個體對選中項和拒絕項的態(tài)度均未發(fā)生改變。結果表明失調減緩受到關于情緒調節(jié)的內隱態(tài)度的影響相對于情緒表達內隱態(tài)度情緒調節(jié)內隱態(tài)度更能促進個體減緩失調。研究二自編問卷啟動情緒調節(jié)策略的使用傾向探討其對失調減緩的影響。結果發(fā)現啟動認知重評策略使用傾向的個體對選中項和拒絕項的態(tài)度均發(fā)生了改變對選中項的評價明顯提高對拒絕項的評價明顯降低啟動表達抑制策略使用傾向的個體僅對選中項的態(tài)度發(fā)生改變評價有所提高而對拒絕項的態(tài)度沒有發(fā)生改變。而且相對于啟動表達抑制策略使用傾向的個體啟動認知重評策略使用傾向的個體對選中項的評價提高得更多。結果表明失調減緩受到情緒調節(jié)策略的影響相對于表達抑制策略認知重評策略更能促進個體減緩失調。

簡介：天津醫(yī)科大學碩士學位論文慢病毒介導SIRNA干擾PTPБ基因促進脊髓損傷后軸突再生的研究姓名馮洪永申請學位級別碩士專業(yè)臨床醫(yī)學；外科學骨外指導教師馮世慶201205天津醫(yī)科大學碩士論文【結論】慢病毒介導的SIRNA干擾PTPO表達能夠明顯促進神經軸突的再生，從而促進脊髓損傷大鼠神經功能的恢復；慢病毒是基因治療的一種安全載體，可在脊髓組織內復制、存活，并不會向全身大量擴散引起相關疾病。關鍵詞PTPO軸突再生SIRNA慢病毒脊髓損傷

簡介：1分類號密級UDC學號416522912075南昌大學碩士研究生學位論文江西省社區(qū)老年人輕度認知功能障礙的江西省社區(qū)老年人輕度認知功能障礙的評估評估和干預和干預研究研究ASSESSMENTINTERVENTIONSTUDYOFMILDCOGNITIVEIMPAIRMENTINTHEELDERLYINCOMMUNITYOFJIANGXIPROVINCE何璐培養(yǎng)單位（院、系）南昌大學第一附屬醫(yī)院指導教師姓名、職稱袁也豐教授申請學位的學科門類臨床醫(yī)學學科專業(yè)名稱精神病與精神衛(wèi)生學論文答辯日期2015年5月答辯委員會主席評閱人2015年5月學位論文獨創(chuàng)性聲明II□公開□保密（向校學位辦申請獲批準為“保密”，年月后公開）摘要目的目的了解江西省社區(qū)老年人輕度認知功能障礙（MILDCOGNITIVEIMPAIRMENTMCI）的患病現況，探討其影響因素，并針對其影響因素制定MCI綜合干預方案，對患有MCI的老年人實施干預，以評價其干預效果。方法方法（1）定量調查采用隨機整群抽樣的方法，對符合納入標準的900名江西省社區(qū)老年人使用蒙特利爾認知評估量表（MONTREALCOGNITIVEASSESSMENTMOCA）、老年抑郁量表GERIATRICDEPRESSIONSCALEGDS、中文版總體衰退量表GLOBALDETERIATESCALEGDS、哈金斯基缺血指數量表HACHINSKIISCHEMIAINDEXSCALEHIS、日常生活能力量表ACTIVITIESOFDAILYLIVINGSCALEADL和自編問卷進行現況調查。（2）綜合干預采用計算機隨機取數法，選取80例確診的社區(qū)MCI老年人為研究對象，將其隨機分為干預組和對照組各40人，對照組接受健康教育，干預組接受健康教育和綜合干預方案。結果結果（1）江西省社區(qū)老年人MCI患病率為1342113842；（2）單因素Χ2分析顯示年齡、受教育程度、原職業(yè)、居住方式、經濟收入、吸煙習慣、飲酒習慣和近半年軀體健康狀況等8個因素均與社區(qū)老年人MCI患病相關；（3）多因素LOGISTIC回歸分析提示高齡、獨居、原從事體力勞動、經濟收入差、有吸煙、飲酒習慣、近半年患有軀體疾病是老年人MCI患病的危險因素；受教育程度高、原從事腦力勞動、經濟收入高是老年人MCI患病的保護因素；（4）實施3個月的MCI綜合干預方案后，兩組老年人的認知功能及日常生活能力均有所改善，但干預組的改善程度明顯優(yōu)于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P005）。結論結論（1）江西省社區(qū)老年人MCI的患病率較高；（2）社區(qū)老年人MCI患病主要受年齡、受教育程度、原職業(yè)、居住方式、經濟收入、吸煙習慣、飲酒習慣和近半年軀體健康狀況等多因素影響；（3）綜合干預方案可以有效改善MCI老年人的認知功能，提高日常生活能力。關鍵詞關鍵詞社區(qū)老年人；輕度認知功能障礙；患病率；影響因素；綜合干預

簡介：慢病毒載體LENTIVIRALVECT是以人類免疫缺陷Ⅰ型病毒HIV1為基礎發(fā)展起來的基因載體。慢病毒載體和一般逆轉錄病毒載體的明顯區(qū)別是對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力，能有效地感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞。該載體能夠通過整合宿主DNA的方式使目的基因長期而穩(wěn)定的表達。此外，慢病毒載體還具有攜帶外源基因片段較大，免疫原性小，安全性高等優(yōu)點，為細胞水平和整體水平的轉基因研究提供了更強有力的工具。細胞免疫在腫瘤免疫中起主要作用。CD8T淋巴細胞識別腫瘤抗原受人類白細胞抗原Ⅰ類分子HLAⅠ的限制。特異性CD8T淋巴細胞的活化必須首先利用T細胞抗原受體識別抗原遞呈細胞或腫瘤細胞表面表達的HLAⅠ類分子遞呈的抗原肽，獲得活化的第一信號，然后通過共刺激分子受體和配體的結合獲得第二信號。腫瘤過繼免疫治療通常采用自體抗原提呈細胞活化T細胞，限制了其在臨床的運用。而人工抗原提呈細胞ARTIFICIALANTIGENPRESENTINGCELL，AAPC具有易培養(yǎng)、活化條件易控制、T細胞活化增殖周期短等優(yōu)點，故近年來對人工抗原提呈細胞的研究日趨活躍。我們在本實驗室原有工作的基礎上，設想構建一個單鏈三聚體SINVIECHAINTRIMER，SCT重組融合基因，將MHCⅠ分子、Β2M和抗原肽的基因片段以適當的接頭LINKER串聯在一起，然后將其克隆進慢病毒載體。利用慢病毒載體將該新型的SCT基因穩(wěn)定轉染本實驗室制備的人工抗原遞呈細胞ARTIFICIALANTIGENPRESENTINGCELLS，AAPCK56241BBLCD86細胞株，使其成為一個既能向抗原特異性CD8T細胞提供共刺激信號即第二信號，又能通過MHC分子同時向CD8細胞提供特異性抗原肽的信號即第一信號的人工抗原遞呈細胞。在本研究中，我們選用的MHCⅠ類分子為HLAA0201，抗原表位為PR1VLQELNVTV。PR1是人類髓系白血病的腫瘤相關抗原蛋白酶3中的一條HLAA0201限制性的、強免疫原性多肽，其誘導的免疫反應具有顯著抗髓系白血病作用。我們首先利用基因工程技術將PR1肽、Β2M及HLAA0201以G4SN柔性LINKER依次串聯，構建PR1HLAA0201SCT融合基因，再克隆至慢病毒載體系統(tǒng)表達質粒中，測序正確后將HIV1來源的慢病毒載體系統(tǒng)三質粒共轉染293T包裝細胞。收獲細胞培養(yǎng)上清，得到具有一次感染能力而無復制能力的缺陷型病毒。包含目的基因的病毒液的病毒滴度為1104TUML。本實驗研究為進一步制備能提供雙信號的人工抗原遞呈細胞奠定了實驗基礎。

簡介：目的1詳細描述江蘇省近三年來腸道病毒性腦炎、腦膜炎爆發(fā)流行的三間分布，并探討徐州市、揚州市腸道病毒性腦炎、腦膜炎爆發(fā)流行的危險因素。為江蘇省今后預防和控制腸道病毒性腦炎、腦膜炎提供流行病學基礎資料2明確江蘇省近三年來腸道病毒性腦炎、腦膜炎的流行型別，探討腸道病毒實驗室檢測方法，為我省腸道病毒性腦炎、腦膜炎的爆發(fā)流行提供早期診斷。研究方法1隨機收集江蘇省徐州市、揚州市10個學校或地區(qū)腸道病毒性腦炎、腦膜炎爆發(fā)流行期間病毒性腦炎、腦膜炎患兒203例為病例組，以同地區(qū)或同學校、近兩月無發(fā)熱且身體健康的406名兒童為對照組，采用流行病學調查表對609名兒童進行流行病學調查，應用單因素和多因素分析方法非條件LOGISTIC及廣義估計方程對調查資料進行統(tǒng)計分析，篩選江蘇省腸道病毒性腦炎、腦膜炎的流行因素。2對臨床診斷為病毒性腦炎、腦膜炎患兒的腦脊液分別用細胞培養(yǎng)法、NESTPCR、實時熒光定量PCR檢測，比較分析三種檢測方法的臨床應用價值。研究結果1經單因素非條件LOGISTIC回歸分析，以Α005初步篩選出與此次病毒性腦炎爆發(fā)有關的流行因素有吃甜瓜、發(fā)病前兩周接觸過患者、鄰居或親戚中有病腦患者、飯前、便后洗手的習慣、紗門窗、室內蚊蟲、室內蒼蠅密度、家庭內衛(wèi)生狀況、家中養(yǎng)有家禽、家畜。2對單因素分析中篩選出的流行因素再作多因素非條件LOGISTIC回歸分析，結果表明吃甜瓜、發(fā)病前兩周接觸過患者、鄰居或親戚中有病腦患者、飯前、便后洗手的習慣、室內蒼蠅密度、家庭內衛(wèi)生狀況進入回歸模型P＜005。3廣義估計方程結果顯示各個地區(qū)之間無明顯差異，吃甜瓜、發(fā)病前兩周接觸過患者、鄰居或親戚中有病腦患者、飯前、便后洗手的習慣、室內蒼蠅密度、家庭內衛(wèi)生狀況有統(tǒng)計學意義P＜005。4實驗室結果我省近三年來的流行型別2001年主要為柯薩奇B5、2002年、2003年主要為埃可30。實時熒光定量PCR的檢出率為4314％44102，特異度為100％，靈敏性為001TCID50；NESTPCR的檢出率為7157％73102，靈敏性為0001TCID50，特異度為100％。結論1江蘇省腸道病毒性腦炎、腦膜炎爆發(fā)最有效的預防和控制措施是減少和病人的密切接觸、注意個人和家庭衛(wèi)生。2江蘇省徐州市2001年腸道病毒性腦炎、腦膜炎爆發(fā)流行以柯薩奇B5型別為主，2002年揚州市、2003年鹽城市以?？?0為主。3實時熒光定量PCR具有快速、特異、可定量檢測等優(yōu)點，可用于疾病爆發(fā)時的快速診斷，但靈敏度仍然不如巢式PCR，有待進一步完善。

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簡介：目的非人靈長類動物在親緣關系上最接近人類，在組織結構、免疫、生理和代謝等方面與人類高度相似。近年來，隨著生命科學的快速發(fā)展，對非人靈長類動物的需求一直在持續(xù)增加。擴大非人靈長類動物種群數量，獲得高質量、純凈、穩(wěn)定的非人靈長類實驗動物已成為當前我國科學研究進一步發(fā)展的迫切要求。雖然建立無特定病原體（SPECIFICPATHOGENFREE，SPF）種群的成本很高，然而一旦建立起SPF級動物核心群，即可為科學研持續(xù)提供高質量的非人靈長類實驗動物。由于非人靈長類動物可能會自然攜帶或感染多種病毒，因此在建立SPF群體的過程中對病毒抗體的監(jiān)測就顯得極其重要，并直接影響建群的成功率。本研究貫穿于江蘇某大型猴場建立猴SPF種群的全過程，重點針對猴獼猴皰疹病毒1型（CERCOPITHECINEHERPESVIRUS1，BV）、猴T細胞趨向性病毒I型（SIMIANTLYMPHOTROPICVIRUS1，STLV1）、猴免疫缺陷病毒SIMIANIMMUNODEFICIENCYVIRUS，SIV和猴逆轉D型病毒SIMIANTYPEDRETROVLRUS，SRV，對該猴場的食蟹猴和恒河猴進行了長期、大規(guī)模的病毒監(jiān)測，在此基礎上探尋合理的病毒監(jiān)測指標和有效監(jiān)測頻率，從而提升種群建立的成功率，進一步促進我國SPF級非人靈長類實驗動物事業(yè)的發(fā)展。方法1采用酶聯免疫吸附法（ENZYMELINKEDIMMUNOSBENTASSAY，ELISA）和斑點免疫檢測法（DOTIMMUNOASSAY，DIA）檢測猴BV、STLV、SIV和SRV四種病毒的血清抗體水平，使用統(tǒng)計軟件SPSS130以FISHER精確概率法進行食蟹猴／恒河猴的幼年猴與成年猴之間、食蟹猴／恒河猴的幼年猴雌雄動物之間、食蟹猴／恒河猴的成年猴雌雄動物之間、食蟹猴和恒河猴的幼年猴之間以及食蟹猴和恒河猴的成年猴之間的病毒陽性率比較和分析；2收集相隔三個月和相隔一個月的病毒血清抗體檢測結果，分析不同時間間隔對病毒血清學監(jiān)測結果的影響，探討病毒有效監(jiān)測頻率；3進行了膠體金法與ELISA和DIA法檢測猴BV、STLV、SRV病毒抗體的效果比較。結果1BV病毒監(jiān)測。對于食蟹猴，雌性幼年猴和成年猴之間、幼年猴雌雄動物之間的病毒陽性率無顯著性差異雄性幼年猴和成年猴的病毒陽性率分別為11％和75，有顯著性差異P0031；成年猴雌雄動物的陽性率分別為22和75，有顯著性差異P0009。對于恒河猴，雄性幼年猴和成年猴之間、幼年猴雌雄動物之間、成年猴雌雄動物之間的病毒陽性率無顯著性差異；雌性幼年猴和成年猴的病毒陽性率分別為05和73，有顯著性差異P0010。對比食蟹猴和恒河猴，兩個品種的雄性幼年猴之間、雌性成年猴之間、雄性成年猴之間的病毒陽性率無顯著性差異，而雌性幼年猴的病毒陽性率分別為73和0，有顯著性差異P0002。2STLV病毒監(jiān)測。對于食蟹猴和恒河猴，雌性幼年猴和成年猴之間、雄性幼年猴和成年猴之間、幼年猴雌雄動物之間、成年猴雌雄動物之間的病毒陽性率無顯著性差異。對比食蟹猴和恒河猴，兩個品種的雌性幼年猴之間、雄性幼年猴之間、雌性成年猴之間、雄性成年猴之間的病毒陽性率無顯著性差異。3SIV病毒監(jiān)測。對于食蟹猴，雌性幼年猴和成年猴之間、雄性幼年猴和成年猴之間、幼年猴雌雄動物之間、成年猴雌雄動物之間的病毒陽性率無顯著性差異。對于恒河猴，雌性幼年猴和成年猴之間、幼年猴雌雄動物之間、成年猴雌雄動物之間的病毒陽性率無顯著性差異；雄性幼年猴和繁殖猴的病毒陽性率分別為07和63，有顯著性差異P0028。對比食蟹猴和恒河猴，兩個品種的雌性幼年猴之間、雄性幼年猴之間、雌性成年猴之間、雄性成年猴之間的病毒陽性率無顯著性差異。4SRV病毒監(jiān)測。對于食蟹猴，雌性幼年猴和繁殖猴之間的病毒陽性率無顯著性差異；雄性幼年猴和成年猴的病毒陽性率無顯著性差異；幼年猴雌雄動物之間、成年猴雌雄動物之間的病毒陽性率無顯著性差異。對于恒河猴，雌性幼年猴和成年猴之間、幼年猴雌雄動物之間、成年猴雌雄動物之間的病毒陽性率無顯著性差異；雄性幼年猴和成年猴的病毒陽性率分別為07和16，有顯著性差異P0028。對比食蟹猴和恒河猴，兩個品種的雌性幼年猴之間、雄性幼年猴之間、雌性成年猴之間、雄性成年猴之間的病毒陽性率無顯著性差異。5病毒有效監(jiān)測頻率。同批食蟹猴相隔三個月檢測，BV、STLV、SIV和SRV轉陽的比例分別為358、055、055和055同批食蟹猴相隔一個月檢測，BV、STLV、SIV和SRV轉陽的比例均為093。6膠體金法與ELISA和DIA法檢測效果對比。對于BV、STLV和SIV，膠體金法與酶聯免疫吸附法的符合率為889、818和100對于SRV，膠體金法與斑點免疫檢測法檢測結果的符合率為773。結論在SPF級食蟹猴和恒河猴種群建立過程中，本研究所采取的飼養(yǎng)管理模式、病毒檢測技術和檢測頻率條件下1食蟹猴和恒河猴的BV、STLV、SIV、SRV病毒感染持續(xù)保持在較低水平；2食蟹猴和恒河猴在繁殖期BV病毒的感染發(fā)生率有隨著年齡的增長而增加的趨勢；3雄性恒河猴的SIV病毒感染率有隨著年齡的增長而增加的趨勢；4本飼養(yǎng)管理體系下，STLV、SIV、SRV三種病毒相隔三個月監(jiān)測一次是可行的，而BV則需要間隔一個月監(jiān)測一次；5與膠體金法相比，酶聯免疫吸附法或斑點免疫檢測法對可疑個體更敏感，可有效減少假陰性出現的機率。

簡介：目的1探討麻醉和手術對老齡大鼠認知功能的影響。2初步探討晚期炎癥因子HMGB1在老齡大鼠發(fā)生術后認知受損中的作用。方法第一部分①2223月齡雌性老齡SD大鼠隨機分為對照組N15、麻醉組（A1、A3、A7麻醉后第1、3、7天，N15組）和手術組（S1、S3、S7手術后1、3、7天，N15組）。麻醉組大鼠3％異氟烷誘導后氣管插管，2％異氟烷維持2小時，麻醉過程監(jiān)測大鼠生命體征及氣體濃度。手術組與麻醉組相同的麻醉條件下行脾臟切除手術，對照組單純吸入空氧混合氣體2小時②造模前MRIS水迷宮定向航行試驗訓練6天，第7天造模，造模后1、3、7天MRIS水迷宮記憶測試試驗測試大鼠空間學習記憶能力，SMARTJUNI軟件跟蹤記錄大鼠游泳的距離、潛伏期及速度。第二部分各項指標檢測每組隨機5個樣本，①行為學測試后取血，提取血清，ELISA檢測血清中HMGB1、TNFΑ、IL1Β的表達。②灌注后取腦組織IGG免疫組化法檢測海馬區(qū)血腦屏障通透性，熒光染色法檢測海馬區(qū)HMGB1表達，尼氏染色觀察海馬區(qū)神經元形態(tài)及數目。③取海馬組織透射電鏡法檢測血腦屏障微觀結構。④取雙側海馬組織液氮凍存，凍存的右側海馬組織RTPCR檢測HMGB1、TNFΑ、IL1Β及受體RAGE的MRNA表達。⑤凍存的左側海馬組織進行WESTERNBLOT檢測HMGB1、TNFΑ、IL1Β及受體RAGE的蛋白表達。SPSS170軟件進行統(tǒng)計學分析。結果第一部分手術創(chuàng)傷導致大鼠認知受損，在手術后1、3天游泳距離（1天73297±15738CM，3天61317±17563CM，P＜0001）及潛伏期（1天4454±663S，3天383±625S，P＜0001）與對照組（距離32236±11688CM，潛伏期247±863S）相比延長，在單獨麻醉后1天上述指標也具有統(tǒng)計學意義（距離55793±18742SP0003，潛伏期3599±770SP0001）。第二部分①手術創(chuàng)傷導致外周血中HMGB1在手術后1天表達上調0204±0023UGL，P0003，術后3天及7天組無統(tǒng)計學差異，TNFΑ、IL1Β在各組之間無顯著差異。②免疫組化結果顯示術后1天血腦屏障通透性增加，電鏡結果顯示術后1天血腦屏障的微觀結構受損，而麻醉組損傷相對較輕。③手術創(chuàng)傷導致海馬組織中HMGB1、TNFΑ、IL1Β及受體RAGE在術后1天及3天表達上調P＜0001，上述指標麻醉后1天也具有統(tǒng)計學意義P＜0001。④手術創(chuàng)傷未導致海馬CA1區(qū)神經元丟失，與對照組相比無統(tǒng)計學差異。結論第一部分①麻醉、手術引起老齡大鼠術后認知功能短期且可逆性受損。②手術創(chuàng)傷引起老齡大鼠認知功能受損程度相對麻醉而言更為嚴重，且持續(xù)時間更長。第二部分①手術創(chuàng)傷誘導老齡大鼠外周血HMGB1表達上調與POCD密切相關。②外周血HMGB1增加可能是引起海馬區(qū)血腦屏障受損及進一步神經炎癥的機制之一。③HMGB1RAGE通路激活可能是手術刺激引起術后認知功能障礙的機制之一。

簡介：該研究以中國1987年從廣西一登革熱患者血清中分離的D243株為對象對其進行了基因組全序測定并與從DHF病人血清中分離的D204株序列比較結果表明D243株基因組全長10723個核苷含有單一的開放讀碼框編碼3391個氨基酸5和3端非編碼區(qū)分別為96個核苷酸和454個核苷酸D243株與D204株核苷酸序列的同源性為951﹪氨基酸序列的同源976﹪不存在特別的高變區(qū)這兩株序列中共有83個核苷酸的變化導致了氨基酸的變化其中結構區(qū)有26個非結構區(qū)有57個其中5NTR的第59位核苷酸3NTR的15個差異核苷酸PRM蛋白的第28位氨基酸E蛋白的第126位氨基酸NS1蛋白的246位、261位及347位氨基酸為可能引起毒力改變的位點基因型分析結果表明D243株與引起DF的新幾內亞NGC株均屬Ⅱ型而D204株的基因型為Ⅲ型表明這國存在不同基因型的登革2型病毒感染